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GB/T35904—2018旋毛虫实时荧光PCR检测方法中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局IGB/T35904—2018本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。1GB/T35904—2018旋毛虫实时荧光PCR检测方法本标准规定了旋毛虫实时荧光PCR检测的操作方法。2规范应引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3仪器3.1荧光PCR仪。3.2高速冷冻离心机。3.10无菌离心管。4试剂4.2本方法试验用水符合GB/T6682规定的一级水。5对照样品含有5条/g以上的国际标准种Trichinellaspiralis(T1)或Trichinellanativa(T2)旋毛虫的大鼠经检测不含有旋毛虫的大鼠肉样。2GB/T35904—2018肉上剪取约0.5g肉样10粒，合并成一个45s～60s,使其彻底匀浆，然后放入含有液氮的研钵中充分研磨，继续进行核酸提取，或置-20℃贮存8荧光PCR操作程序可使用经验证的商品化组织DNA提取试剂盒提取DNA。8.2荧光PCR检测8.2.2荧光PCR反应体系25μL荧光PCR反应体系包括：GB/T35904—2018Mg²+(25mmol/L)2.4μLDNA模板5.0μL荧光素设定：报告荧光(reportdye)设定为FAM,淬灭荧光(quenchdye)设定为None,校准荧光读取每个样品Ct值。标准阳性对照有特异性扩增曲线而且Ct值≤30,标准阴性对照和空白对照9.2.3

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