《植物组织培养》课件-项目六 组培试验方案设计

植物组织培养模块三岗位提升

项目六组培试验方案设计任务1植物离体快繁技术任务2组培试验设计与分析任务3植物脱毒技术任务4组培工厂化生产【知识点】

掌握离体组织的再生途径

组织培养的基本过程

植物微体快繁方法【技能点】会植物快繁技术

素质要求：培养学生无菌意识、创新意识、团队合作意识和生态环保意识；具有任务执行力，规范操作、注意安全；科学严谨、实事求是的工作态度。任务1植物离体快繁技术一、植物离体快速繁殖的概念1、定义又称微体,快繁利用组织培养技术进行的一种营养繁殖方法。在无菌条件下，把离体的植物器官、组织、放在人工控制的环境中，使其分化、繁殖，在短时间内产生大量遗传性一致的完整新植株的技术。2、意义和作用繁殖系数高短期获遗传稳定一致群体获无病毒苗，回复植物原有种性木本植物潜力大，可保持其杂合性推广良种的重要手段工厂化生产无季节限制原始材料少繁殖速度快繁殖周期短3、应用珍惜植物品种和育种原始材料的扩大繁殖繁殖和保存无毒原种材料市场需求大、短期内常规繁殖方法难满足需求的植物经济效益高、难常规营养繁殖植物二、

离体快速繁殖程序（1）无菌培养体系的建立——启动培养（2）增殖培养（3）壮苗生根培养（4）生根苗驯化和移栽（5）再生植株鉴定（1）无菌培养体系的建立从外植体选择、清洗、灭菌、接种和茎芽诱导，到获得茎芽稳定生长和增殖，茎芽繁殖数量可控制的整个时期。目标：获得无惧培养材料，诱导芽的发生。提供合适的试管环境使培养物（茎芽）的生长达到稳定。无菌苗：在无菌条件下，用于试管内继代增殖的植物材料，称为无菌苗或“无菌母株”或“繁殖母株”。外植体的灭菌在一定浓度的灭菌剂药液中浸泡灭菌。药剂灭菌的好坏关系着培养的成功率。根据材料、灭菌剂、经验等决定灭菌剂种类、浓度和处理时间。如：药剂对各种菌类的杀灭效果。如：材料对杀菌剂的忍耐力。把植物材料、灭菌剂及浓度、灭菌时间四者统一考虑。采用多种药剂配合使用。(2)增殖培养促进培养物分化培养，反复继代增殖，达到需要数量。芽增殖途径对增殖结果影响大。芽增殖速度快、慢的关键是培养基。（适宜外源激素种类和浓度配比极其重要）。（细胞分裂素与生长素影响繁殖系数好不定芽质量）试管苗的繁殖速率及计算m为无菌母株苗数，X为每个培养周期增殖的倍数n为全年可增殖的周期数提高繁殖速度的方法：改进培养基：培养基种类、无机及有机成分、糖浓度、琼脂、植物生长调节剂的种类和浓度。（生长素比例大，不定芽生长健壮，细胞分裂素高，繁殖系数高，但组培苗细弱，要将二者比例调整到适宜水平。）改善培养条件：温度、光照（光强、光质、光周期）、湿度、培养器皿、通气状况、培养基的pH值等都与材料的增殖密切相关。培养物保存：当暂时不需要育苗或珍贵资源需保存时，采用低温（1-9℃）进行的中短期保存。芽增殖过程中，值得注意外源激素的累积。长期继代增殖，外源激素的大量积累会造成各种畸形芽（茎）、玻璃化芽,影响不定芽质量。继代培养中需要酌情降低外源激素水平。（3）诱导不定根形成目标：使诱导培养出来的芽丛或不定芽生出不定根，形成完整的小苗（Plantlet）。功能：保证组织培养不定芽生根，提高适应环境能力。壮苗和生根：对不定芽进行壮苗培养，诱导生根。诱导生根的途径试管（瓶）内生根将组织培养茎芽的生根诱导同驯化培养结合在一起，直接将茎芽扦插到试管外有菌环境中，边诱导生根边驯化培养。试管（瓶）外生根在试管内的无菌培养基上诱导生根，生根苗移栽到有菌环境下驯化培养。诱导根分化技术关键：1）调节外源激素种类和浓度。生长素/细胞分裂素。2）调节基本培养基营养组成。3）调大量元素中硝酸盐和铵盐的含量和比例。4）降低大量元素和微量元素的用量。5）调节渗透压，降低糖浓度。(4)生根苗的炼苗驯化和移栽1）将小苗进行分级苗高和根数是评估移栽苗的重要指标。2）移栽前炼苗移植前要加强自然光照，使小苗逐渐适应外界环境。（在自然光的炼苗室中闭口自然光炼苗2-3周，开口炼苗1-3天。待小苗茎叶绿色加深，根系颜色由白色变为黄褐色即可移栽出瓶。）生根苗的炼苗驯化和移栽：3）湿度锻炼：使小苗逐步适应周围环境的湿度。移栽前开瓶盖进行湿度锻炼。4）基质疏松：珍珠岩、蛭石、西沙，营养土、腐殖土等。5）调控光、温、湿等因子：生长季闭口炼苗期间调控光照强度、防雨水影响。部分遮光条件下移栽后管理，保持合适温度。移苗注意：苗盘消毒：用0.1%的高锰酸钾对苗盘进行浸泡消毒或喷淋消毒。基质消毒：对已用过的需用0.1%高锰酸钾喷淋后用自来水冲洗干净。移栽技术：当根系打到一定长度（小于1cm）时移栽，带琼脂少，伤根轻，移栽时应将小苗基部的培养基冲洗干净，切忌伤根和茎叶。如根长，可剪为2-3cm。移栽后根迅速固着于土壤基质并吸收营养。苗盘移栽：将消毒后的蛭石或珍珠岩放在苗盘内，厚度约4-6cm，用水淋透后，将洗净的组培苗栽植在培养基质内，用水喷淋透后放置在拱棚内保护培养2-3周。保持温度和湿度。营养钵移栽：营养钵与营养土的准备：营养土最好采用腐殖土与细沙（或蛭石）按照3：1的比例混合过筛后备用。将组培苗从苗盘提出，栽植在营养钵中，浇一次透水后集中摆放在不易积水的地方，遮荫、保温、保湿。移栽后的管理：遮荫和保湿。移栽初期防止阳光直射，逐渐增加日照时间和强度，提高自养能力，提高成活率。塑料膜保湿和喷雾保湿结合。（5）再生植株的鉴定意义培养时取材部位不同、器官发生途径不同、培养基中各种物质，特别是植物外源激素，对植物细胞构成化学诱变环境。那些在遗传上可塑性强的种和那些易于器官发生型的植物种的再生植株群体，可能会发生变异，故需要进行鉴定。方法1、形态鉴定：在田间对再生株的植物学性状进行鉴定，发现变异株再作细胞学鉴定。2、细胞学鉴定：对再生株群体抽样检查根尖染色体数目以及减数分裂期的染色体行为。3、分子鉴定：抽取再生株中的个体幼嫩叶片，提取DNA，通过分子标记手段，检查标记类型是否与原有品种（系）保持一致。离体快速繁殖程序例:千头椿离体快速繁殖程序及技术要求初始外植体（带芽茎段或茎尖）无菌培养物稳定繁殖体愈伤组织丛生芽嫩梢有效嫩茎试管内生根试管外生根温室苗鉴定大田苗栽植流水冲洗1-4h，70%酒精30s，0.2%HgCl2消毒2-8min，无菌水冲洗3-5次，接种到初代培养基，培养10-20天接种到继代培养，培养30-35天接种到生根培养基，培养10-30天100mg/kgIBA浸30g定植移栽三、组培分化过程的类型不同植物不同外植体类型不同培养基器官再生途径差异大1.无菌短枝和芽丛型选取顶芽或腋芽，促进其生长和诱导不定芽并使其生根形成植株的方式。茎尖会分化出叶片和侧芽，侧芽又再次分化为叶片和侧芽茎尖会诱发腋芽萌发，形成芽丛芽丛被分割成单芽或小芽丛，继代增殖产生大量试管苗顶端优势效应应抑制腋芽生长。将腋芽从植物上分离，给相应培养条件，形成大量不定芽。特点：繁殖率高、繁殖数量大、保持遗传稳定性。例如：草莓，半个月内可增加10倍，1年内1棵草莓可产生数以百万计的试管苗。3）器官发生型从器官诱导愈伤组织，经细胞再分化生成植株的方式。例：禾本科：甘蔗、水稻、小麦、大兰茎草、印度草，百合、浙贝母、小苍兰、菊花、番茄、石刁柏、柑橘、棕桐等。特点：繁殖速度快，遗传性不稳定。4）胚状体发生型由植物器官、组织和细胞培养直接发生类胚结构，以胚状体成苗的方式。胚状体：植物组织培养过程中，起源于一个非合子细胞、经过胚胎发生和胚胎发育过程形成具有双极性的胚状结构，又称体细胞胚直接体胚发生途径：从外植体某些部位直接诱导分化出体细胞胚。（如百合与花序和百合鳞片）间接体胚发生途径：外植体先脱分化形成愈伤组织，再从愈伤组织的某些细胞分化出体细胞胚。（如萝卜、芹菜、苜蓿、一品红、满天星、康乃馨）。特点：遗传性一致，数量大。如胡萝卜1L培养基有10万个以上的胚状体。5）原球茎发生型是兰属特有的器官发生方式，促进兰花栽培变革，建立兰花工业。将兰花茎尖培养于MS培养基，附加适量的椰子汁、NAA和6-BA，经26℃暗培养，分化出乳白色圆球茎，切成数块继代培养到相同的液体培养基上震荡培养，形成大量圆球茎。将丛生的圆球茎转接于固体培养基上，大量增殖，并抽叶生根，形成完整兰花苗。不同器官发生方式对比发生方式优点缺点腋芽型易成苗，对培养基要求低，遗传稳定取材受限器官发生型遗传性不稳定，成苗数量大对培养基要求高，器官发生条件苛刻，染色体容易发生数量和结构变异，较难保持稳定遗传性。胚状体发生型遗传性较稳定，成苗数量大对培养基要求高，器官发生条件苛刻1.植物离体快速繁殖概念2.器官发生方式3.离体快速繁殖程序4.无菌苗定义5.诱导生根的途径6.再生植株的鉴定方法小结【知识点】

了解组培试验方案设计方法【技能点】会简单分析观察结果

素质要求：培养学生无菌意识、创新意识、团队合作意识和生态环保意识；具有任务执行力，规范操作、注意安全；科学严谨、实事求是的工作态度。任务2组培试验设计与分析一、培养基的选择选择合适的培养基是组培快繁成功的基础。选择合适的培养基主要从以下两方面考虑：一是基本培养基；二是各种激素的浓度及相对比例。预备试验→正式试验→最佳组合培养基配方参观咨询文献检索1.组培信息搜索

为了更好地进行组培试验设计，通常在试验设计前需要大量搜集和分析相关组培信息。一般重点搜集的组培信息有以下几方面：1）组培对象的学名、品种名、商品名；

2）外植体的类型与取材时间、部位；

3）培养基配方；

4）培养条件；

5）培养效果；

6）移栽驯化条件与基质配比等。组培信息搜索后，要对所搜集的材料进行鉴别、分类、组合、排列和编目、确保信息的准确性、系统性和信息搜集质量，为下一步试验设计提供重要依据。2.组培试验设计常用试验方法主要有单因子试验、双因子试验、多因子试验三类方法。实际顺序是从多因子到单因子。1）单因子试验是指在整个试验中保证其他因子不变，只比较一个试验因子不同水平的试验。这是最基本、最简单的试验方法。2）双因子试验是指在整个试验中其他因子不变，只比较两个试验因子不同水平的试验。常用于选择生长素和细胞分裂素的浓度配比。双因子试验多采用拉丁方设计。见表3。表3双因子试验设计单位：mg/LNAABA1.02.05.0合计平均0.10.52.0合计平均3）多因子试验是指在同一试验中同时研究两种以上试验因子的试验。多因子试验设计由该试验所有试验因子的水平组合构成。此方法主要用于对培养基种类、激素种类及其浓度的筛选。多因子试验方案分为完全方案和不完全方案，实际中多采用不完全实施的正交试验设计。

所谓正交试验是指利用正交表来安排与分析多因子试验的一种设计方法。例如采用4因子3水平9次试验的L9（34）正交试验，可以一次选择培养基、生长素、细胞分裂素、赤霉素等众多因子及其水平（见表4），然后查证正交表组合因子及其水平（见表5）。表4L9（34）正交试验设计单位：mg/L水平因子培养基生长素（IBA）细胞分裂素（BA）赤霉素（GA）1MS0.50.51.02B51.01.02.03WPM2.02.04.0

表5L9（34）正交试验方案单位：mg/L编号培养基生长素（IBA）细胞分裂素（BA）赤霉素（GA）1MS0.50.51.02MS1.01.02.03MS2.02.04.04B50.51.04.05B51.02.01.06B52.00.52.07WPM0.52.02.08WPM1.00.54.09WPM2.01.01.04）逐步增加和逐步排除的试验方法在寻找最佳激素配比时，经常用到这种逐步添加与逐步减少的简单方法。

二、试验数据采集与分析1.试验数据采集在组培过程中，一定要充分利用转接、出瓶等时机，直接调查，采集数据。组培主要技术指标的含义及计算方法见表6-4，组培苗观察与计算的主要内容见表6-5。表6-4

组培主要技术指导指标名称含义计算公式出愈率反映无菌材料愈伤组织诱导的效果愈伤组织=（形成愈伤组织的材料数/培养材料总数）×100%分化率反映无菌材料的分化能力与再分化的效果分化率=（分化的材料数/培养材料总数）×100%污染率大致反映杂菌侵染程度和接种质量污染率=（污染的材料数/培养材料总数）×100%增殖率反映中间繁殖体的生长速度和增殖数量的变化Y=mXnY:年生产量；m:每瓶苗数；X:每周期增殖倍数；n:年增殖周期数生根率大致反映无根芽苗根原基发生的快慢和生根效果生根率=（生根总数/生根培养总苗数）×100%成活率反映组培苗的适应性与移栽消费，一定程度上说明组培与快繁成功的高低成活率=（40天时成活植株总数/移栽植株总数）×100%表6-5

组培苗观察的内容与方法观察阶段观察的内容要点观察方法初代培养外植体变化（形态、结构、颜色）愈伤组织、胚状体或芽萌动时间与数量出愈率、分化率、胚状体或原球茎的诱导率污染率、褐变率等异常现象目视观察、照相、计算继代培养中间繁殖体的长势（生长量、健壮程度等）长相（形态、结构、质地、大小、高度、颜色、位置等）增殖率和污染率、褐变率、玻璃化苗发生率、变异率等异常现象目视、照相、显微观察生根培养根发生时间长势（根生长量、根发达程度等）长相（根长、根数、根粗、根色、位置等）生根率和污染率、畸形根发生率等异常现象目视、照相、显微观察、计算驯化移栽试管苗长势（生长量、健壮程度等）长相（株高、根数、根长、根色、叶数等）驯化移栽成活率壮苗指数变异率等目视观察、计算、试验2.编制组培观察表

观察表在设计上要合理全面，因根据实际情况而定。下表6-6只是做参考。学生可以自己设计。表6-6

组织培养试验观察表（参考）项目名称：

项目组：

观察日期：基础数据CK

接种瓶数

每瓶接种量

处理1

接种瓶数

每瓶接种量

处理2

接种瓶数

每瓶接种量

处理3

接种瓶数

每瓶接种量

试验观察项目与内容试验处理技术指标调查定性观察处理意见污染率出愈率分化率增生率生根率成活率生长与分化情况异常现象1（CK）

2

3

组长签字：

指导教师签字：

3.组培苗观察注意事项（1）准备观察用具。（2）认真观察苗组培苗。要求尊重事实，调查全面、记录完整。（3）最好不要手握封口膜处，以防二次污染。（4）培养瓶最好不要带出培养室。（5）填写观察记录表，要求概括、全面、言简意赅，计算准确。（6）出愈率、分化率、生根率等技术指标的数据统计一般要求以30个培养物调查为依据；培养物的生长量等数据一般至少5个培养物的平均值；污染率、玻璃化发生率、褐化率等数据统计以一次接种的培养物为基数。1.组培试验设计方法2.数据采集与分析小结【知识点】

掌握热处理、微茎尖、以及茎尖培养

结合热处理脱除病毒的原理及方法

脱病毒苗木的获得

脱病毒植株的检测等【技能点】会茎尖培养。素质要求：培养学生无菌意识、创新意识、团队合作意识和生态环保意识；具有任务执行力，规范操作、注意安全；科学严谨、实事求是的工作态度。任务3植物脱毒技术一、病毒特性及危害1.病毒特性及其侵染症状病毒无细胞结构，由蛋白质外壳保卫着核酸。核酸仅为DNA或RNA。寄生于活细胞，不能独立代谢，缺乏核糖体，必须依赖寄主合成蛋白质。其核酸能利用寄主细胞进行自我复制。具有侵染力，其核酸能从一种寄主细胞转移到其他寄主细胞。2.病毒转运方式短距离转运：胞间连丝。速度慢，普通烟草花叶病毒运转速度为6-13μm/小时。长距离转运：植物韧皮部的疏导组织（筛管和管胞），木质部的导管和管胞不参与。随营养输送进行转移，速度快。一旦病毒进入韧皮部，转运速度突然增快。水稻条纹叶枯病毒运转速度为25cm/h。无性繁殖植物：受一种或多种病原菌侵染。如草莓可感染62种病毒和类菌质体，造成产量降低，品质退化。葡萄扇叶病毒使葡萄减产10-18%。花卉病毒危害：观赏价值下降，如花少而小，产生畸形、变色等。3.植物病毒病的危害柑橘衰退病：曾毁灭巴西的柑橘，圣包罗洲600万株甜橙死亡（占总数的75%），至今仍威胁着世界上的柑橘产业。枣疯病：几乎毁灭密云的金丝小枣。马铃薯：病毒侵染（有10多种）后，块茎小，产量下降，由8000-10000斤降到1000-2000斤。4.解决植物病毒病的对策离体培育无毒苗已成为农作物、园林植物、经济作物的优良品种繁育、生产中的一个重要环节。不少国家已将其纳入常规良种繁育的一个重要程序，建立无病毒（virus-freeliant）产生基地，为提供无病毒良种种苗。5.无病毒良种种苗的特点产量提高：如草莓可增产20-30%，马铃薯可增产40%以上，地瓜脱毒提产30-50%。品质提高：脱毒后的植物所结果实品质提高，如地瓜脱毒可提高出干率0.1-1.5%。抗病性增强：对病虫的抗性增强，如地瓜脱毒后可增强抗茎线虫病；脱毒时还会脱除细菌、真菌、线虫等。二、脱毒方法1.热处理原理：植物组织处于高于正常温度环境时，组织内部的病毒受热后钝化，其复制功能受到影响，以致病毒含量不断降低；甚至死亡，从而达到脱毒的目的。热处理对葡萄扇叶病毒、苹果花叶病毒、康乃馨病毒等一类的圆形或线性的病毒起作用。如：葡萄扇叶病毒在38℃处理30分钟可脱除。1889年，瓜哇人用热水浸甘蔗种，得到病毒减轻的甘蔗。最早热处理脱毒是英国的卡尼斯（1950）：马铃薯块茎37℃处理20天，卷叶病毒消失。热处理脱毒方法温水浸渍处理：适用于休眠器官，在50℃左右的温水中浸渍10min至数小时，简单易行，但材料易受伤。热空气处理：将材料放在高温生长室（在35-40℃），使其顶端分生组织比次生分生组织生长迅速，切取其茎尖分生组织进行离体培养。处理时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数月。2.微茎尖脱毒越靠近茎顶端区域的病毒的感染浓度越低，生长点（约0.1-1.0mm区域）则几乎不含或含病毒很少。分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度。微茎尖培养脱毒案例3.愈伤组织脱毒原理从器官或组织诱导愈伤组织，分化不定芽，生根培养成植株，可获脱毒苗。如马铃薯、大蒜、草莓、水仙、香蕉等。原理及依据：病毒在植物体内的不同器官或组织分布不均匀，甚至在同一感病的组织内，存在不感病毒的细胞群落。这些无病毒细胞在愈伤组织的增殖中获得无病毒组织。病毒颗粒在愈伤组织的增殖过程中逐渐降低。继代培养的愈伤组织产生抗性变异。技术关键：诱导可再生出植株的愈伤组织。愈伤组织脱毒案例4.珠心组织培养脱毒原理病毒是通过维管组织传播的，而珠心组织与维管组织没有直接联系，故珠心组织培养可获得无病毒植株。柑橘、葡萄，通过珠心组织培养获得了无病毒植株。柑橘、葡萄，通过珠心组织培养获得了无病毒植株。5.微体嫁接离体培养脱毒特点：微体嫁接法是20世纪70年代发展的一种培养无病毒苗的方法，也称试管嫁接。可把极小（小于0.2mm）茎尖，作为接穗嫁接到生长在试管中的实生砧木上（种子获无菌苗实生苗不带毒）。接穗在砧木的饲喂下很容易成活。接穗是很小的茎尖，带毒概率小，可获无毒苗。已在柑橘、苹果上获得成功。技术关键：剥离技术高：嫁接的成活率与接穗大小呈正相关，而脱毒率与及接穗大小呈负相关。茎尖大小：茎尖越小脱毒效果越好，小于0.2mm的茎尖嫁接可脱除多数病毒。培养基筛选：考虑砧木和接穗对营养的要求。接穗的取材季节：不同的取材季节嫁接成功率不同。4-6月份取材嫁接成活率较高。三、脱毒检测1.视觉观察法看植株茎、叶是否有该病毒所有的可见症状，受侵染的植株表现为局部或系统花叶、皱缩、卷叶、黄化等。生长势减弱，有矮化或畸形等症状。2.生物鉴定法（指示植物法）原理：有些植物对病毒极为敏感，一旦感染病毒就会在其叶片乃至全株上表现特有的病斑，这种植物为病毒敏感植物或指示植物。例：马铃薯病毒的敏感植物有：千日红、黄花烟、心叶烟、毛叶曼陀罗等鉴定法a.摩擦接种法b.嫁接鉴定法取待检测植物的汁液，摩擦接种或将待检植物接穗嫁接到对应的敏感植物上，视其有无病斑，判断是否脱毒病毒。3.电子显微镜鉴定法原理：用电镜直接观察经脱毒培养的叶片，检查是否有病毒粒子的存在，测量病毒颗粒的大小、形状和结构。电镜鉴定法是准确、科学、先进的检测方法。可知病毒颗粒的大小、形状和结构。抗体概念：当动物被病毒感染或人工注射异体蛋白质时，其体内会产生一种特异性免疫球蛋白，其被称为抗体。抗原概念：引起形成抗体的物质（病毒或异体蛋白）。4.抗血清鉴定法血清反应：抗体在特色细胞内形成，进入血液存在于血清和体液内。抗原和抗体相结合的反应称为血清反应。含特异性“抗体”的血清称为“抗血清”。特异性：抗原和抗体结合，有很强的特异性。即一种病毒产生的抗体只能结合该种病毒，用已知病毒的抗血清可鉴定未知病毒的种类。测定速度快，几小时甚至几分钟就可完成。病毒抗血清在诊断上的价值病毒抗血清具有高度的专化性：一种病毒产生的“抗体”，只能结合该种病毒（抗原）。对于受感染而没有症状的带毒植物，也能诊断，有很高的实用价值。玻璃片凝聚法：在清洁玻璃片的一端，用毛细管滴加5滴稀“抗血清”，另一端滴加等量对照血清。然后各加滴被检植物压榨出的原汁液两滴。用玻璃棒搅匀，在常温下静置20-50min，然后在40-60倍显微镜下观察。带病毒的叶绿体发生典型的凝集现象。将抗原固定在酶标板上，加入待测血清，然后再加入酶标记的抗体，使之与待测血清中已与抗原结合的特异性抗体结合用酶标仪作出判断。该方法敏感，能检测出【10】

（-5）数量级病毒浓度。5.分光光度计法用于定量病毒步骤：把病毒的纯品干燥称重配成已知浓度上午病毒算浮液在260nm下测其光密度并折算成消光系数查消光系数表四、无病毒种苗的保存和利用1、无病毒原种的保存无病毒苗原种要在隔离区或采用隔虫网室种植保存。隔离区可为海岛、山地、未种植过该种植物的新区；隔虫网室用300网纱，防蚜虫进入。种植苗圃的土壤应消毒，保证原种是在与病毒严密隔离的条件栽培。及时和定时对原种进行病毒的检测和测定。离体保存。种苗经鉴定后，选择无病原种株系，回接于试管内，长期保存，是理想的保存方法。2、无病毒原种的繁殖无病毒株数量有限，需扩繁满足生产需要。在无毒源和其他病虫害的大田中进行，场地要消毒防治蚜虫等传播媒介。对脱毒株系进行植物学性状鉴定，保留性状优良无毒株系。严格原种繁育制度和栽培管理制度。1.脱毒苗培育的意义2.植物脱毒处理方法3.微茎尖培养脱毒操作程序4.无病毒种苗的保存和利用小结【知识点】掌握组培苗工厂化生产工艺流程

了解检测组培苗质量方法【技能点】能制定科学合理的生产计划

素质要求：具备独立获取知识、终身学习和适应职业变化的能力；培养从事组培苗木生产管理人员的素质与能力。任务15组培工厂化生产一、工厂化生产流程与计划制定1.植物组培苗工厂化生产工艺流程根据植物组织培养的技术路线，拟定工艺流程。如：茎尖→表面消毒→接种诱导培养基→茎尖生长→病毒检测鉴定→培养无根小植株→培养生根→完整小植株→炼苗20-25天→移栽成活。常规情况下详细的生产流程图如下：2.组培苗生产计划的制定1)试管苗增殖率的估算根据几何增加的原理，按下面的公式计算出年增殖率的理论值：试管苗年繁殖总数：y；无菌母株苗数：m；每周期增殖的倍数：X；年增殖周期数：n；理论上计算组培苗生产数量的公式为：y＝mXn案例：一个培养瓶中有无菌母株苗数5株，每年增殖8次，每次增殖4倍，则全年理论生产为多少？y＝mXn=5×48=327180（株）2）生产计划的制定制定的要点：1）对各种植物的增殖率应做出切合实际的估算；2）要有植物组织培养信不过各的技术储备；3）熟悉各种组培苗的定植时间和生长环节；4）要掌握组培苗可能产生的后期效应。全年生产量=全年出瓶苗数×炼苗成活率案例：某商业生产玫瑰组培苗，平均30天为一个增殖周期，一名工人每天转苗1000株，全年280个工作日，损耗率为10%，30%苗量增殖培养，70%苗量生根培养。全年生产量=1000×280=280000（株）全年出苗量=280000×70%×（1-10%）=176400（株）3)组培苗生产计划实施步骤主要为：

准备繁殖材料，建立无性繁殖系。繁殖材料必须是来源清楚、无检疫性病害、无肉眼可见病害症状、具有典型品种特性的优良单株或群体。

试管苗繁殖材料的快速繁殖。存架增殖总瓶数的控制就成为影响试管苗生产效益的关键因素。有效控制试管苗的增殖总瓶数，便于在一个生产周期内全部转接、更新1次培养基，使增殖材料处于不同生长阶段的最佳状态，调高其质量。4)生产计划的制定与实施生产计划是根据市场需求和经营策略，对未来一定时期的生产目标和活动所做的统一安排。生产计划的制定是进行组培苗规范化生产的关键，生产量不足或过剩都会直接影响经济效益。在实际生产中，首先应对植物材料的增殖率做出一个切合实际的估算，再根据生产能力和市场需求制定相应的生产计划，并有效组织生产。5)案例分析生产计划的制定主要是要考虑到供货时间，依据供货时间来推算生根时间和繁殖增量时间。以康乃馨组培为例，一般康乃馨的移栽时间在清明节前后，那么炼苗正好在上海最冷的时候，在没有加温设施的条件下需要3个月左右的时间，这样组培生根就安排在12月份进行。五四组培室计划在清明节前后供应4200万株康乃馨组培苗，从1月份开始库存12个品种苗各为50株。平均30d为一个增殖周期，康乃馨的繁殖率为2.5，一部超净工作台每人每天转苗量1200株，各种损耗10%，移栽成活率90%，每人每天移栽2000棵苗，出苗包装每人每天4000棵苗。根据上述已知条件，计算出每月平均生产量和全年生产量和用工情况，并制定一年的生产计划。求：1、每月平均生产量2、全年生产量3、用工情况4、

康乃馨组培生产计划（见附件）二、植物组培苗的质量鉴定根据种苗的用途不同，其质量标准也有所不同。1.生产性组培瓶苗的质量标准用于生产的组培瓶苗质量，主要依据苗的根系状况、整体感、出瓶苗高、叶片数及叶片颜色等四个方面进行判定。(1)根系状况根系状况是指种苗在瓶内的生根情况，包括根的有无、多少、长势和色泽。一般通过目测评定，合格的组培瓶苗必须有根，根量适中，并且长势好、色白健壮。(2)整体感整体感是指组培苗在容器内的长势和整体感观，包括长势是否旺盛、种苗是否粗壮挺直等。此项指标是一个综合的感官评判项目，靠目测评定，应由熟悉组培生产及种类组培瓶苗形态特征的人员进行检测。(3)出瓶苗高出瓶苗高是指出瓶时组培苗的高度。组培苗过矮过小，移栽难以成活。多数种类组培苗的高度超过指标后，其质量反而下降，继续生长变成徒长、瘦弱的超苗期，降低移栽成活率。(4)叶片数及叶片颜色叶片数是指在组培苗进行光合作用的有效叶片数。通常通过目测评定，适当数量和形态正常的叶片表明植株生长健壮。叶片颜色直接表明组培苗的健壮状况，叶色深绿有光泽，表明生长势强壮，光合能力强，适宜移栽；叶片发黄、发脆、透明、及局部干枯都是组培苗病态的表现，移栽难以成活。2.原种组培苗的质量标准（1）品种纯度。品种纯度是指原种组培苗是否具备品种典型性。品种纯度是非常重要的一个质量指标。品种纯度鉴定可根据外观性状判断，有条件的可利用分子检测技术进行鉴定。（2）健康状况。健康状况是指原种组培苗是否携带病菌，包括真菌、细菌、病毒等。3.出圃苗的质量标准主要从以下几个方面进行考虑：（1）商品特性。苗高、冠幅、地径、叶片数、芽数、叶片颜色、根的数量、长度等。（2）健壮情况。抗病性、抗虫性、抗逆性。（3）遗传稳定性。品种典型性状、是否整齐一致。三、组培苗的运输1.育苗方法及苗龄一般采用水培或以多孔材料（如沙砾、炉渣）作基质育苗的苗木，起苗后全部裸露，须采取保湿措施处理，否则经长途运输后成活率会受到影响。2.组培苗的包装穴盘育苗运输时带基质，应先振动秧苗，使穴盘分离，然后将苗取出，带基质摆放于箱内，以提高定植后的成活率及缓苗速度。水培苗或基质培苗，取苗后基本不带基质，可由数十株至百株扎成一捆，用水苔或其他保湿包装材料将根部裹好再装箱。3.对运输工具及运输适温的要求根据运输距离的远近选择运输工具。对于珍贵的种苗或有紧急时间要求者也可选择空运。注意事项：在种苗运输过程中应注意调