中药制剂的鉴别专家讲座

中药制剂判别教学纲领掌握怎样建立中药制剂薄层色谱定性判别方法。熟悉中药制剂显微判别、荧光判别、可见－紫外光谱判别方法。了解中药制剂气相色谱、高效液相色谱定性判别方法。

中药制剂的鉴别专家讲座第1页第一节性状判别概念1.中药制剂判别：利用一定方法来确定中药制剂中原料药组成，从而判断该制剂真伪。2.中药制剂判别主要内容：包含性状判别、显微判别、理化判别等方面，有时在性状判别中还应作对应物理常数测定。3.中药制剂性状：除去包装后性状，指成品颜色、形态、气味等。中药制剂的鉴别专家讲座第2页第一节性状判别性状判别内容及描述方法：①颜色：从单一色到组合色不等，如红色深褐色、黄棕色等。②形态：液体可分黏稠液体、液体、澄清液体、澄明液体等。③形状：如栓剂可分为球形、鱼雷形、圆锥形、卵形、鸭嘴形等。④气：可分为香、芳香、清香、腥、臭、特异、气微、芳香浓郁等。⑤味：可分为甜、酸、苦、涩、辛、凉、咸、辣、麻等。⑥其它：光泽感、滑腻感等。中药制剂的鉴别专家讲座第3页第一节性状判别

各种剂型性状描述在描述制剂性状特征时，应以中医药理论为指导。①水丸

沉香化气丸：本品为灰棕色至黄棕色水丸；气香，味微甜、苦。②片剂

牛黄解毒片：本品为素片或包衣片，素片或除去包衣后片芯显棕黄色；有冰片香气，味微苦、辛。③糖浆剂

川贝枇杷糖浆：本品为棕红色黏稠液体；气香，味甜、微苦、凉。中药制剂的鉴别专家讲座第4页第一节性状判别物理常数测定

物理常数包含折光率、旋光度、比旋度、凝点、熔点、相对密度等。测定这些物理常数能够作为定性判别伎俩之一。中药制剂的鉴别专家讲座第5页第二节显微判别概念

中药制剂显微判别：利用显微镜来观察中药制剂中原药材组织碎片、细胞或内含物等特征，从而判别制剂处方组成。

凡以药材粉碎成细粉后直接制成制剂或添加有部分药材粉末制剂，因为其在制作过程中原药材显微特征仍保留到制剂中去，所以均可用显微定性判别法进行判别。中药制剂的鉴别专家讲座第6页第二节显微判别特点及制片方法

①中药制剂普通多由二味以上中药材制备而成，制剂中各原药材和辅料显微1.特点特征会产生相互影响或干扰。 ②因为制备工艺不一样，有些药材本身原有组织结构特征已不存在。中药制剂的鉴别专家讲座第7页第二节显微判别散剂、胶囊剂：取粉末少许，选取适当试液处理后直接进行显微观察。片剂：切开，刮取少许样品，观察；粉末太粗则先研细；糖衣片除去糖衣再研细。水丸、颗粒剂：于乳钵内研成粉末后观察。蜜丸

氢氧化钾法，硝铬酸法，氯酸钾法，水溶法

2制片方法中药制剂的鉴别专家讲座第8页第二节显微判别难点提醒

应注意在本法判别中，只有药材原有组织结构特征能保留到制剂中，才有判别意义。故普通全部由溶剂提取制剂，不用此法进行判别。不一样剂型其制片方法不一样。应选择在该制剂中没有干扰又能表明该味药存在显微特征作为判别依据。中药制剂的鉴别专家讲座第9页第三节理化判别概念1.中药制剂理化判别：利用物理、化学或物理化学方法对制剂中所含化学成份进行定性判别，从而判断制剂真伪。2.中药制剂理化定性判别方法有：普通化学反应法、升华法、光谱法和色谱法等。其中以薄层色谱法最惯用。中药制剂的鉴别专家讲座第10页第三节理化判别

1.化学反应法

2.升华法

3.纸色谱法

4.光谱法薄层色谱法判别方法

5.色谱法薄层扫描法气相色谱法高效液相色谱法

6.其它方法:X射线衍射法、导数光谱法、指纹图谱法等。中药制剂的鉴别专家讲座第11页第三节理化判别化学反应法①以50%～70%乙醇回流提取：提取出多数成份②以酸性乙醇回流提取：检验酚类、有机酸、生物碱等。

A.室温浸泡：检验氨基酸、蛋白质。③以水提取B.60℃热水提取：检验单糖、多糖、皂苷、鞣质及其它苷类。

A.滤液检验酯、内酯、苷元；④以乙醚提取B.药渣挥去乙醚，甲醇回流提取：检验各种苷类⑤以升华法提取：升华成份，如游离蒽醌苷元等⑥以水蒸气蒸馏法提取：挥发性成份。1样品提取中药制剂的鉴别专家讲座第12页第三节理化判别化学反应法①慎用专属性不好化学反应，如泡沫生成反应、三氯化铁显色反应等。2.注意事项②分析前对样品进行分离、精制，除去干扰鉴别反应物质，借此改进判别方法专属性。③采取阴性对照和阳性对照方式，对确定判别方法进行重复验证，预防出现假阳性。中药制剂的鉴别专家讲座第13页第三节理化判别升华法利用该法来判别中药制剂中一些含有升华性质化学成份。操作方法：取金属片，放在圆孔石棉板上，在金属片上放一小金属圈，对准石棉板上圆孔，圈内放入研细成粉末中药制剂一薄层，圈上放一载玻片。在石棉板下圆孔处用酒精等慢慢加热，加热至粉末开始变焦，即去火冷却，可见有升华物附着于载玻片上，将载玻片取下反转，在显微镜下观察其结晶形状、色泽或者加适当试剂观察其颜色反应。中药制剂的鉴别专家讲座第14页第三节理化判别光谱法

1.荧光法

惯用方法

2.可见－紫外分光光度法

3.红外分光光度法

4.等离子体光谱-质谱法中药制剂的鉴别专家讲座第15页第三节理化判别光谱法①适用范围：组成中药制剂中药材中含有能产生荧光化学成份。②操作方法：取制剂提取液点在滤纸上或试纸上，置紫外光灯下（365nm或254nm）观察，或加一定试剂后再进行观察。①要求吸收波长法（最惯用）②对照品对比法③要求吸收波长和吸收度法④要求吸收波长和吸收度比值法⑤多溶剂光谱法1荧光法2紫外－可见分光光度法中药制剂的鉴别专家讲座第16页第三节理化判别光谱法

①在4000～400cm-1范围间测定中药制剂样品红外吸收光谱。②制样方法：取样品直接制样，或经溶剂提取后制样。③该法含有取样量少、快速、简便、准确等特点，但目前用于中药制剂判别报道不多。3红外分光光度法（中红外）

中药制剂的鉴别专家讲座第17页近红外光谱法

波长：780-2526nm(12820-3959cm-1)吸收特征：CH,OH,NH倍频、合频，吸收弱、重合，化学计量学处理后可定性定量特点：在线检测，含水量、颗粒大小、均匀度、含量均一性、硬度、湿度对象：液体、固体粉末、中药浸膏

中药制剂的鉴别专家讲座第18页第三节理化判别色谱法一、纸色谱法概念:以纸为载体，以纸上所含水或其它物质为固定相，用展开剂进行展开分配色谱。用比移值（Rf）表示各组成成份位置，但因为影响比移值原因较多，因而普通采取在相同试验条件下与对照物质对比以确定其异同。中药制剂的鉴别专家讲座第19页第三节理化判别色谱法二、薄层色谱法概念：将适宜吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜对照物按同法在同板上所得色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于中药制剂判别。在中药制剂判别中，薄层色谱法为最惯用方法。为了确保试验重现性、准确性及分离度，薄层色谱法要进行规范化操作。中药制剂的鉴别专家讲座第20页第三节理化判别二、薄层色谱法

1.样品供试液制备样品提取采取惯用提取方法（详见第一章）单一溶剂萃取法分段萃取法供试液净化液－液萃取法固－液萃取法中药制剂的鉴别专家讲座第21页第三节理化判别二、薄层色谱法2.薄层色谱法使用材料

A规格：10cm×10cm，10cm×15cm，

20cm×10cm或20cm×20cm。

B吸附剂或载体：硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254。其颗粒直径为10～40µm。加有煅石膏作粘合剂商品硅胶GC惯用吸附剂加有荧光剂硅胶GF254

加粘合剂羧甲基纤维素钠加酸、碱或缓冲溶液薄层板中药制剂的鉴别专家讲座第22页第三节理化判别二、薄层色谱法2.薄层色谱法使用材料涂布器：手工、半自动薄层涂布器。涂布厚度有固定厚度或能够调整两种。点样器材

A定量点样毛细管（微升毛细管）——最惯用规格：0.5µl、1.0µl、2.0µl、3.0µl、4.0µl、5.0µl、10µl。要求：标示容量准确，管端平整光滑，管壁洁净，液流通畅，无堵塞，无污染。

B微量注射器。中药制剂的鉴别专家讲座第23页第三节理化判别二、薄层色谱法2.薄层色谱法使用材料平底展开箱展开箱（层析缸）双槽展开箱、水平式展开箱。喷雾法：喷雾瓶（在一定压力下使试显色与检测仪器剂喷成均匀细雾状）浸渍法：浸渍槽（将展开后薄层板平稳放入有显色剂浸渍槽数十秒至1分钟后取出显色）中药制剂的鉴别专家讲座第24页第三节理化判别二、薄层色谱法3.操作方法薄层板制备：将1份吸附剂（如硅胶G）加3份左右水在研钵中用研杵沿一个方向充分研磨，调成均匀糊状物，倒入已准备好涂布器中，在玻板上平稳地以直线方向移动涂布器，使硅胶浆均匀地涂布。薄层厚度普通为0.2～0.3mm。涂布好薄层板于室温下在水平台上晾干，再在105℃～110℃活化约30分钟，置干燥器中备用。中药制剂的鉴别专家讲座第25页第三节理化判别二、薄层色谱法3.操作方法点样：用定量微升毛细管，点样距离底边1cm，点间距离为1、1.5或2cm，原点直径小于3mm；如样品容量较大，可点宽约2～3mm不一样长度条带。展开：采取上行展开，薄层板浸入展开剂深度要求溶剂最初前沿距原点5mm，展距7～9cm；需平衡者可用双槽展开箱，如需到达饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿润滤纸使展开箱被蒸气平衡；展开剂要求新鲜配制。中药制剂的鉴别专家讲座第26页第三节理化判别二、薄层色谱法3.操作方法

在日光下观察色谱中色斑；检测置紫外灯下观察荧光色谱；加试剂后显色，直接观察或加热后观察。中药制剂的鉴别专家讲座第27页第三节理化判别二、薄层色谱法

4.薄层色谱图统计与保留：摄影数码摄影复印扫描描画中药制剂的鉴别专家讲座第28页第三节理化判别二、薄层色谱法5.影响薄层色谱分析主要原因样品预处理及供试液制备：中药成份复杂，未知成份多，供试液中相互干扰或背景污染而难以得到满意分离效果，甚至难以识别，故需对样品进行适当提取净化处理。中药制剂的鉴别专家讲座第29页第三节理化判别二、薄层色谱法5.影响薄层色谱分析主要原因

A在常规薄层板上原点直径小于3mm，高效薄层板要求原点直径小于2mm；薄层色谱

B点样量不宜过大，最好控制在10µL以下；

点样技术

C如在一个位置重复屡次点样时，尽可能注意不要将原点点成一个空心圈；

D选取溶剂沸点不宜太高或太低。中药制剂的鉴别专家讲座第30页第三节理化判别二、薄层色谱法5.影响薄层色谱分析主要原因

A薄层板从干燥器中取出后，吸附剂活性取决于试验室环境相对湿度。吸附剂活性

B控制展开时相对湿度：采取一定浓

与相对湿度影响度硫酸溶液或其它调整相对湿度无机盐水溶液控制湿度。中药制剂的鉴别专家讲座第31页第三节理化判别二、薄层色谱法5.影响薄层色谱分析主要原因

A溶剂蒸气相在展开箱中参加色谱展溶剂蒸气在开而形成三维层析过程，从而对薄层

薄层色谱中作用色谱层析过程和结果产生较大影响.B可采取预平衡等方法进行控制。温度影响

温度能影响被分离物质Rf值和物质相互分离度以及斑点扩散等，故试验时应注意温度控制。中药制剂的鉴别专家讲座第32页第三节理化判别二、薄层色谱法6.对照品选择①对照品对照：用已知中药制剂某一药材某一有效成份或特征性成份对照品制成对照液，与样品在同一条件下层析，比较在相同位置上有没有同一颜色（荧光）斑点，以此来（惯用检测制剂中是否含有某原料药材。）②阴阳对照：采取阳性对照液（只含需判别药材）和阴性对照液（不含需判别药材）进行对照判别。③采取对照药材和对照品同时对照。对照方法中药制剂的鉴别专家讲座第33页第三节理化判别色谱法三、薄层扫描法薄层扫描法概念:用一定波长光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光斑点，或经激发后能发射出荧光斑点进行扫描，将扫描得到图谱用于中药制剂判别。

操作方法：薄层板制备→样品液与对照液制备→点样→展开→显色→上机扫描→色谱峰确认。主要用于定量，用于判别较少。中药制剂的鉴别专家讲座第34页第三节理化判别色谱法气相色谱法主要利用保留值进行定性，多用已知物对照法作为定性判别依据。适宜样品为含有挥发油或挥发性成份制剂。中药制剂的鉴别专家讲座第35页第三节理化判别色谱法高效液相色谱法利用化合物在特定色谱柱上，