免疫分析相关仪器

免疫分析相关仪器新乡医学院三附院王伟1主要内容第一节酶免疫分析仪第二节自动洗板机第三节发光免疫分析仪2第五节免疫比浊分析仪第六节时间分辨荧光免疫分析仪第四节放射免疫分析仪2

本节要点一、酶免疫分析仪的工作原理二、酶免疫分析仪的基本结构与功能三、酶免疫分析仪的性能评价四、酶免疫分析仪的使用与维护五、酶免疫分析仪的临床应用3第一节酶免疫分析仪3

掌握酶标仪及全自动微孔板式ELISA分析仪的工作原理、酶免疫分析仪的性能评价。熟悉酶免疫分析仪的类型及临床应用。

了解酶免疫分析仪的结构及维护。第一节酶免疫分析仪学习目标44检验与免疫免疫学分析或称免疫学检验是以抗原抗体相互结合的免疫学反应为基础的，主要研究免疫学技术及其在医学领域中的应用。乙肝五项，甲肝，丙肝…..甲状腺功能，性激素，免疫五项，HIV，TORCH风湿免疫5

酶免疫分析(enzymeimmunoassay，EIA)是目前临床应用最多的一种免疫分析技术，主要原理是用酶与抗原(抗体)结合形成酶标抗原(抗体)，在酶标抗原(抗体)与抗体（抗原）的特异性反应完成以后，加入酶的相应底物，通过酶对底物的显色反应，对待测样品中的抗原(或抗体)进行定性或定量的测定分析。酶免疫分析定义6酶免疫分析基本示意图71、已知抗体包被于载体表面3、加酶标抗体与抗原结合4、加酶作用的底物产生颜色2、加待检物抗原与抗体结合4、加酶作用的底物不产生颜色洗涤洗涤洗涤洗涤双抗体夹心法测抗原1、已知抗体包被于载体表面2、加待检物无抗原与抗体结合3、加酶标抗体无抗原结合+-YYYEYEYEYYEYEYEYYYYEYEYEYYYYYYYYYYYYYYYYYY8酶免疫分析概述酶免疫分析(enzymeimmunoassay，EIA)

根据是否需要分离结合与游离的酶标记物，可分为:

酶扩大免疫测定均相酶免疫测定

克隆酶供体免疫测定

液相酶免疫法非均相酶免疫测定

固相酶免疫法(酶联免疫吸附测定enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）9均相酶免疫测定用于小分子激素和半抗原（如药物）的测定原理：酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，标记酶的活性会发生改变，不用分离结合和游离酶标记物，通过测定标记酶的活性的改变，而确定待测抗原或抗体的含量。分类：均相酶免疫分析主要有酶扩大免疫测定技术（EMIT）和克隆酶供体免疫测定两种方法。非均相酶免疫测定需分离游离与结合的酶标记物原理：在抗原抗体反应达到平衡后，采用适当方式将游离的酶标记物和与抗原抗体结合的酶标记物加以分离，再通过底物显色进行测定。医学检验中常用的酶免疫分析法均为非均相法。分类：液相酶免疫测定固相酶免疫测定以聚苯乙烯等材料作为固相载体的酶联免疫吸附试验（ELISA）是目前最为常用的固相酶免疫测定

酶免疫分析概述10底物半抗原酶抗体酶酶酶半抗原与酶结合成酶标半抗原，保留酶和半抗原的活性图1-A11抗体酶抗体酶图1-B当酶标半抗原与抗体结合后，所标的酶与抗体密切接触，使酶的活性中心受影响而活性被抑制12EMIT示意图13EMIT试剂盒中的主要试剂为：①抗体，②酶标半抗原，③酶的底物。检测对象为标本中的半抗原。当试剂①、②与待测标本混合后，待测标本中的半抗原与酶标的半抗原竞争性地与试剂中的抗体相结合。底物抗体酶待测标本中的半抗原14酶酶加入未标记的的半抗原Ag

（样品中的Ag）后，Ag与AgE竞争结合反应系统中限量Ab的形成AbAg，如样品中的Ag越多，竞争结合后反应液中AbAgE的比例减少，游离的具有酶活力的AgE的量就增多。因此，反应后最终测定的酶活力大小随着反应体系中未标记半抗原Ag浓度的升高而增强。限量的抗体加入的抗原15克隆酶供体免疫测定利用重组DNA技术制备β-半糖苷酶的两个片段：大片段称为酶受体（enzymeacceptor，EA），小片段称为酶供体（enzymedonor，ED）。两个片段本身均不具酶活性，但在合适的条件下结合在一起就具有酶活性。利用这两相片段的特性建立的均相酶免疫测定称为克隆酶供体免疫测定（clonedenzymedonorimmunoassay,CEDIA）。16CEDIA的反应模式为竞争法，测定原理为：标本中的Ag和AgED（酶供体标记的抗原）都与特异性Ab竞争结合，形成两种抗原抗体复合物。AgED标记的抗原与特异性Ab结合后AbAgED由于空间位阻，不再能与EA结合。反应平衡后，剩余AgED的标记抗原与EA结合，形成具有活性的酶。加入底物测定酶活力，酶活力的大小与标本中抗原含量成正比。17ED标本中抗原活性酶

ED标记抗原ED抗体克隆酶供体免疫测定原理示意图EA底物显色反应由于反应属竞争结合,故反应液中游离的AgED

随着标本中未标记的Ag量的增多而增加,使最终加入底物后测得的酶活性高低与标品Ag含量成正比。18微孔板固相酶免疫测定仪器(酶标仪)全自动微孔板ELISA分析仪一、酶免疫分析仪的工作原理19酶标仪

有单通道和多通道两种类型

1.工作原理：与光电比色计相同，但光路有区别。

一、酶免疫分析仪的工作原理20光源灯滤光片微孔板光电检测器模拟信号处理

微机单元显示器键盘打印机

X方向驱动机Y方向驱动机控制电路直流稳压电源一、酶免疫分析仪的工作原理21光源聚光镜聚光镜光栏反光镜微孔板（待测液）滤光片光电管光路系统：主要结构和光电比色计相同不同之处在于：比色液的容器是塑料微孔板；以垂直光束通过待测液；通常使用光密度OD来表示吸光度酶标仪的光路系统简图22奥地利HT3酶标仪2324AW1洗板机25酶免疫分析仪的类型微孔板固相酶免疫测定仪器(酶标仪)半自动微孔板ELISA分析仪全自动微孔板ELISA分析仪管式固相酶免疫测定仪器小珠固相酶免疫测定仪器磁微粒固相酶免疫测定仪器等26磁微粒固相酶免疫测定仪磁酶免分析系统由分光光度测读仪、磁铁板和试剂组成：试剂包括：抗异硫氰酸荧光素（FITC）抗体特异抗体或抗原包被的磁微粒（颗粒直径1μm）FITC结合的特异抗体或抗原碱性磷酸酶标记的特异抗体或抗原底物酚肽（phenolphthalein）磷酸酯反应结束后将试管架放在磁铁板上，磁微粒被磁铁吸引至管底，完成固相与液相的分离。酶作用后反应液呈粉红色。27磁微粒固相酶免疫测定仪28（二）半自动微孔板ELISA分析仪在酶标仪的基础上再配置:加液器温育器洗板机

测定中需由手工将微孔板移至下一步骤的仪器中进行。二、酶免疫分析仪的基本结构与功能返回目录29加样器温育器洗板机酶标仪二、酶免疫分析仪的基本结构与功能30（三）全自动微孔板ELISA分析仪由以下部件组成:加样系统温育系统洗板系统判读系统机械臂系统液路动力系统软件控制系统二、酶免疫分析仪的基本结构与功能31

全自动微孔板式ELISA分析仪根据仪器组合分为分体机和一体机。分体机：前处理系统：加样后处理系统：温育、洗板、传送以及判读等一体机：把上述各系统全部组合在一起

二、酶免疫分析仪的基本结构与功能32全自动微孔板ELISA分析仪样品架上下吸液管33全自动微孔板ELISA分析仪反应板清洗装置34全自动微孔板ELISA分析仪供水桶、废液桶仪器全貌35全自动微孔板ELISA分析仪全自动微孔板ELISA分析仪优势：自动化程度高，减少人与样品的接触机会，降低污染。能进行各种自动安全检测。稳定：只要避免人为操作错误，可连续工作。准确：不存在交叉污染，确保结果准确。高速：加注、读板速度快，扩展性强。36三、酶免疫分析仪的性能评价

1．滤光片波长精度检查及其峰值测定2．灵敏度和准确度3．通道差与孔间差检测4．零点飘移5．精密度评价6．线性测定7．双波长评价37（一）酶标仪

3.操作流程

开机参数设置

检测结果输出

关机打开电源开关，仪器自检启动系统，设置检测项目、检测波长及计算公式等选择设定好的模板及检测项目、录入样本结果输出，保存在计算机上退出系统，关闭电源四、酶免疫分析仪的使用与维护38四、酶免疫分析仪的使用与维护1.工作环境要求包括以下几个方面：仪器应放置在无强磁场和干扰电压且噪音低于40分贝的环境下操作环境空气清洁，避免水汽、烟尘，温度应在15℃~40℃之间，湿度在15%~85%之间避免阳光直射，以延缓光学部件的老化操作时电压应保持稳定保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。39四、酶免疫分析仪的使用与维护2.日常维护（1）仪器外部的清洁（2）检查加样系统（3）清洁仪器内部样品盘和微孔板托架周围的泄露物质（4）洗液管路的维护（5）处理废液桶中的废液以及仪器垃圾箱内的一次性吸头，丢弃托盘内已使用过的微孔板。40

3.月维护（1）执行检查程序（1）检查管路及电源线（3）检查样品注射器及与之相连探针（4）检查微孔探测器（5）检查支撑机械臂的轨道四、酶免疫分析仪的使用与维护414.光学部件维护重点是在光学部分，防止滤光片霉变。应定期检测校正检查。滤光片波长精度检查：将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下，在波长精密度较高的紫外-可见分光光度计上在可见光区对每个滤光片进行扫描，其检测值与校定值之差为滤光片波长精度。四、酶免疫分析仪的使用与维护425.全自动酶免分析仪的维护

按仪器操作SOP进行。每日开关机时冲洗管道，对于试验的顺利进行及延长仪器的寿命都极为重要。须用蒸馏水和指定冲洗液进行冲洗，以保证每条工作通道的顺畅。四、酶免疫分析仪的使用与维护43五、酶免疫分析仪的临床应用

1.病原体及其抗体的检测2．各种免疫球蛋白和细胞因子、补体等的检测3．肿瘤标志物的检测4．多种激素的检测5．药物和毒品的检测44第二节自动洗板机

本节要点一、自动洗板机的工作原理二、自动洗板机的基本结构与功能三、自动洗板机的性能指标与评价四、自动洗板机的使用与维护五、自动洗板机的常见故障与排除45

掌握洗板机的使用及性能指标熟悉洗板机的分类及工作原理

了解洗板机的主要结构、维护保养、常见故障和排除第二节自动洗板机学习目标46一、洗板机的工作原理洗板仪器简易型（手动式洗板器）自动型（条式、板式洗板器）集成环境式洗板机（智能）47一、洗板机的工作原理自动洗板机多采用双头真空／压力泵作真空压力源，在管路上还设置一电磁阀，以实现自动吸液、注液功能。微孔板驱动单元完成走板功能，以实现微孔板的逐排冲洗。一般洗涤微孔板的步骤依次为吸干反应液、将洗涤液注满微孔、浸泡一定时间、吸走孔内液，上述步骤重复几次。48二、自动洗板机的基本结构与功能机壳清洗头升降单元微孔板驱动单元压力和真空单元开关电源微处理器外设49（一）清洗头升降单元组成部分：清洗头螺母丝杆升降电机部件二、自动洗板机的基本结构与功能50（二）微孔板驱动单元组成部分：微孔板载盒滑板传动带滑轨走板电机定位簧片二、自动洗板机的基本结构与功能51（三）压力和真空单元组成部分：真空压力泵真空管路压力管路电磁阀洗液瓶废液瓶二、自动洗板机的基本结构与功能52（四）开关电源、微处理器控制单元及外设

开关电源同时为电磁阀、升降电机提供直流电源。微处理器系统组成：

单片机程序存储器数据存储器相应的锁存译码芯片二、自动洗板机的基本结构与功能53三、自动洗板机的性能指标与评价1.硬件部分①冲洗针头设计（单针/双针）：单针是指洗液和排液采用同轴套管设计。而双针设计是指洗液和排液采用双针分离头设计，可最大限度减少交叉污染。②洗液通道数：洗液通道数是指仪器可以同时连接多个洗液瓶的通道数量。通常是1个洗液通道和1个废液通道。也有些有三个或四个洗液通道。54三、自动洗板机的性能指标与评价2.软件控制部分①抽吸方式：不同的抽吸方式可选，底部冲洗和交叉抽吸，单抽吸或双抽吸。②存储量：存储量指存储洗板程序数量。③振板功能：增加振板功能可以让冲洗更充分。55AW1洗板机56三、自动洗板机的性能指标与评价1.自动洗板机的评价指标

残液量的评价指标主要指残液量，是指清洗结束后，微孔板各孔剩余的液体量，这是一个关键指标，很显然残液量大，洗板机的洗板效果相对较差。目前大多数洗板机的残液量为≤5μl，设计良好的洗板机可达≤2μl甚至更小。57三、自动洗板机的性能指标与评价

2.全国医疗器械检测机构基本仪器自动洗板机装备标准部分要求如下：残留体积：每孔残留体积≤2μl；分配重复性：对于标准96孔板，在300μl注射量时，CV值不大于6%；分配准确度：平均体积±3%。58（一）自动洗板机使用

1.检查废液瓶口的塞子，清空废液，再把塞子安紧在废液瓶口上，注意不要让废液管缠绕。2.拧开洗液瓶的盖子，倒掉前一天洗液瓶里剩余的洗液，倒进新配的洗液。拧紧盖子，以保证洗液管的通畅。3.打开电源开关，根据实验要求选择相应洗涤程序和洗涤微孔板条数。

四、洗板机的使用与维护59（一）自动洗板机使用

4.将待洗反应板顺位放入载板架，保证整板处于同一水平位置，以免孔边缘过高碰到吸液针。5.清洗完成后，取出已洗好的微孔板，将载板架弹进。关闭电源。6.拔掉废液瓶口的塞子（接有与洗板机相连的废液管），倒掉废液瓶的废液。四、洗板机的使用与维护60四、自动洗板机的使用与维护（一）洗板机的使用检查废液瓶新配洗液打开电源开关反应板放入载板架关闭电源清空废液瓶保证废液管的通畅倒掉前一天洗液瓶里剩余的洗液选择相应洗涤程序和洗涤微孔板条数板顺位放入一般选择整板洗涤且为8孔模式，每一洗涤循环包括吸液、注水、再吸液三步，设定5个或6个循环61四、自动洗板机的使用与维护1.洗板前、后均要用蒸馏水冲洗管道。2.洗板过程中，板孔中加入缓冲液时有气泡产生或有缓冲液溢出孔外，说明针孔堵塞，应暂停洗板，将洗板针取下，用比洗板针小一号的注射针上下连通几下，用蒸馏水连冲几次即可。3.洗板中有缓冲液溢出，应立即暂停，清理干净后再进行洗板。4.每天工作结束后要对其内外进行清洁，并用蒸馏水将所有的管道清洗一遍，防止洗液的结晶堵塞管道。（二）自动洗板机的维护保养62四、自动洗板机的使用与维护5.及时倒弃废液，以免废液瓶过满而使废液回流造成洗板机的故障。6.保证待洗反应板的孔边缘不要过高且保持水平，以免造成吸液针损伤。7.定期将洗液及废液管道拆卸下来进行冲洗，以保证管道的通畅。8.关机前要把菜单回复到待机状态再关机，平常不用时应拔掉电源插头，用塑料罩或布罩盖住。（二）自动洗板机的维护保养63五、自动洗板机的常见故障和排除1.不能排废液2.关机后程序丢失3.银针清洗时针齐根断在液针孔内4.操作时某一个通道不能进/吸液64小结掌握酶标仪及全自动微孔板式ELISA分析仪的工作原理，酶免疫分析仪、洗板机的性能评价；熟悉酶免疫分析仪的类型及临床应用、洗板机的分类和工作原理；了解酶免疫分析仪、洗板机的主要结构、维护保养、常见故障和排除等65第三节发光免疫分析仪

本节要点一、发光免疫分析概述二、发光免疫分析仪工作原理与基本结构三、化学发光免疫分析仪的性能指标四、发光免疫分析仪的临床应用66

掌握发光免疫分析仪的类型及工作原理。熟悉发光免疫分析的临床应用。

了解各类发光免疫分析的基本结构。学习目标第三节发光免疫分析仪67化学发光：

某些化学反应产生的能量能使其产物或中间态分子激发，形成激发态分子，当其衰退至基态时，所释放出的化学能量以可见光的形式发射，这种现象称为化学发光。第三节发光免疫分析仪68类型 常用标记物 发光剂化学发光免疫分析（CLIA） 吖啶酯 吖啶酯化学发光酶免疫分析（CLEIA） 辣根过氧化物酶鲁米诺微粒子化学发光免疫分析（ECIA）碱性磷酸酶 AMPPD电化学发光免疫分析（ECLIA） 三联吡啶钌 三联吡啶钌一、发光免疫分析概述

表7-1发光免疫分析的种类69化学发光的分类-1酶促化学发光：辣根过氧化物酶系统碱性磷酸酶系统黄嘌呤氧化酶系统非酶促化学发光：吖啶酯系统草酸酯系统70化学发光的分类-2按持发光续时间：闪光（Flash）发光时间在数秒内，如吖啶酯以原位进样(InSituInjector)和时间积分法测量（检测与加样同时进行称原位进样）辉光（Glow）发光时间在数十分钟以上，如：HRP-Luminol系统(辣根过氧化物酶-鲁米诺)

AP-AMPPD(3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐)系统,AP(碱性磷酸酶)

-黄嘌呤氧化酶系统无须原位进样、以速率法测量。71时间发光信号辉光坪区速率法测量原位进样积分法测量闪光尖峰闪光与辉光及其测量方式的差别72(一)全自动化学发光免疫分析系统1．工作原理将某些化学基团标记在抗原或抗体上，这些化学基因被氧化后形成激发态，并在返回基态的同时发射一定波长的光子，光电倍增管将接收到的光能转变为电能，以数字形式反映光量度，再计算测定物的浓度。二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构73

吖啶酯标记CLIA反应原理二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构74(一)全自动化学发光免疫分析系统2.基本结构（1）主机部分：原材料配备部液路部机械传动部光路检测部（2）微机系统二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构75(一)全自动化学发光免疫分析系统3.仪器操作（1）开机、装载试剂（2）定标（3）标本检测（4）维护保养（5）关机二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构76(二)全自动微粒子化学发光免疫分析系统1.工作原理：应用经典的免疫学原理，采用单克隆抗体试剂，采用磁性微粒作为固相载体，以碱性磷酸酶作为标记物，发光剂采用AMPPD，固相载体的应用扩大了测定的范围。二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构77二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构碱性磷酸酶标记的ECIA反应原理78(二)全自动微粒子化学发光免疫分析系统

2.基本结构传送舱主探针系统分析系统流体系统电子系统二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构79DxI-800全自动微粒子化学发光免疫分析仪美国贝克曼公司，具有高特异性、高灵敏性、高准确性、高稳定性，检测速度400T/hr，可检测的项目有：甲状腺功能检测5项、性激素检测6项、贫血检测7项、肿瘤标志物检测7项、心血管检测3项、糖尿病检测3项、乙肝两对半定量检测、HCG、皮质醇、生长素等50个项目80(二)全自动微粒子化学发光免疫分析系统3.仪器使用开机、装载试剂定标标本检测维护保养二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构UniCel™DxI80081罗氏Elecsys2010电化学发光全自动免疫分析仪82深圳麦格鲁米化学发光仪83深圳麦格鲁米化学发光仪试剂杯和样品架84深圳麦格鲁米化学发光仪试剂架85深圳麦格鲁米化学发光仪A磁性微球B低点校准品C高点校准品D空

E荧光标记物F发光标记物86（三）全自动电化学发光免疫分析仪1．工作原理将待测标本与包被抗体的顺磁性微粒和发光剂标记的抗体加在反应杯中共同温育，形成磁性微珠包被抗体-抗原-发光剂标记抗体复合物。当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下的磁铁吸引住，而游离的发光剂标记抗体被冲洗走。同时在电极加电压，启动电化学发光反应，使发光试剂标记物三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光。光的强度与待测物的浓度成正比。二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构87(三)全自动电化学发光免疫分析仪二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构三氯联吡啶钌标记的ECLIA反应原理88电化学发光免疫分析示意图89(三)全自动电化学发光免疫分析仪2．仪器结构：试剂盒、温育反应盘、电化学检测系统及计算机控制系统二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构90(三)全自动电化学发光免疫分析仪3.仪器操作步骤开机、装载试剂定标标本检测维护保养关机二、发光免疫分析仪的工作原理与基本结构91德国西门子ADVIACentaurXP全自动化学发光免疫分析仪92三、化学发光免疫分析仪的性能指标临床使用的发光免疫分析仪有很多种，它具有检测速度快、精度好、重复性高、条码识别系统、24小时待机、系统稳定等特点。市场上常见的三种全自动发光免疫分析仪的性能特点见表7-2。93四、发光免疫分析仪的临床应用

1．甲状腺系统2．性腺系统3．血液系统4．肿瘤标记物5．心血管系统6．血药浓度7．感染性疾病94第四节放射免疫分析仪一、放射免疫技术概述二、液体闪烁计数器基本原理三、液体闪烁计数器的基本结构四、液体闪烁计数器的使用五、放射免疫分析仪的应用

本节要点95

掌握液体闪烁计数器的原理、结构与使用熟悉放射免疫分析的基本原理了解放射免疫分析仪的应用学习目标第四节放射免疫分析仪96放射免疫技术（radioimmunoassay,RIA）是将放射性核素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的高特异性结合在一起，以放射性核素为标志物的最早应用的标记免疫分析技术。第四节放射免疫分析仪97

一、放射免疫技术概述（一）技术原理：

RIA是在体外条件下，由非标记抗原（待测物质）与定量的标记抗原对限量的特异性抗体（一抗）的竞争性抑制结合反应。98（一）技术原理

一、放射免疫技术概述（一抗）99一、放射免疫技术概述（二）放射性活度测定方法1.放射免疫分析常用标记物：常用的标记物有放射γ射线和β射线的核素两大类。前者主要为131I、125I、57Cr和60Co；后者有14C、3H和32P。100一、放射免疫技术概述（二）放射性活度测定方法

2.放射性活度测定方法实际上就是进行放射性量测定的仪器。进行放射性量测定的仪器有两类。液体闪烁计数仪：用于检测β射线，如3H、32P、14C等晶体闪烁计数仪：用于检测γ射线，如125I、131I、57Cr等

101一、放射免疫技术概述（二）放射性活度测定方法

2.放射性活度测定方法液体闪烁计数仪和晶体闪烁计数仪都是将射线（放射能）与闪烁体的作用转换成光脉冲（光能），然后用光电倍增管将光脉冲转换成电脉冲（电能），电脉冲在单位时间内出现的次数（即仪器记录的cpm值）反映了发出射线的频率，而电脉冲的电压幅度则反映了射线能量的高低。

102一、放射免疫技术概述（三）放射免疫分析的优点1.灵敏度高2.特异性强3.应用范围广4.操作简便103一、放射免疫技术概述（三）放射免疫分析的缺点1.方法的局限性2.稳定性问题3.灵敏度问题4.测定结果中的问题5.生物安全问题

104二、液体闪烁计数器基本原理是依据射线与物质相互作用产生荧光效应首先是闪烁溶剂分子吸收射线能量成为激发态，再回到基态时将能量传递给闪烁体分子，闪烁体分子由激发态回到基态时，发出荧光光子。荧光光子被光电倍增管（PM）接收转换为光电子，再经倍增，在PM阳极获得大量电子，形成脉冲信号，输入后读分析电路形成数据信号，最后由计算机数据处理，求出待测抗原含量。105

液体闪烁计数器的结构和性能不断发展，目前多采用双管快符合对称系统多独立道分析，与微机联用，实现了高度的自动化。1．自动换样器2．基本电子学线路3．微机操作系统三、液体闪烁计数器基本结构106四、液体闪烁计数器的使用1．样品-闪烁液反应体系建立样品和闪烁液按一定比例装入测量瓶，向光电倍增管提供光信号。（1）样品：根据样品的可溶性，进行不同的处理。（2）闪烁液：包括溶剂和溶质。（3）测量瓶：常用的测量瓶用低钾玻璃、聚乙烯等材料制作。1072．猝灭样品、氧气、水及色素物质等加入闪烁体中，会使闪烁体的荧光效率降低，出射荧光光谱改变，从而使整个测量装置的测量效率降低的过程称为猝灭。为减小猝灭，可在闪烁液中通氮气或氩气驱氧；将样品pH值调至7左右，避免酸的猝灭作用；对卟啉、血红蛋白等着色样品进行脱色处理等。四、液体闪烁计数器的使用1083．计数效率测定通常用于放射性的相对测量，即通过样品与标准样品的计数率的比较来测定样品。由于标准与待测样品的猝灭情况不同，就需要对猝灭进行必要的校正来求出每个具体样品相对于标准样品的实际计数效率。常用的校正法有内源法，外源法和道比法等目前广泛使用的是外部标准源校正法。四、液体闪烁计数器的使用109五、放射免疫分析仪的应用1.各种激素2.微量蛋白质3.肿瘤标志物4.药物110第五节免疫比浊分析仪一、免疫比浊技术概述二、免疫比浊分析仪工作原理与基本结构三、免疫比浊分析仪的保养四、免疫比浊分析的临床应用

本节要点111

掌握免疫比浊分析仪的种类及工作原理熟悉免疫比浊分析的分类、基本原理及免疫比浊分析仪的临床应用

了解免疫比浊分析仪的结构及保养学习目标第五节免疫比浊分析仪112免疫比浊法（immunoturbidimetry）是利用可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当有光线通过时，就会产生折射或吸收，测定这种折射和吸收后的透射光或散射光，即可计算出样品的含量。一、免疫比浊技术概述113（一）免疫比浊的分类

一、免疫比浊技术概述免疫散射比浊法免疫胶乳浊度测定法速率散射比浊法免疫透射浊度测定法免疫透射比浊法终点散射比浊法114（二）免疫比浊技术的主要特点1.稳定性好，敏感性高2.分析简便、快速3.能更好地避免标本之间的污染和标本对人的污染4.对同一份样品可同时测定多种检测项目，标本用量少，具有明显的应用优势。一、免疫比浊技术概述115（三）免疫比浊技术的基本原理1．免疫透射比浊度测定免疫比浊法测定的光路示意图一、免疫比浊技术概述116（三）免疫比浊技术的基本原理1.免疫透射比浊度测定

抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原增加而增加，反应液的浊度亦随之增加而导致透射光的减少。一、免疫比浊技术概述117（三）免疫比浊技术的基本原理2.免疫散射比浊测定终点散射比浊法散射免疫比浊速率散射比浊法一、免疫比浊技术概述118（三）免疫比浊技术的基本原理2.免疫散射比浊测定（1）终点散射比浊法

在抗原—抗体反应达到平衡时，即复合物形成后作用一定时间，通常为30-60分钟，复合物浊度不再受时间的影响，但又必须在聚合产生絮状沉淀之前进行浊度测定。

一、免疫比浊技术概述119（三）免疫比浊技术的基本原理（2）速率散射比浊法

是一种先进的动力学测定法。速率是指抗原-抗体结合反应过程中，在单位时间内两者结合的速度。速率散射比浊法是测定单位时间内免疫复合物形成的最快时间段(约在1分钟内)的散射信号值。

一、免疫比浊技术概述120（三）免疫比浊技术的基本原理3．免疫胶乳比浊

选择一种大小适中、均匀一致的胶乳颗粒，吸附抗体后，当遇到相应抗原时，则发生凝集。抗原抗体反应后溶液的吸光度或散射光强度与胶乳凝聚程度成正比，与待测抗原浓度呈正相关。采用透射比浊法或散射比浊法测定。

一、免疫比浊技术概述121（一）ARRAY特种蛋白分析测定系统1.工作原理在抗体过量的前提下，悬浮于缓冲液中的抗原-抗体免疫复合物颗粒通过光束时产生的散射光速率变化，散射测浊仪检测出该信号的强弱与抗原浓度成正比，速率峰值经微电脑处理转换成抗原浓度。二、免疫比浊分析仪的工作原理与基本结构122（一）ARRAY特种蛋白分析测定系统

2.

基本结构（1）散射测浊仪（2）加液系统（3）试剂和样品转盘（4）卡片阅读器二、免疫比浊分析仪的工作原理与基本结构123（一）ARRAY特种蛋白分析测定系统3.仪器主要特点（1）速率信号的获取散射测浊仪在检测标本时，散射光信号的第一次变化是反应缓冲液产生的。（2）抗原过剩的监测（3）使用抗体、标准血清、抗体卡片和校正卡片二、免疫比浊分析仪的工作原理与基本结构124（二）BN特种蛋白分析测定系统1．工作原理实质上是透射比浊的一种改良。利用发光二极管（840nm）作为光源，检测在前向角13°～24°的散射光，由硅化光电二极管接收散射光信号，这种散射光的强度与免疫复合物浓度成正比。

二、免疫比浊分析仪的工作原理与基本结构125

2．基本结构由分析仪、计算机、打印机、条码读取器四部分组成。分析仪是该系统的主要部分，包括：散射测浊仪自动加液系统支架运输装置比色杯装置。

二、免疫比浊分析仪的工作原理与基本结构1263.仪器主要特点（1）固定时间测定：该分析仪可以通过固定时间来检测血清特种蛋白浓度。（2）终点检测法：该分析仪通过终点法来检测用胶乳反应的血清特种蛋白浓度，是检测预温30分钟后光散射的值t

。二、免疫比浊分析仪的工作原理与基本结构127（三）IMMAGE免疫分析测定系统

1.工作原理使用760nm和近红外940nm波长作为光源，速率散射比浊速率抑制散射比浊速率近红外颗粒透射法速率抑制近红外颗粒透射法四种检测技术二、免疫比浊分析仪的工作原理与基本结构128（三）IMMAGE免疫分析测定系统2．基本结构和前述ARRAY特种蛋白分析测定系统相似。3.仪器特点（1）加大抗原过量检测范围（2）全方位的条形码系统（3）液面感应（4）测试速度快IMMAGE800特定蛋白仪二、免疫比浊分析仪的工作原理与基本结构129各类免疫比浊分析仪的主要保养包括：1．每日保养2．每月保养3．特殊保养三.免疫比浊分析仪的保养1301．每日保养①检查冲洗液余量及冲洗管道；②检查废液桶及排废管道；③检查仪器底部有无液体渗漏；④检查注射器阀,管道和活塞头；⑤清洁试剂针,样品针,试剂搅拌针和样品搅拌针外表面。三.免疫比浊分析仪的保养1312．每月保养①清洁仪器表面②清洗仪器所有风扇的过滤网③记录仪器工作次数3．特殊保养三.免疫比浊分析仪的保养1321．免疫功能监测2．心血管疾病检测3．炎症状况监测4．类风湿关节炎的检测5．肾脏功能监测6．营养状态监测7．新生儿体检8．凝血及出血性疾病的检测9．贫血监测触球蛋白、转铁蛋白等。10．血脑屏障监测四、免疫比浊分析的临床应用133一、时间分辨荧光免疫分析工作原理二、时间分辨荧光免疫分析仪基本结构三、时间分辨分析仪的性能评价四、时间分辨荧光免疫分析仪的使用与维护五、时间分辨荧光免疫分析的临床应用

第六节时间分辨荧光免疫分析仪

本节要点134

掌握时间分辨荧光免疫分析的原理及特点熟悉时间分辨荧光免疫分析仪的测试原理及临床应用

了解时间分辨荧光免疫分析仪的基本结构及维护学习目标第六节时间分辨荧光免疫分析仪135荧光免疫测定：均相荧光免疫测定法、非均相荧光免疫测定法、直接荧光测量法第六节时间分辨荧光免疫分析仪136一、时间分辨荧光免疫分析工作原理

是用镧系三价稀土离子及其螯合物如铕（Eu3+）等及其螯合物作为示踪剂，代替传统的荧光物质、放射性同位素、酶和化学发光物质，来标记抗体、抗原、多肽、激素、核酸探针或生物活性细胞；

待反应体系（如抗原抗体免疫反应等）发生后，根据稀土离子螯合物有长寿命荧光的特点，通过电子设备控制荧光强度测定时间，待短寿命的自然本底荧光完全衰退后，再进行产物的长寿命荧光强度测定，以此来判断反应体系中被测物质的浓度。137一、时间分辨荧光免疫分析工作原理当免疫反应发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点，用时间分辨荧光分析仪延缓测量时间，排除标本中非特异性荧光(蓝)的干扰，所得信号完全是稀土元素螯合物发