2025届天津市静海区高三下学期第六次检测生物试卷含解析

2025届天津市静海区高三下学期第六次检测生物试卷注意事项1．考生要认真填写考场号和座位序号。2．试题所有答案必须填涂或书写在答题卡上，在试卷上作答无效。第一部分必须用2B铅笔作答；第二部分必须用黑色字迹的签字笔作答。3．考试结束后，考生须将试卷和答题卡放在桌面上，待监考员收回。一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1．某生物兴趣小组观察了几种生物不同分裂时期的细胞，并根据观察结果绘制出如下图形。下列与图形有关的说法正确的是()①甲图所示细胞处于有丝分裂后期，在此时期之前细胞中央出现了赤道板②甲图所示细胞中，着丝点分裂后正常形成的2个子染色体携带遗传信息相同③乙图所示细胞可能处于减数第一次分裂后期，此阶段发生同源染色体的分离④乙图所示细胞中某一极的染色体数目可能为2N⑤丙图结果可能来自于植物的雄蕊和雌蕊以及动物精巢等部位细胞⑥如果丙图表示精巢内的几种细胞，则C组细胞可发生联会并产生四分体A．②③⑤ B．①④⑥ C．②③⑤⑥ D．②③④⑤⑥2．在植物的抗冷胁迫过程中，脱落酸（ABA起到关键的作用。为探究一定浓度范围内的ABA对不同品系番茄幼苗叶片在抗冷胁迫中的影响，研究人员进行的相关实验结果如图。（注：相对电导率可反映细胞膜受损程度，细胞膜受损越大，相对电导率越大。）下列分析正确的是（）A．脱落酸参与植物细胞氧化分解増加产热，从而提髙抗寒能力B．本实验的自变量是脱落酸浓度和温度，因变量是相对电导率C．根据实验结果可以得出ABA的作用具有两重性D．图中ABA浓度对番茄幼苗叶片的抗冷胁迫具有促进作用3．下列不符合生态工程基本原理的说法是（）A．超载放牧导致草地退化，主要违背协调与平衡原理B．矿区生态环境的恢复工程中，关键是土壤微生物群的构建和植被恢复C．城市生活垃圾实现废物资源化利用依据的是物质循环再生原理D．退耕还湿地和建立自然保护区的主要目的是为了给人类提供游览胜地4．有关32P标记的噬菌体侵染大肠杆菌实验的叙述，正确的是（）A．培养时间越长，含32P的子代噬菌体比例越高B．子代噬菌体合成蛋白质外壳涉及的RNA只有mRNA和tRNAC．噬菌体及大肠杆菌的遗传信息传递过程能体现中心法则的全部内容D．培养时间过短或过长，离心后放射性主要在上清液5．生物大分子的功能与其空间结构密切相关，下列关于生物大分子空间结构的说法正确的是（）A．蛋白质分子的空间结构是决定其功能的唯一因素B．tRNA分子的空间结构与其碱基对之间的氢键无关C．淀粉、糖原、纤维素空间结构的不同与其单体种类无关D．高温可以使所有生物大分子的空间结构发生不可逆破坏6．神经调节是动物和人体生命活动调节的重要方式。下列叙述错误的是（）A．兴奋在反射弧上的传导是单向的，因为兴奋只能由突触前膜传递到突触后膜B．兴奋在神经纤维上以电信号的形式传导，在神经元之间以化学信号的形式传递C．感受器由传入神经末梢组成，效应器由传出神经末梢及它所支配的肌肉或腺体等组成D．兴奋产生的生理基础是由于K+外流、Na+内流而导致膜内外电位改变，产生局部电流二、综合题：本大题共4小题7．（9分）研究发现，植物的Rubisco酶具有“两面性”，CO2浓度较高时，该酶催化C5与CO2反应，完成光合作用；O2浓度较高时，该酶催化C5与O2反应，产物经一系列变化后到线粒体中会产生CO2，这种植物在光下吸收O2产生CO2的现象称为光呼吸。请回答：（1）Rubisco酶的存在场所为________，Rubisco酶既可催化C5与CO2反应，也可催化C5与O2反应，这与酶的专一性相矛盾，其“两面性”可能因为在不同环境中酶________发生变化导致其功能变化。（2）在较高CO2浓度环境中，Rubisco酶所催化反应的产物是________，该产物进一步反应还需要______________（物质）。（3）夏季中午，水稻会出现“光合午休”，此时光合作用速率明显减弱，而CO2释放速率明显增强，其原因是________。（4）研究表明，光呼吸会消耗光合作用新形成有机物的1/4，因此提高农作物产量需降低光呼吸。小李同学提出了如下减弱光呼吸，提高农作物产量的措施：①适当降低温度；②适当提高CO2浓度；不能达到目的措施是_________（填序号），理由是__________________。（5）与光呼吸相区别，研究人员常把细胞呼吸称为“暗呼吸”，从反应条件和场所两方面，列举光呼吸与暗呼吸的不同___________________________________。8．（10分）家蚕的性别决定方式为ZW型，家蚕体色正常与油质透明为一对相对性状，油质透明由Z染色体上的隐性基因b控制，且在W染色体上没有其等位基因。回答下列问题：（1）用正常雄性与油质透明雌性杂交得到F1，F1只有一种表现型，则杂交亲本的基因型为_____，F1个体自由交配，F2会出现油质透明的家蚕，其性别是____性。（2）为了给饲养场提供产丝能力强的雄蚕，科研人员选择基因型为_________的亲本进行杂交，使其子代中雌性均为油质透明，雄性均为正常。（3）位于常染色体上的D/d基因，当d基因纯合时可使雄蚕性反转成不育的雌蚕，但对雌蚕没有影响。在考虑D/d基因的情况下，若一只纯合正常雄蚕与一只纯合油质透明雌蚕杂交，所得F1代的雌雄蚕随机交配，F2代雌雄比例为5︰3，则亲本雌蚕的基因型为_____，F2代雌蚕中共有______种基因型，其中不含W染色体的个体所占比例为______。9．（10分）由苯丙氨酸羟化酶基因突变引起的苯丙氨酸代谢障碍，是一种严重的单基因遗传病，称为苯丙酮尿症(PKU)，正常人群中每70人有1人是该致病基因的携带者(显、隐性基因分别用A、a表示)。图1是某患者的家族系谱图，其中Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅱ3及胎儿Ⅲ1(羊水细胞)的DNA经限制酶Msp玉消化，产生不同的片段(kb表示千碱基对)，经电泳后用苯丙氨酸羟化酶cDNA探针杂交，结果见图2。请回答下列问题:(1)Ⅰ1、Ⅱ1的基因型分别为________。(2)依据cDNA探针杂交结果，胎儿Ⅲ1的基因型是_______。Ⅲ1长大后，若与正常异性婚配，生一个正常孩子的概率为________。(3)若Ⅱ2和Ⅱ3生的第2个孩子表型正常，长大后与正常异性婚配，生下PKU患者的概率是正常人群中男女婚配生下PKU患者的_______倍。(4)已知人类红绿色盲症是伴X染色体隐性遗传病(致病基因用b表示)，Ⅱ2和Ⅱ3色觉正常，Ⅲ1是红绿色盲患者，则Ⅲ1两对基因的基因型是________。若Ⅱ2和Ⅱ3再生一正常女孩，长大后与正常男性婚配，生一个红绿色盲且为PKU患者的概率为_______。10．（10分）凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，研究人员利用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达。如图表示EcoRⅠ、BamHⅠ、PstⅠ三种限制酶在质粒和含凝乳酶基因的外源DNA片段上的切割位点．回答下列问题：（1）根据图中EcoRⅠ、BamHⅠ、PstⅠ三种限制酶的切割位点分析，该工程中最不适宜用来切割外源DNA获取目的基因的限制酶是_____，将切割后的质粒和目的基因连接起来需要_____酶．构建好的重组质粒在目的基因前要加上特殊的启动子，它是_____识别和结合的部位。（2）工业化生产过程中，若采用重组大肠杆菌生产凝乳酶，该过程中将目的基因导人大肠杆菌前，常常用_____处理细胞，使之处于一种能吸收周围环境中的DNA分子的生理状态，这种细胞称为_____细胞。（3）研究发现，如果将该凝乳酶第20位和第24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是_____。该生物工程技术对蛋白质结构的设计和改造，必须通过基因来完成，原因是_____。11．（15分）人绒毛膜促性腺激素(HCG)是妊娠后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于检测早孕。图甲是抗HCG单克隆抗体的制备流程示意图，其中X、Y表示细胞，a～f表示操作过程。图乙是医学上定量检测抗原的双抗体夹心法原理示意图，需先将抗体固定并与受检抗原结合形成复合物，再加酶标抗体和底物，加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检抗原的量直接相关，根据颜色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，从而使测定方法达到很高的敏感度。回答下列问题。（1）a过程中培养的Y细胞是____________，b过程中常用____________，____________，____________等方法诱导细胞融合，d所示操作的目的是____________。（2）e过程培养的细胞，首先应保证其处于________________的环境，其次还需要提供充足的营养等条件，其中加动物血清的目的是____________。（3）用双抗体夹心法检测抗原数量，酶标抗体的作用是____________和____________。若现有三种抗HCG单克隆抗体，分别记为A、B、C。为检测它们之中哪两种适合用于双抗体夹心法，科研人员需要进行____________组实验，检测并比较各组实验的产物量，以便得出结论。

参考答案一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1、A【解析】

根据题意和图示分析可知：图甲细胞中含有同源染色体，着丝点分裂，染色体移向细胞两极，处于有丝分裂后期；图乙中染色体、染色单体、DNA之间的比例为1：2：2，并且染色体数为2N，因此可能处于有丝分裂的前期或中期、减数第一次分裂的前期、中期后期。

图丙中，A组细胞中染色体数为N，即染色体数目减半，可以表示减二的前期、中期、末期；B组细胞中染色体数目为2N，可以表示有丝分裂的间期、前、中、末期，减Ⅰ时期和减Ⅱ后期；C组细胞中染色体数目为4N，为体细胞的两倍，只可能表示有丝分裂的后期。【详解】①甲图所示细胞处于有丝分裂后期，在此时期之前，染色体排列在细胞中央的赤道板上，但赤道板并不是真实存在的结构，①错误；②由于DNA的复制是半保留复制，所以正常情况下姐妹染色单体上的遗传信息是相同的，故甲图所示细胞中，着丝点分裂后正常形成的2个子染色体携带遗传信息相同，②正确；③乙图所示细胞中DNA含量为4N，染色体数与体细胞中相同，为2N，可能处于减数第一次分裂后期，此阶段发生同源染色体的分离，③正确；④乙图细胞含有染色单体，可表示减数第一次分裂后期，移向一极的染色体应为体细胞的一半。若细胞中某一极的染色体数目为2N，则只能表示有丝分裂后期，而有丝分裂后期不含姐妹染色单体，④错误；⑤丙图细胞中染色体数最多为4N，可表示有丝分裂后期，染色体数最少为N，说明还可以发生减数分裂，故丙图结果可能来自于植物的雄蕊和雌蕊以及动物精巢等部位细胞，⑤正确；⑥C组细胞染色体数为4N，只能表示有丝分裂后期，不会发生联会并产生四分体，⑥错误。综上分析，A正确，BCD错误。故选A。【点睛】本题考查了有丝分裂和减数分裂的相关知识，要求考生能够识记有丝分裂和减数分裂过程中的DNA、染色体、染色单体等数量变化，能够根据数量确定分裂时期，并能够识记相关时期的细胞特点，进而对选项逐项分析。2、D【解析】

本实验是探究ABA对不同品系（710、704）番茄幼苗叶片在抗冷胁迫中的影响，自变量是脱落酸浓度和植物品系的不同，因变量是相对电导率，分析曲线图可知：704品系的番茄幼苗再脱落酸浓度为300（mg/l）时相对电导率低，抗寒能力强，710品系的番茄幼苗再脱落酸浓度为200（mg/l）时相对电导率低，抗寒能力强。【详解】A、脱落酸是植物激素，起调节作用，不能参与植物细胞氧化分解增加产热，A错误；B、本实验的自变量是脱落酸浓度和番茄品系，B错误；C、根据实验结果不能得出ABA的作用具有两重性，C错误；D、图中ABA浓度对应电导率（细胞受损程度）都低于0浓度对应的电导率（细胞受损程度），所以对番茄幼苗叶片的抗冷胁迫具有促进作用，D正确。故选D。【点睛】本题借助于脱落酸对番茄抗寒的影响，考查考生分析曲线图，获取有效信息的能力，属于中等难度题。3、D【解析】

生态工程依据的基本原理：（1）物质循环再生原理：物质能在生态系统中循环往复，分层分级利用；（2）物种多样性原理：物种繁多复杂的生态系统具有较高的抵抗力稳定性；（3）协调与平衡原理：生态系统的生物数量不能超过环境承载力（环境容纳量）的限度；（4）整体性原理：生态系统建设要考虑自然、经济、社会的整体影响；（5）系统学和工程学原理：系统的结构决定功能原理：要通过改善和优化系统结构改善功能；系统整体性原理：系统各组分间要有适当的比例关系，使得能量、物质、信息等的转换和流通顺利完成，并实现总体功能大于各部分之和的效果，即“1+1＞2”。【详解】A、超载放牧导致草地退化，主要违背协调与平衡原理，A正确；B、土壤微生物群的构建和植被恢复是矿区生态环境的恢复工程中的关键的措施，B正确；C、城市生活垃圾实现废物资源化利用依据的是物质循环再生原理，C正确；D、退耕还湿地和建立自然保护区的主要目的是为了保护野生动植物，D错误。故选D。4、D【解析】

噬菌体是一种病毒，病毒是比较特殊的一种生物，它只能寄生在活细胞中，利用宿主细胞的原料进行遗传物质的复制和蛋白质外壳的合成。

T2噬菌体侵染细菌的实验步骤：分别用35S或32P标记噬菌体→噬菌体与大肠杆菌混合培养→噬菌体侵染未被标记的细菌→在搅拌器中搅拌，然后离心，检测上清液和沉淀物中的放射性物质。【详解】A、合成子代噬菌体DNA的原料均由细菌提供，且DNA复制方式为半保留复制，因此子代噬菌体中有少数含有亲代的DNA链（含32P），且培养时间越长，子代噬菌体数目越多，含32P的子代噬菌体比例越低，A错误；B、子代噬菌体合成蛋白质外壳涉及的RNA有mRNA、tRNA和rRNA（核糖体的组成成分），B错误；C、噬菌体及大肠杆菌的遗传信息传递过程包括DNA分子的复制、转录和翻译过程，没有逆转录和RNA的复制过程，C错误；D、培养时间过短部分噬菌体没有侵染到大肠杆菌细胞内，经离心后分布于上清液中，使上清液放射性含量升高，培养时间过长噬菌体在大肠杆菌内增殖后释放子代，经离心后分布于上清液中，也会使上清液的放射性含量升高，D正确。故选D。【点睛】本题考查噬菌体侵染细菌的实验，要求考生识记噬菌体的结构，明确噬菌体没有细胞结构；识记噬菌体繁殖过程，明确噬菌体侵染细菌时只有DNA进入细菌；识记噬菌体侵染细菌实验步骤，能结合所学的知识准确判断各选项难点是对于该实验的误差分析。5、C【解析】

高温、强酸、强碱使蛋白质空间结构破坏，这种破坏是不可逆的。高温也可以使DNA变性，但是降温后，DNA又可以复性，恢复双螺旋结构。【详解】A、氨基酸的种类、数目、排列顺序不同和蛋白质的空间结构不同导致蛋白质结构不同，进而决定蛋白质的功能，A错误；B、tRNA在某些区域折叠形成局部双链，通过氢键相连，形成tRNA分子的“三叶草”结构，B错误；C、淀粉、糖原、纤维素空间结构不同，其单体都为葡萄糖，C正确；D、DNA在高温下氢键断裂，双螺旋结构被破坏，温度下降还可以复性，D错误。故选C。【点睛】本题考查蛋白质、核酸、多糖的结构组成与功能之间的关系，意在考查对所学知识的理解和应用。6、D【解析】

人体神经调节的方式是反射，反射的结构基础是反射弧，反射弧由感受器、传入神经、神经中枢、传出神经和效应器五部分构成，兴奋在反射弧上单向传递，兴奋在突触处产生电信号到化学信号再到电信号的转变。据此分析解答。【详解】A、由于神经递质只能从突触前膜释放并作用于突触后膜，使兴奋在突触处只能由突触前膜向突触后膜传递，所以兴奋在反射弧上的传导是单向的，A正确；B、兴奋在神经纤维上以电信号的形式传导，在神经元之间兴奋通过神经递质传递，即以化学信号的形式传递，B正确；C、感受器由传入神经末梢组成，效应器由传出神经末梢及它所支配的肌肉或腺体等组成，C正确；D、神经纤维未受刺激时，膜对钾离子有通透性，钾离子外流，形成静息电位（外正内负）；受到刺激产生兴奋时，细胞膜上的钠离子通道打开，钠离子内流，形成动作电位（外负内正），D错误。故选D。二、综合题：本大题共4小题7、叶绿体基质空间结构C3[H]、ATP气孔关闭，CO2浓度降低，O2浓度较高，光呼吸增强①温度降低，酶活性减弱，光呼吸减弱的同时光合作用也减弱，达不到提高农作物产量的目的。光呼吸需要光，暗呼吸有光无光均可；光呼吸的场所为叶绿体和线粒体，暗呼吸的场所为细胞质基质和线粒体。【解析】

1.光合作用的具体的过程：①光反应阶段：场所是类囊体薄膜a．水的光解：2H2O4[H]+O2b．ATP的生成：ADP+PiATP②暗反应阶段：场所是叶绿体基质a．CO2的固定：CO2+C5

2C3b．三碳化合物的还原：2C3（CH2O）+C5+H2O【详解】（1）题意显示Rubisco酶能催化C5与CO2反应，该反应进行的场所是叶绿体基质，故该酶存在场所应为叶绿体基质，Rubisco酶既可催化C5与CO2反应，也可催化C5与O2反应，这与酶的专一性相矛盾，根据结构与功能相适应的原理可知，其“两面性”的原因可能是在不同环境中酶空间结构发生变化导致的。（2）在较高CO2浓度环境中，Rubisco酶催化C5与CO2反应生成C3，接下来进行C3的还原，该反应的进行还需要光反应提供的[H]、ATP。（3）夏季中午，由于温度太高，气孔关闭，CO2浓度降低，O2浓度较高，光呼吸增强，所以水稻会出现“光合午休”，表现为光合作用速率明显减弱，而CO2释放速率明显增强。（4）①适当降低温度，酶活性减弱，光呼吸减弱的同时，光合作用也减弱，达不到增产的目的，因此不能通过①适当降低温度来达到增产的目的；而可以通过②适当提高CO2浓度，Rubisco酶催化C5与CO2反应，完成光合作用，进而提高了光合作用速率而到处增产的目的。（5）与光呼吸与细胞呼吸区别表现为两个方面，从反应条件来看，光呼吸需要在光下进行，而细胞呼吸（暗呼吸）有光无光均可；从反应场所来看，光呼吸的场所为叶绿体和线粒体，暗呼吸的场所为细胞质基质和线粒体。【点睛】熟知光合作用的过程以及光反应与暗反应的联系是解答本题的关键！能够结合题干信息理解光呼吸的过程并能辨别光呼吸与暗呼吸的区别是解答本题的另一关键！8、ZBZB，ZbW雌ZbZb×ZBWddZbW81/5【解析】

某种家蚕的性别决定是ZW型，雄蚕和雌蚕的性染色体组成分别是ZZ和ZW，由题目中的信息可知，油质透明雄性的基因型为ZbZb，正常雄性的基因型为ZBZB和ZBZb，油质透明雌性基因型为ZbW，正常雌性基因型为ZBW，根据题目中的问题进行分析判断才能做出准确回答。【详解】（1）用正常雄性与油质透明雌性杂交得到F1，F1只有一种表现型，说明亲本雄性的基因型为ZBZB，雌性为ZbW；F1个体的基因型为ZBZb和ZBW，表现型为雌雄都为正常，F1个体随机交配得F2中出现油质透明的基因型为ZbW，其性别为雌性。（2）为了给饲养场提供产丝能力强的雄蚕，则应该通过杂交获得油质透明的雌蚕（ZbW），选择油质透明的雄蚕（ZbZb）和正常雌蚕（ZBW）杂交，这样后代雄蚕都是正常（ZBZb），雌蚕都是油质透明（ZbW）。（3）由题意知，D（d）、B（b）分别位于2对同源染色体上，因此遵循自由组合定律，让一只纯合正常雄蚕与一只纯合油质透明雌蚕杂交，所得F1代的雌雄蚕随机交配，如果不考虑D/d，F2代雌雄比例为1︰1，而考虑D/d基因，F2代雌雄比例为5︰3，说明有1/8雄蚕发生性逆转，dd的概率是1/4，子一代的基因型是Dd×Dd，亲代雄蚕基因型是DDZBZB，雌蚕基因型是ddZbW；子一代的基因型是DdZBZb、DdZBW，子二代雌蚕基因型是D_ZBW、D_ZbW、ddZBW、ddZbW、ddZBZ-，8种；不含W染色体的雌蚕个体是ddZBZ-，占2/10=1/5。【点睛】本题旨在考查学生理解基因分离定律和自由组合定律的实质，ZW型的性别决定和伴性遗传，基因对性状的影响，把握知识的内在联系，形成知识网络，并应用相关知识结合题干信息进行推理、综合解答问题。9、Aa、aaAa279/28046.67AaXbY1/3360【解析】

分析图1：Ⅰ1、Ⅰ2都正常，但他们有一个患病的女儿，即“无中生有为隐性，隐性看女病，女病男正非伴性”，说明该病为常染色体隐性遗传病。分析图2：Ⅱ1为隐性纯合子，其DNA经限制酶Msp处理后只形成一种片段；Ⅱ2、Ⅱ3及胎儿Ⅲ1（羊水细胞）的DNA经限制酶Msp处理都得到两种长度的片段，说明他们都是杂合子。【详解】（1）由于Ⅰ1、Ⅰ2正常，而Ⅱ1患病，说明苯丙酮尿症的遗传方式是常染色体隐性遗传，则Ⅱ1基因型是aa，Ⅰ1基因型是Aa。（2）由图2可知，Ⅱ1基因型是aa，推测Ⅱ2、Ⅱ3、Ⅲ1基因型均为Aa。正常个体的基因型是69/70AA、1/70Aa，与Ⅲ1（Aa）婚配，生一个正常孩子（A_）的概率是69/70×1+1/70×3/4＝279/280。（3）Ⅱ2和Ⅱ3的基因型都是Aa，其孩子正常的基因型是1/3AA或2/3Aa，与一正常异性（69/70AA、1/70Aa）婚配，后代患病（aa）的概率是2/3×1/70×1/4＝1/420，而两个正常男女（69/70AA、1/70Aa）婚配，后代患病（aa）的概率是1/70×1/70×1/4＝1/19600，前者是后者的46.67倍。（4）结合图2可知，Ⅲ1基因型均为Aa，又红绿色盲是伴X染色体隐性遗传，由于Ⅱ2、Ⅱ3色觉正常，Ⅲ1患红绿色盲，则Ⅱ2、Ⅱ3基因型分别是XBY和XBXb，则Ⅲ1基因型是XbY，综合Ⅲ1基因型是AaXbY，Ⅱ2、Ⅱ3基因型分别是AaXBY和AaXBXb，再生一正常女孩，基因型是（1/3AA、2/3Aa）（1/2XBXB、1/2XBXb）与一正常男性[（69/70AA、1/70Aa）XBY]婚配，后代患两种病（aaXbY）的概率是2/3×1/70×1/4×1/2×1/4＝1/3360。【点睛】解决本题的关键思路：一是根据系谱图分析出该遗传病的遗传方式；二是根据电泳结果分析系谱成员的基因型；三是在计算（3）和（4）小题注意一个个体具有多种基因型的可能性，以及两对等位基因要注意分开单独分析。10、EcoRⅠDNA连接酶RNA聚合酶Ca2+感受态蛋白质工程基因决定蛋白质【解析】

基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA﹣﹣分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质﹣﹣抗原﹣抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。【详解】（1）含有目的基因的外源DNA分子上含有EcoRⅠ、BamHⅠ、PstⅠ三种限制酶的切割位点，其中EcoRⅠ的切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因，因此不能用该酶切割；将切割后的质粒和目的基因连接起来需要DNA连接酶．启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，能启动转录过程。（2）将目的基因导入微