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代替GB/T19370—2003饲料添加剂第9部分:着色剂β-胡萝卜素粉2019-12-17发布2020-07-01实施I本部分的第1章、第4章、第6章和第7章为强制性的,其余为推荐性的。GB7300《饲料添加剂》按产品分为若干部分。本部分为GB7300的第901部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分代替GB/T19370—2003《饲料添加剂1%β-胡萝卜素》,与GB/T19370—2003相比,除编辑性修改外主要技术变化如下:——修改了标准的适用范围(见第1章,2003年版的第1章);——修改了β-胡萝卜素含量要求(见4.4,2003年版的3.2);——删除了灼烧残渣指标(见4.4,2003年版的3.2);——删除了铅指标,增加了“重金属”指标(见4.4,2003年版的3.2);——增加了粒度的规定(见4.4,2003年版的3.2);——修改了鉴别方法(见6.2,2003年版的4.3);——修改了紫外-可见分光光度法(见6.3.1;2003年版的4.4);——增加了高效液相色谱法(见6.3.2);——修改了总砷的测定方法(见6.6,2003年版的4.6)。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由中华人民共和国农业农村部提出并归口。本部分起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心(北京)]、浙江省兽药饲料监察所、广州立达尔生物科技股份有限公司。本部分所代替标准的历次版本发布情况为: 1饲料添加剂第9部分:着色剂GB7300的本部分规定了饲料添加剂β-胡萝卜素粉的技术要求、取样、试验方法、检验规则、标签、本部分适用于以化学合成的β-胡萝卜素晶体为原料,添加淀粉、明胶等辅料经喷雾、包被、干燥制成的饲料添加剂β-胡萝卜素粉。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB/T5917.1饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T6435—2014饲料中水分的测定GB/T6438饲料中粗灰分的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定GB8821—2011食品安全国家标准食品添加剂β-胡萝卜素GB10648饲料标签GB/T13079—2006饲料中总砷的测定GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备化学名称:1,1'-(3,7,12,16-四甲基)-(1,3,5,7,9,11,13,15,17-十八碳壬烯-1,18-二基)双(2,6,6-三甲基环己烯)相对分子质量:536.88(按2016年国际相对原子质量)结构式:4技术要求4.1原料要求以化学合成β-胡萝卜素为原料,含量规格为96.0%~101.0%。24.2外观与性状应符合β-胡萝卜素的紫外-可见光吸光度要求,或液相色谱图的特征。理化指标应符合表1的规定。表1理化指标指标β-胡萝卜素含量(以CoHs计,占标示量的百分比)/%≥干燥失重/%≤通过孔径为0.84mm(20目)筛网≥通过孔径为0.15mm(100目)筛网,筛下物<总砷/(mg/kg)≤重金属(以Pb计)/(mg/kg)≤5取样按照GB/T14699.1的规定执行。6试验方法6.1感官检验取适量样品置于清洁干燥的白瓷盘中,在自然光线下观察其色泽。6.2鉴别试验鉴别1:将6.3.1.5得到的5mL待测溶液,加入5mL环己烷混匀,置于1cm比色皿中,以环己烷为空白,在波长455nm和483nm处测定吸光度A₄和A₄83。A₄s₅/A₄3的比值应在1.10~1.30。鉴别2:按照色谱条件向色谱柱中注入全反式β-胡萝卜素标准工作溶液(6.3.2.2.12)和6.3.2.4得到的待测溶液B,试样溶液中主峰的保留时间与标准溶液中全反式β-胡萝卜素色谱峰的保留时间一致。标准工作溶液的色谱图参见附录A中图A.1。酶解破膜后,用无水乙醇和二氯甲烷提取β-胡萝卜素,用环己烷稀释至适当浓度后,用紫外-可见分光光度仪在波长421.0nm处测定试样溶液的吸光度。因试样中β-胡萝卜素的顺、反异构体在该波长处3GB7300.901—2019有相同的百分吸光系数,根据该百分吸光系数计算试样中β-胡萝卜素的总量。本部分所用的试剂,除特殊说明外,均指分析纯试剂。6.3.1.2.6碱性蛋白酶:酶活力>40000单位/g。6.3.1.3仪器设备6.3.1.3.1分析天平:感量为0.0001g、0.00001g。6.3.1.3.2超声波振荡提取器。6.3.1.3.4紫外-可见分光光度计:波长在421nm处精度为±0.3nm(或临用前校准)。按照GB/T20195规定执行。平行做两份试验,称取样品适量(相当于10mgβ-胡萝卜素),置于250mL棕色容量瓶中。在容量瓶中加入100mgBHT,200mg碱性蛋白酶,10mL水,于50℃水浴中超声提取30min。加入100ml无水乙醇,135mL二氯甲烷,摇匀后继续超声处理5min。待提取液冷却后,用二氯甲烷稀释至刻度,摇匀,取适量于4000r/min离心5min。准确吸取上清液10mL,置于100mL棕色容量瓶中,加入10mL无水乙醇,用环己烷溶解并稀释至刻度,摇匀后即为待测溶液。用紫外-可见分光光度仪以环己烷为空白,1cm比色皿测定试样溶液(6.3.1.5)在工作波长421nm处的吸光度,6.3.1.7试验数据处理 (1)A——试样溶液吸光度;2500——稀释体积,单位为毫升(mL);1480——β-胡萝卜素在波长421nm处的百分吸光系数;m——试样质量,单位为克(g)。试样中β-胡萝卜素含量占标示量的百分比w₂(%),按式(2)计算:4GB7300.901—2019w₁——β-胡萝卜素含量;结果用算术平均值表示,保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值,不大于这两个测定值算术平均值的3%。6.3.2高效液相色谱法(仲裁法)本部分所用的试剂,除特殊说明外,均指分析纯试剂,试剂和溶液的制备应符合GB/T602和6.3.2.2.10稀释液:甲醇和乙腈按体积比为1:1的比例混合。6.3.2.2.11全反式β-胡萝卜素标准贮备溶液:取6mg的全反式β-胡萝卜素对照品(含量≥96.0%)于100mL的棕色容量瓶中,加入0.5gBHT,用四氢呋喃溶解并稀释至刻度,摇匀。冰箱中密闭冷冻6.3.2.2.12标准工作溶液的制备及质量浓度的标定:入5mL无水乙醇,用环己烷溶解并稀释至刻度,摇匀。以环己烷为空白,用1cm的比色皿测定溶液在455nm处的最大吸光度。标准溶液的质量浓度按式(3)计算:Amx——全反式β-胡萝卜素在455nm波长处的最大吸光度;510000——单位转换系数;2500——全反式β-胡萝卜素在455nm波长处的百分吸光系数。6.3.2.3.1分析天平:感量为0.0001g、0.00001g。6.3.2.3.4高效液相色谱仪,配有紫外吸收检测器(或二极管矩阵检测器)。按6.3.1.5中“平行做两份试验,称取样品适量(相当于10mgβ-胡萝卜素),……于4000r/min离心5min”,准确吸取上清液5mL,置于50mL棕色容量瓶中,用稀释液(6.3.2.2.10)定容,摇匀后即为待测溶液。流动相:在1L的容量瓶中加入50mg的BHT,用20mL的异丙醇溶解,加入0.2mL的N-乙基二异丙胺,25mL0.2%乙酸铵溶液,455mL的乙腈和450mL的甲醇,摇匀,溶液至室温后用甲醇定按照色谱条件,向色谱柱中注入全反式β-胡萝卜素标准工作溶液及试样待测溶液B,得到色谱峰面积响应值,用外标法定量。注:全反式β-胡萝卜素的保留时间约为17min。色谱图A.1中顺式β-胡萝卜素的定位通过其与全反式β-胡萝卜素的相对保留时间来确认。在推荐的色谱条件下,9-顺式β-胡萝卜素与全反式β-胡萝卜素的相对保留时间约为1.13,13-顺式β-胡萝卜素与全反式β-胡萝卜素的相对保留时间约为1.19,15-顺式β-胡萝卜素与全反式β-胡萝卜素的相对保留时间约为1.25。试样中β-胡萝卜素(CH₅₆)含量w₃以质量分数(%)表示,按式(4)计算:式中:Pang——试液中反式β-胡萝卜素的峰面积;Ppcis——试液中9-顺式β-胡萝卜素的峰面积;1.2——13-顺式β-胡萝卜素的相对校正系数;Piads——试液中13-顺式β-胡萝卜素的峰面积;…………1)Vydac218TP54是由美国格雷斯(GRACE)公司提供的色谱柱商品。给出这一信息是为了方便本部分的使用者,并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品。6GB7300.901—20191.4——15-顺式β-胡萝卜素的相对校正系数;Piscis——试液中15-顺式β-胡萝卜素的峰面积;p——全反式β-胡萝卜素标准工作溶液的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);2500——稀释体积,单位为毫升(mL);Psa——全反式β-胡萝卜素标准工作溶液的的峰面积;m——试样的质量,单位为克(g);10000——单位转换系数。试样中β-胡萝卜素含量占标示量的百分比w₄(%),按式(5)计算:式中:w₃——β-胡萝卜素含量;K——β-胡萝卜素标示量。结果用算术平均值表示,保留三位有效数字。6.3.2.8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于这两个测定值算术平6.4干燥失重按照GB/T6435—2014中8.1直接干燥法测定。6.5粒度按照GB/T5917.1测定,结果称取筛下物,以通过率表示。6.6总砷称取试样2.50g(精确到0.001g),按照GB/T13079—2006中第5章银盐法(仲裁法)测定。6.7重金属称取1g(精确到0.0001g)试样,按GB/T6438对其进行灰化,然后按照GB8821—2011中A.6测定。7检验规则以相同材料、相同生产工艺、连续生产或同一班次生产的同一规格的产品为一批,但每批产品不得超过30t。7.2出厂检验出厂检验项目为外观与性状、β-胡萝卜素含量、干燥失重、粒度。7.3型式检验型式检验项目为第4章规定的所有项目。在正常生产情况下,每半年至少进行1次型式检验。有下列情况之一时,亦应进行型式检验:a)产品定型投产时;b)生产工艺、配方或主要原料来源有较大改变,可能影响产品质量时;c)停产3个月以上,重新恢复生产时;d)出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时;e)饲料行政管理部门提出检验要求时。7.4判定规则7.4.1所验项目全部合格,判定为该批次产品合格。7.4.2检验结果中有任何指标不符合本部分规定时,可自同批产品中重新加倍取样进行复检。复检结果有一项指标不符合本部分规定,即判定该批产品不合格。7.4.3各项目指标的极限数值判定按GB/T8170中全数值比较法执行。8.1标签按GB10648规定执行。8.2包装8.3
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