体型控制器：S6K1相关磷酸化抗体介绍

体型控制器：S6K1，相关磷酸化抗体介绍前言S6K1是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，因能介导核糖体蛋白S6磷酸化而得名。众所周知，胞内蛋白磷酸化在多种生理及病理过程中发挥重要作用，并与癌症的发生发展关系密切。除此之外，S6K1还有控制体型的功能，下文我们将详细描述。01S6K1概述S6K1（RibosomalproteinS6kinasebeta-1）主要由三个结构域组成，分别是N端结构域（NTD）、中间激酶结构域（KD）和C端自抑制结构域（CTD）（如图1）。S6K1具有两种形式：p70和p85，两者的区别是p70相较于p85缺失N端的23个氨基酸的核定位序列(NLS），其余序列完全一致，所以S6K1的WB结果往往呈现双条带的显影。S6K1结构示意图（源自参考文献：/10.1016/j.lfs.2015.03.001）S6K1介导核糖体蛋白S6的磷酸化，发挥调节转录、细胞周期及维持细胞生成等作用，在癌症的发生发展中具有重要作用。S6K1是雷帕霉素靶蛋白（mTOR）下游的一个重要效应器，同时也是一个前沿的药物靶点。根据药融云数据显示，全球在研的S6K1靶点药物共有26个，大部分处于药物发现阶段，其中走在最前列的是默克公司的DIACC-3010（临床Ⅲ期），靶向多种肿瘤。02S6K1调控体型研究S6K1的激活是一个多步骤调控的过程。静息状态下，S6K1的C端自抑制结构域与N端结合，不展现激酶活性。但是当C端多位点磷酸化之后，S6K1转变为开放构象，暴露出389位的苏氨酸位点（p70S6K1的T389对应p85S6K1的T412），并被mTORC1复合物磷酸化，进而展示激酶活性。S6K1磷酸化S6的位点有Ser235、Ser236、Ser240、Ser244、Ser247等。在细胞模型中，如果将S6五个磷酸化位点（Ser235、Ser236、Ser240、Ser244、Ser247）进行丙氨酸（Ala）替换，导致S6K1无法磷酸化S6，则MEF、胰岛β细胞会增强蛋白合成、加快细胞分裂速度，造成细胞体型明显变小。细胞生长和增殖的速率与蛋白质合成的速率成正比。在正常细胞过程中，当生长因子和营养物质存在时，S6K1会刺激蛋白质合成。在小鼠模型中，同样在高脂肪饮食喂养的情况下，S6K1基因缺陷小鼠体重相比野生型少30%以上，且主要是脂肪积累减少。结果表明氧化磷酸化途径的上调和胰岛素敏感性的提高，S6K1基因缺陷小鼠可避免高脂肪饮食引起的肥胖，且负向调节胰岛素信号。因此，S6K1和S6不仅能够调控细胞的体型大小，还能够调控机体的体型大小。高脂肪饮食喂养4个月的小鼠体重变化（源自参考文献：/10.1038/nature02866）磷酸化抗体验证数据RecombinantPhospho-p70S6Kinase1(Thr389)Antibody,RabbitMonoclonal，Cat:110396-R0001特异性验证：磷酸酶处理Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedMCF7,untreated(lineA);treatedwithIGF-1(Cat:10598-HNAE)(100ng/mL,30min;+)(lineB);treatedwithIGF-1andλ-phosphatase(lineC)usingPhospho-S6K1(Thr389)rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110396-R0001)at1:5000dilution(upper),orAnti-RPS6KB1rabbitpolyclonalantibody(Cat:10099-T38)(lower)at1:5000dilution.特异性验证：磷酸化多肽竞争Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedMCF7,untreated(lineA);treatedwithIGF-1(Cat:10598-HNAE)(100ng/mL,30min),withoutpeptide(lineB)orantigen-specificphosphopeptide(lineC)orantigen-specificpeptide(lineD)usingPhospho-S6K1(Thr389)rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110396-R0001)at1:5000dilution.超高稀释度（1:200000）Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedMCF7,treatedwithIGF-1(Cat:10598-HNAE)(100ng/mL,30min),usingPhospho-S6K1(Thr389)rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110396-R0001)(Sino)andotherbrands’antibodies(companyC,companyP)atdilutionof1:1000,1:10000and1:200000.Phospho-S6RibosomalProtein(Ser240,244)Antibody,RabbitMab，Cat:110571-R0018Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedHEK293,untreated(-)ortreatedwith20%FBS,usingPhospho-S6RibosomalProtein(Ser240,244)Antibody,RabbitMAb(upper),orAnti-RPS6Antibody,RabbitPolyclonal(Cat:100676-T32)(lower)at1:1000dilution.Phospho-S6RibosomalProtein(Ser235,236)Antibody,RabbitMAb，Cat:110595-R0044Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedHek293,untreated(-)ortreatedwithIGF1(100ng/ml,15min;+),usingPhospho-S6RibosomalProtein(Ser235,236)rabbitMonoclonalAntibodyat1:1000dilution(upper)oranti-S6RibosomalProteinantibody(Cat:100676-T32)(lower)at1:1000dilution.【参考文献】1.Jastrzebski,K.,etal.CoordinateregulationofribosomebiogenesisandfunctionbytheribosomalproteinS6kinase,akeymediatorofmTORfunction.GrowthFactors,2007./10.1080/089771907017791012.Ruvinsky,I.,etal.RibosomalproteinS6phosphorylationisadeterminantofcellsizeandglucosehomeostasis.GenesDev,2005./10.1101/gad.3516053.Tavares,M.R.,etal.TheS6Kproteinfamilyinhealthanddisease.LifeSci,2015./10.1016/j.lfs.2015.03.001Um,S.H.,etal.AbsenceofS6K1protectsagainstage-anddiet-inducedobesitywhileenhancinginsulinsensitivity.Nature,2004./10.1038/nature028664.Yamashita,D.,etal.hDREFregulatescellproliferationand