GB∕T 29637-2023 疑似毒品中氯胺酮检验（正式版）

疑似毒品中氯胺酮检验2023-11-27发布国家标准化管理委员会I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件代替GB/T29637—2013《疑似毒品中氯胺酮的气相色谱、气相色谱-质谱检验方法》,与GB/T29637—2013相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：——更改了“范围”(见第1章，2013年版的第1章);——删除了气相色谱方法原理(见2013年版的第4章);——增加了液相色谱和液相色谱-质谱方法原理(见第4章);——删除了气相色谱分析用试剂及标准物质、仪器及量器具(见2013年版的第5章);——增加了液相色谱和液相色谱-质谱分析用试剂、仪器和材料(见第5章);——更改了气相色谱-质谱定性质控标准工作溶液的质量浓度(见5.1.1.6,2013年版的6.1);——增加了液相色谱和液相色谱-质谱定性分析(见6.1.2和6.2);——删除了气相色谱定量分析(见2013年版的第7章);——增加了液相色谱定量分析(见第7章);——更改了结果评价(见第8章，2013年版的第8章)。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国公安部提出。本文件由全国刑事技术标准化技术委员会(SAC/TC179)归口。本文件起草单位：公安部禁毒情报技术中心、黑龙江省公安厅、云南省公安厅、公安部鉴定中心。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：——2013年首次发布为GB/T29637—2013;——本次为第一次修订。1疑似毒品中氯胺酮检验1范围本文件描述了氯胺酮的气相色谱-质谱(GC-MS)、液相色谱(LC)、液相色谱-质谱(LC-MS)定性检验方法和液相色谱(LC)定量检验方法的原理、试剂、仪器和材料、检验分析步骤及结果评价。本文件适用于疑似毒品中氯胺酮的定性分析和定量分析。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27418测量不确定度评定和表示GA/T122毒物分析名词术语3术语和定义GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。对疑似毒品中的氯胺酮(氯胺酮基本信息见附录A)进行提取。采用气相色谱-质谱法和液相色谱法检测，以气相色谱-质谱保留时间、质谱特征离子、离子丰度比以及液相色谱保留时间作为定性判断依据；采用液相色谱-质谱法检测，以保留时间、质谱特征离子对和离子对丰度比作为定性判断依据；采用液相色谱法检测，以色谱峰面积作为定量依据，用外标单点法或外标标准曲线法进行定量分析。5.1试剂5.1.1GC-MS分析用试剂除非另有说明，在分析中使用的试剂均为色谱纯。5.1.1.520%碳酸钠水溶液(以配制100mL为例):称取碳酸钠20g,用水溶解并定容至100mL,混2a)标准物质储备液：氯胺酮标准物质储备液；b)标准工作溶液按实验需求分为以下两类：——气相色谱-质谱定性用标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇稀释，配制成0.1mg/mL的氯胺酮标准工作溶液，0℃~4℃冷藏保存，有效期3个月，也可根据实际情况配制实验中所用其他质量浓度的定性用标准工作溶液；——气相色谱-质谱定性质控标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇稀释，配制成0.005mg/mL的氯胺酮标准工作溶液，0℃~4℃冷藏保存，有效期1个月。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为LC-MS级。5.1.2.6浓磷酸(H₃PO₄):含量大于或等于85%。5.1.2.70.1%甲酸水溶液(以配制1000mL为例):量取1mL甲酸，加入水稀释并定容至1000mL,混匀后0.22μm水系滤膜过滤，超声波清洗器超声，静置后即可5.1.2.8磷酸-三乙胺缓冲液(以配制1000mL为例):量取4.12mL浓磷酸，加入200mL水稀释；量取5.56mL三乙胺，滴入上述磷酸溶液中；用水稀释并定容至1000mL,混匀后0.22μm水系滤膜过滤，超声波清洗器超声，静置后即可使用。a)标准物质储备液：氯胺酮标准物质储备液；b)标准工作溶液按实验需求分为以下六类：——液相色谱-质谱定性用标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇稀释，配制成50ng/mL的氯胺酮标准工作溶液，现配现用，也可根据实际情况配制实验中所用其他质量浓度的定性用标准工作溶液；——液相色谱-质谱定性质控标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇稀释，配制成1ng/mL的氯胺酮标准工作溶液，现配现用；——液相定性用标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇稀释，配制成0.1mg/mL的氯胺酮标准工作溶液，0℃~4℃冷藏保存，有效期3个月，也可根据实际情况配制实验中所用其他质量浓度的定性用标准工作溶液；——液相定性质控标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇稀释，配制成0.005mg/mL的氯胺酮标准工作溶液，0℃~4℃冷藏保存，有效期1个月；——液相外标单点法定量用标准工作溶液：配制方法及质量浓度同液相定性用标准工作溶液；——液相外标标准曲线法定量用标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇配制成质量浓度为0.01mg/mL～0.5mg/mL的标准工作溶液，至少配制5个质量浓度。5.2仪器和材料5.2.1GC-MS分析用仪器和材料GC-MS分析用仪器和材料包括：3b)电子天平：实际分度值d小于或等于0.01mg;d)涡旋振荡器；e)移液器或移液管；f)容量瓶；g)具盖离心管；a)液相色谱仪(LC):配有二极管阵列(DAD)或紫外检测器(UV);b)液相色谱-质谱仪(LC-MS):配有电喷雾离子源；c)电子天平：实际分度值d小于或等于0.01mg;e)涡旋振荡器；f)移液器或移液管；h)具盖离心管；j)超声波清洗器6定性分析振荡10min,以不低于4000r/min离心5min,取上清液作为样品溶液，供GC-MS分析。样品经均质化后，根据实际需求，吸取10μL～200μL于具盖离心管中，称量其质量(精确至0.01mg),加入1mL的20%碳酸钠水溶液和2mL正己烷，振荡5min,以不低于4000r/min离心5min分层。吸取上层有机相1mL,加入适量无水硫酸钠干燥，过滤膜后，滤液作为样品溶液，供GC-MS分析。以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整。石英玻璃毛细柱(5%苯基+95%甲基聚硅氧烷)或DB-35MS石英玻璃毛细柱(35%苯基+65%二甲基乙烯聚硅氧烷)或其他等效柱，30m×0.25mm×0.25μm。4b)色谱柱温程1:初始温度60℃,以15℃/min升温至280℃,保持15min;色谱柱温程2:初始温度140℃,以20℃/min升温至300℃,保持4min。c)进样口温度：280℃。d)分流比：20:1(温程1)或40:1(温程2)。j)离子源温度：230℃。振荡10min,以不低于4000r/min离心5min,取上清液，过滤膜后作为样品溶液，供LC分析。于具盖离心管中，称量其质量(精确至以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：C₁₈色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)或其他等效柱：g)洗脱程序：根据样品情况选择等度洗脱或梯度洗脱：1)等度洗脱(适用于纯度较高的晶体样品):16%A+84%B,分析时间8min;2)梯度洗脱(适用于成分较为复杂的样品):洗脱程序参考表1。5时间AB振荡10min,以不低于4000r/min离心5min,取上清液，过滤膜后以甲醇稀释合适倍数，供LC-MS分析。于具盖离心管中，称量其质量(精确至以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：BEHCg(2.1mm×b)流动相：A为甲醇，B为0.1%甲酸水溶液；d)柱温：35℃;e)洗脱程序：见表2;表2梯度洗脱程序时间minAB037896GB/T29637—2023h)扫描方式：正离子模式；i)毛细管电压：4000V;j)干燥气温度：350℃;k)质谱定性特征离子对和去簇电压、碰撞能量条件见表3。表3质谱定性特征离子对和去簇电压、碰撞能量目标物定性特征离子对去簇电压V碰撞能量氯胺酮238.1>207.1238.1>125.0羟亚胺238.1>152.0238.1>163.07LC定量分析7.1外标单点法7.1.1含量预分析固体样品经均质化后，根据实际需求，称取10mg～100mg样品置于具盖离心管中，加入10mL甲醇，密封并振荡10min,以不低于4000r/min离心5min,上清液过滤膜后作为样品溶液，供LC分析。或根据实际需要，将上清液过滤膜后用甲醇稀释，稀释液作为样品溶液，供LC分析。0.01mg),加入2mL甲醇，超声溶解，涡旋混匀，过滤膜后作为样品溶液，供LC分析。或根据实际需要，过滤膜后用甲醇稀释，稀释液作为样品溶液，供LC分析。采用外标单点法定量用标准工作溶液作为定量参照。按照公式(1)计算样品中目标物的预分析含量。式中：w——样品中氯胺酮的含量(质量分数);C。——外标单点法定量用标准工作溶液中氯胺酮的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);A——样品溶液中氯胺酮的色谱峰面积值；V₁——样品溶液初次定容体积，单位为毫升(mL);V₂——从初次定容样品溶液V,中移取的体积，单位为毫升(mL);V₃——将V₂稀释时加入甲醇的体积，单位为毫升(mL);A。——外标单点法定量用标准工作溶液中氯胺酮的色谱峰面积；m——样品的称量质量，单位为毫克(mg)。77.1.2准确定量7.1.2.1称量重量的计算根据预分析中氯胺酮含量测定结果，选择合适的定容体积、稀释倍数(样品提取操作参数选择见附录B),并按照公式(2)计算出样品称量质量(m),使样品溶液中目标物的质量浓度在所用标准工作溶液质量浓度的(100±30)%范围内。式中：m——准确定量时样品的称量质量，单位为毫克(mg);……C。——外标单点法定量用标准工作溶液中氯胺酮的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);V——初次定容体积，单位为毫升(mL);D——稀释倍数；样品中氯胺酮的预分析含量(质量分数)。7.1.2.2样品提取根据7.1.2.1计算结果，平行称取样品2份于具盖离心管中(当需要对定量结果进行不确定度评定时，至少平行称取6份)。根据预分析含量范围，加入相应的甲醇至初次定容体积，密封并超声振荡10min,以不低于4000r/min离心5min,上清液过滤膜后作为样品溶液，供LC分析；当样品溶液需要稀释时，将上清液过滤膜后，按照稀释倍数用甲醇进行稀释定容，稀释液作为样品溶液，供LC分析。7.1.2.3LC参考条件同6.1.2.2。分别吸取样品空白(甲醇)、样品溶液、标准溶液空白(甲醇)和外标单点法定量用标准工作溶液，按7.1.2.3条件进样分析。当称取2份样品时，每份样品进样2针～3针。7.1.2.5含量计算按照公式(1)计算样品中氯胺酮含量。7.2外标标准曲线法7.2.1标准工作曲线绘制采用5.1.2.9中配制的外标标准曲线法定量用标准工作溶液及标准溶液空白(甲醇)绘制线性范围为0.01mg/mL～0.5mg/mL的氯胺酮标准工作曲线，以氯胺酮系列标准工作溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得到标准曲线回归方程，其线性相关系数r应大于0.998。7.2.2样品制备7.2.2.1固体样品制备样品经均质化后，称取25mg(精确至0.01mg)于具盖离心管中，加入10mL甲醇，密封并振荡8GB/T29637—202310min,以不低于4000r/min离心5min。取适量样品溶液，按样品溶液：甲醇=1:4(V/V)的比例进行稀释，混匀、滤膜过滤，滤液作为样品溶液，供LC分析。7.2.2.2液体样品制备样品经均质化后，吸取25μL于具盖离心管中，称量其质量(精确至0.01mg),加入10mL甲醇，超声溶解，涡旋混匀。取适量样品溶液，按样品溶液：甲醇=1:4(V/V)的比例进行稀释，混匀、滤膜过滤，滤液作为样品溶液，供LC分析。如果样品中目标物质量浓度过低，可适当增加取样量，使样品峰面积落在标准曲线范围内，最多可吸取500μL样品，称量其质量(精确至0.01mg),并加入相应体积的甲醇至10mL,其他超声、混匀、稀释等处理过程相同。7.2.3LC参考条件分别吸取样品空白(甲醇)、样品溶液，按7.2.3条件进样分析。当称取2份样品时，每份样品进样2针～3针。7.2.5含量计算根据样品溶液中目标物的峰面积值和标准曲线回归方程，按公式(3)计算出样品中目标物的含量。式中：w——样品中氯胺酮的含量(质量分数);Y——样品溶液中氯胺酮色谱峰面积的平均值；b——标准曲线回归方程的截距；50——样品溶解稀释体积，单位为毫升(mL);a——标准曲线回归方程的斜率；m——样品的称量质量，单位为毫克(mg)。8结果评价8.1定性结果评价8.1.1GC-MS、LC定性结果评价8.1.1.1阳性结果评价：将样品与氯胺酮定性用标准工作溶液的总离子流图和质谱图进行比对，同时满足如下两个条件时，判定为样品中检出目标物。a)在相同条件下进行GC-MS测定时，样品溶液中目标物与质量浓度接近的气相色谱-质谱定性用标准工作溶液中的目标物相比，色谱峰保留时间一致(相对误差在±1%之内)、质谱特征离子(不少于三个)一致，且各离子丰度比相对偏差不超过表4规定的范围，样品空白无干扰。氯胺酮气相色谱-质谱总离子流图、质谱图及特征离子见附录C和附录D。b)在相同条件下进行LC测定时，样品溶液中目标物与质量浓度接近的液相定性用标准工作溶9液中的目标物相比，色谱峰保留时间一致(相对误差在±2.5%之内),样品空白无干扰。氯胺酮液相色谱图见附录E。表4离子丰度比的最大允许相对偏差范围离子丰度比>20%～50%>10%～20%最大允许相对偏差8.1.1.2阴性结果评价：将样品与氯胺酮定性质控标准工作溶液的色谱图和质谱图进行比对，满足如下条件之一时，判定为样品中未检出目标物。a)在相同条件下进行GC-MS测定时，扣除背景后，100mg固体样品或200μL液体样品经提取后的样品溶液中未出现与气相色谱-质谱定性质控标准工作溶液中目标物一致的特征离子，标准溶液空白无干扰，可判定样品中未检出目标物。b)在相同条件下进行LC测定时，100mg固体样品或200μL液体样品经提取后的样品溶液中未出现与液相定性质控标准工作溶液中目标物保留时间一致的色谱峰，标准溶液空白无干扰，可判定样品中未检出目标物。8.1.2.1阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，样品溶液中目标物与质量浓度接近的液相色谱-质谱定性用标准工作溶液中的目标物相比，色谱峰保留时间相对误差在±2.5%以内，定性离子对(至少两对)与标准物质工作溶液一致，且离子对丰度比相对偏差不超过表5规定的范围，样品空白无干扰，则可判定检材样品中检出目标物。氯胺酮MRM色谱图见附录E。表5离子对丰度比的最大允许偏差范围离子对丰度比>20%～50%>10%～20%最大允许相对偏差8.1.2.2阴性结果评价：扣除背景后，样品溶液中未检出目标物特征离子对，液相色谱-质谱定性质控标准工作溶液中检出目标物特征离子对，标准溶液空白无干扰，则可判定样品中未检出目标物。8.2定量结果评价8.2.1相对相差检验平行称取或移取2份样品时，测定数据按照公式(4)计算相对相差(RD)。……………(4)RD——相对相差；w₁、w₂——两份样品平行定量测定的含量数值；o——两份样品平行定量测定的含量平均值；当RD小于或等于10%时，数据有效；当RD大于10%时，需要重新检验。GB/T29637—20238.2.2异常值检验平行称取或移取6份样品时，测定数据按照公式(5)进行Grubbs可疑值判别。式中：w;——可疑值；o₀——6个(5个)数据的平均值；s——6个(5个)数据的单次测定标准差；G;——Grubbs统计值。G;小于Gn(g₅)时，数据有效，G;大于或等于Gn9s)时，应剔除该数据，但只能剔除1个数据，否则本次测定无效，需要重新检验。8.2.3含量结果计算平行称取或移取2份样品时，以2份样品含量测定的平均值作为定量结果；平行称取或移取6份样品时，以6份(5份)样品含量测定的平均值作为定量结果。8.3结果表述阳性结果表述为：从样品中检出氯胺酮成分，其中氯胺酮含量为……。含量用百分比表示。阴性结果表述为：从样品中未检出氯胺酮成分。8.4测量不确定度的评定与表述如需提供测量不确定度，测定结果的不确定度评定与表述按GB/T27418执行。