DB21∕T 2592.1-2016 鸡传染性疾病检测方法 第1部分：鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR 检测方法_第1页
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DB21DB21/T2592.1—2016鸡传染性疾病检测方法第1部分：鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR检测方法TestingmethodofchickeninfectiousdiseasePart1：Thetestingmethodofreal-timefluorescentRT-PCRforchickeninfectiousbursaldiseasevirus辽宁省质量技术监督局发布1 2 3 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5 6 6 6 6 6 6 6 6 7 82——鸡传染性法氏囊病毒实时荧光RT-PCR检测方法；——鸡传染性支气管炎病毒实时荧光RT-PCR检测方——鸡马立克氏病毒实时荧光PCR检测方法。本标准负责起草单位：辽宁省动物医学研究院、辽宁省动物疫3本标准规定了鸡传染性法氏囊病毒荧光RT-PCR检测的样品采集、件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用GB/T6682—2008分析实验室用水RT-PCR：反转录—聚合酶链式反应(reversetranscription-polymerasechainreactiRNA：核糖核酸(ribonucleicacDEPC：焦碳酸乙二酯（diethypyrocarbonatePBS：磷酸盐缓冲盐水(phosphatebuffersali4材料与试剂4.1.3混匀器、冰箱（2℃~8℃和-20℃两种特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯，44.2.575%乙醇：用新开启的无水乙醇和DEPC水（符合GB6682－2008要求4.2.11SYBRGreen试剂盒（Eppendorf管、研钵。5次取咽喉分泌液；取泄殖腔拭子时将拭子深1.0mLPBS(见附录A)的1.5mLEppendorf管中，加盖、编号。采集肌肉或组织脏器。待检样品装入一次性塑料袋或其它灭菌容器，5样品在混合器上充分混合后，用高压灭菌镊子将拭子中的液体挤出，室温放置30min，取上清液转入无菌的1.5mLEppendorf心15min，取上清液转入无菌的1.5mLEppendorf管中，编号备用。制备的样品在2℃~8℃条件下保存应不超过24h，若需长期保存应置-70℃以下，但应避免反复冻6.2.1取n个灭菌的1.5mLEppendorf管，其中n为被检样品、阳性对照与阴性对照的和，编号。67磷酸盐缓冲盐水（PBS）配方A.1A液NaH2PO4Na2HPO4A.30.01mol/L、pH7.2磷酸盐缓冲盐水的配制0.2mol/LB液36mL8实验室应分为三个相对独立的工作区域：样品制备区、反各工作区域有明确标记，须有专用的仪器设备，不同工作区域内的设备实验室清洁时应按样品制备区、反应体系配2℃~8℃冰箱；2℃~8℃冰箱；9样品的保存，核酸提取、贮存及其加入至扩增反应管在样品为避免样品间的交叉污染，加入待测核酸后，必须立即盖次工作后都要清洁，实

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