探究 实践 DNA的粗提取和鉴定 教学课件

DNA的粗提取与鉴定

思考：如何将DNA提取出来，并进行鉴定呢?（一）基础知识基本思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。（二）DNA粗提取的原理---DNA的溶解性和耐受性1、DNA不溶于酒精溶液

DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可初步分离DNA与蛋白质。2、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶—水解蛋白质，对DNA没有影响。②高温—大多数

在60～80℃时变性沉淀,而

在

80℃以上才会变性。③洗涤剂—溶解细胞膜，

去除

;

但对DNA没有影响。蛋白质DNA脂质、蛋白质4、DNA的鉴定在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此用二苯胺试剂鉴定DNA分子。DNA+二苯胺沸水浴蓝色（三）目的要求1、了解DNA的物理化学性质；理解DNA粗提取

和鉴定的原理2、学会DNA粗提取的方法以及利用二苯胺试剂

对DNA进行鉴定（四）材料用具

不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为如下提供的材料中哪些不适合提取DNA？为什么？供选材料：（括号内为染色体条数）新鲜洋葱（16）、香蕉、菠菜（12）、菜花、猕猴桃（58）；猪肝（38）、鱼卵、鸡血（78）、哺乳动物的成熟红细胞；在液体培养基中培养的大肠杆菌（1）原则上，凡是含有DNA的生物材料都可以考虑选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。1、实验材料的选取2、实验用具烧杯、量筒、玻璃棒、研钵、纱布、漏斗、试管、试管架、试管夹、酒精灯、石棉网、三脚架、火柴、刀片和天平等。（五）方法步骤：1.研磨洋葱2.过滤获取含DNA的上清液3.冷却酒精析出DNA4.DNA的鉴定称取约30g洋葱切碎，放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨。1.研磨洋葱在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。也可直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中。2.过滤获取含DNA的上清液研磨洋葱或将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。3.冷却酒精析出DNA在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2~3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。4.DNA的鉴定取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。4.DNA的鉴定1号试管2号试管加入2mol/LNaCl溶液5mL5mL丝状物(DNA)不加加入用玻璃棒搅拌无丝状物溶解加入二苯胺试剂4mL4mL沸水浴5min5min观察现象不变蓝变蓝鉴定结果操作提示①获取材料时，选取DNA含量多的，不同实验材料提取DNA的方法可能稍有不同。②粗提取DNA时，用玻璃棒搅拌含有悬浮物的溶液时，不要直插烧杯底部，搅拌要轻缓、并沿一个方向，以便获得较完整的DNA分子。③二苯胺试剂现配现用，否则会影响鉴定结果。④查阅资料了解实验室提取纯度高的DNA的方法。1、DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它们都是有机物但都溶于酒精。（）2、做DNA粗提取实验时，可用新鲜猪血材料。（）3、在沸水浴的条件下，DNA被甲基绿染成蓝色。（）4、DNA能够耐受蛋白酶是因为酶具有专一性。（）5