下载本文档
版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
2/2高效液相色谱梯度洗脱时应该注意的问题?
2023-05-2619:21在进行梯度洗脱时,由于多种溶剂混合,而且组成不断变化,因此带来一些特殊问题,必须充分重视:
(1)要注意溶剂的互溶性,不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定的比例内互溶,超出一定的范围后就不会互溶。例如:乙腈和1mol/L的醋酸铵(PH5.16)做梯度洗脱,乙腈含量超过70%时就会出现不溶等。当有机溶剂和缓冲溶液混合时还可能析出盐的结晶体,尤其使用磷酸盐时需特别小心;
(2)梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高,以保证好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱,以辨认溶剂杂质峰,因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头上后会被强的溶剂洗脱出来,用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气,以防止溶剂混合时产生气泡;
(3)混合溶剂的粘度常随组成而变化,因此在梯度洗脱时常会出现压力变化,例如纯水或甲醇的粘度都比较小,但是当二者以相近的比例混合时粘度会增大很多(甲醇-水体积比为1:1时压力最大),因此要防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱所能承受的最大压力;
(4)每次梯度洗脱程序运行完之后必须对色谱柱进行彻底平衡,使其恢复到初始的状态,需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱,使固定相和初始流动相达到完全平衡,平衡不好会影响下一针样品的分离度和保留时间:下图所示的平衡时间从从上到下分别为6、7、8、9分钟,可以看出平衡6、7分钟第一个峰的保留时间有明显的变化,说明6到7分钟的平衡时间不足,而8、9分钟所有峰保留时间变化不大,说明色谱系统平衡充足;
(5)注意梯度洗脱用水的有机物残留,往往在等度洗脱时用的水,在梯度洗脱时发生问题(鬼峰),这是因为在梯度过程中,水占的比例很高时的流动相洗脱能力很低,此时水中的有机物残留就被色谱柱吸附并浓缩,等到强溶剂占高比例时,浓缩的有机物被高洗脱能力的流动相洗脱而流出色谱柱,并成为一个色谱峰,从而干扰分析;
(6)梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器(如紫外吸收检测
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 【正版授权】 IEC 62552-1:2015 EN-FR Household refrigerating appliances - Characteristics and test methods - Part 1: General requirements
- 2024版正规的员工劳动合同
- 【正版授权】 IEC 62493:2015/AMD1:2022 EN-FR Amendment 1 - Assessment of lighting equipment related to human exposure to electromagnetic fields
- 【正版授权】 IEC 62484:2020 EN-FR Radiation protection instrumentation - Spectrometric radiation portal monitors (SRPMs) used for the detection and identification of illicit trafficking
- 装修逾期终止合同协议书(2024版)
- 皮具买卖合同
- 证券交易合约协议
- 2023年板材无模多点成型压力机项目评估分析报告
- 医院综合楼建设工程合同
- 农村宅基地使用协议
- 灌砂法压实度检测记录表(自动计算表)
- 中考历史广东省学业考试复习提纲人教版-按考点
- PEP人教版三年级英语上册全册课件【完整版】
- 华为HCIP-H13-624V5.0存储认证考试题库
- 监理通风与空调质量评估报告
- 接案谈话笔录
- 部编版语文六年级下册第三单元 复习课件
- 医院医疗质量检查表(营养科)
- 标杆企业产品线及其精装豪宅标杆研究-66p
- 河北省县市乡镇卫生院社区卫生服务中心基本公共卫生服务医疗机构名单目录地址2415家
- DB37-T 1428-2022玉米秸秆还田与小麦全程机械化生产技术规程
评论
0/150
提交评论