高考生物二轮复习 基因工程 学案

第3讲基因工程

-----自主梳理•再夯基础/-------------

网缁蠲遗《I

操作对象:③

蛋

基

白

因

发展质

工

工

程

程

④.

1.（2022•江苏高考仿真模拟调研）科研工作者在盐碱地中找到了一种生长良

好且耐盐碱的植物（以下简称植物a）。研究人员发现，植物a的液泡膜上特有一

种Na+/IC逆向转运蛋白，这种蛋白是植物a耐盐碱的原因，并在植物a中找到

控制该蛋白合成的Na+/K+逆向转运蛋白基因（7hN"X2基因）。该基因就是研究人

员要找的耐盐碱的目的基因。研究人员进一步获得了如下图所示的物质结构。拟

利用这些材料，用基因工程技术培育转基因棉花。

BaniWI3AIBamH1

「目的基因’『

EcoRIEcoRI

含有目的基因的DNA片段

启动子EcoRi

Sau3AI

复制

终止子

原点

抗生素抗性基因

农杆菌Ti质粒结构示意图

注：Sau3AI、EcoRI、BamHI为三种限制酶，Sail3AI、BamHI切割形

成的黏性末端相同。

用基因工程技术培育转基因棉花的操作程序包括四个步骤：

(1)目的基因的获取：将植物a不同基因的DNA片段导入受体菌的群体中

储存，再根据目的基因的特定序列从受体菌中提取该基因，这种获取目的基因的

方法称

为O

(2)构建基因表达载体：计划用EcoRI分别切割上图中DNA片段和上图所

示质粒，以构建基因表达载体。

①构建表达载体除限制酶外还需要的工具酶是;

②本方案的缺陷是：可能导致以及目的基因与质粒

的反向连接。

③为避免上述缺陷，最佳方案是用切割上图的DNA片段,

用切割上图质粒。

(3)将导入受体细胞。成功导入受体细胞后，还需要利用

技术才能得到转基因棉花幼苗，这一技术的原理是o

(4)目的基因的检测与鉴定：要在个体生物学水平上检测耐盐新品种的培育

效果，检测方法是。

2.(2022•南京、盐城一模)研究发现人溶菌酶(hLZ)是天然抗生素替代品。科

学家培育出转人溶菌酶基因山羊，以大规模生产人溶菌酶(从乳汁中提取)，过程

如下图所示。其中编号①〜⑨表示过程；质粒S中的基因Leu通过控制相关酶

的合成而影响亮氨酸的合成(亮氨酸是山羊细胞维持生命活动必不可少的一种必

需氨基酸)，基因GbP控制合成绿色荧光蛋白。四种限制酶的识别序列及切割位

点见下表。请回答下列问题。

限制酶BamHIBglUHindUlXbaI

识别序列和切割位

G1GATCCAIGATCTAIAGCTTT1CTAGA

点

BamWI

--HindWl

--Xbal

重组质粒T

质粒S

I@卵母细胞

7V

囱G/XTCCAT……GGA

-»GTA……CCTTCGA

vwv-------------------早期胚胎转基因羊

AWWB山羊胎儿的

成纤维细胞

(1)物质A控制溶菌酶的合成包括转录和翻译两个阶段，涉及的场所主要有

(2)过程①通过PCR技术扩增物质A,需要的酶是；过程②需要

的限制酶是；过程③需要的酶是限制酶和0

(3)为成功筛选出含重组质粒T的成纤维细胞，质粒S中用作标记基因的是

和o为达到筛选目的，培养基的营养成分中应不含有o

将成纤维细胞培养一段时间后观察，筛选出_______(选填“显示”或“不显

示”)绿色荧光的细胞用于过程⑤。

(4)过程④常用法，过程⑨为,图中早期胚胎的

(结构)将发育成转基因羊。

------*增考向引领•核心突破----

核心考点1考查基因工程的基本理论

局颜瓢宿

高考对该热点的考查形式为选择题或非选择题，主要命题方向：

1.结合基因工程基本概念的理解及基本操作工具的作用，考查科学思维能

力。

2.联系转基因技术的安全性实例，考查社会责任。

国题图圜I

(2014•江苏卷23)(多选)下列关于基因工程技术的叙述，错误的是()

A.切割质粒的限制酶均特异性地识别6个核昔酸序列

B.PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应

C.载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因

D.抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达

笔记：___________________________________________________________

国置匾83

1.基因工程的三大操作工具

限制性内切核酸酶DNA连接酶载体

拼接DNA片段，形携带目的基因进入受

作用切割目的基因和载体

成重组DNA分子体细胞

能在宿主细胞内稳定

识别特定的核甘酸序

存在并大量复制；

作用列；能连接黏性末端和平

有一个至多个限制酶

特点在特定位点上切割DNA末端

切割位点；

分子

具有特殊的标记基因

2.认识PCR技术

(1)原理：体外DNA复制。

⑵需要条件：模板DNA、2种弓|物、4种脱氧核甘酸、热稳定DNA聚合

酶(Thq酶)。

(3)过程：DNA受热(90〜95C)变性解旋为单链，冷却(55〜60C)后引物与

单链相应互补序列结合(复性)，然后在DNA聚合酶作用下延伸(70〜75℃)合成

互补子链。

3.理解基因表达载体

启动子:位于目的基因首端，它是RNA聚合酣识别和结合的部位，驱动转录出mRNA）

插入一…1目的基因位于此区间

表达载体

复制原点...终止子:位于目的基因尾端，它是使转录终止的一段有

可启动“复制过程”一抗生素抗特殊结构的DNA短片段

性基因

［标记基因可作为制备筛选工程菌株选择培养基“参照”）

1.（2022•南通四模）递减PCR是常规PCR技术的发展，下图表示递减

PCR各阶段温度及时间控制。相关叙述错误的是（）

第1阶段第2阶段（10个循环）第3阶段（30个循环）第4阶段

96t：95t每个循环降1七；95t

0.45s\(72tX045s

4min72t:72t

\It:/1min;

/1min10min

52t/

0.45s

0.45s

,41c

保存

A.PCR反应体系中应加入Taq酶、模板DNA、dNTP、引物、缓冲液等

物质

B.第1阶段的目的是使模板DNA充分解旋，减少DNA复杂结构对扩增

的影响

C.第2阶段中退火温度较高可减少引物与模板链的非特异性结合，为第3

阶段提供更多正确的模板

D.第4阶段72C下维持10min,主要目的是使子链与互补模板链结合形

成双螺旋

2.（2022•南京师大附中开学考试）（多选）载体是基因工程中携带外源DNA

片段（目的基因）进入受体细胞的重要运载工具，常见的载体类型主要有基因克隆

载体和基因表达载体。下图是利用细菌生产人胰岛素的基本流程示意图。下列相

关叙述正确的是（）

构建蓟、导入小

OII

I构佳导入提取cC限制酶I细雨

体娟白■切割”丫

便一体・・菌一

细菌A胰岛素基因

人体染色体DNA片段

平板筛选、鉴定分析

A.重组载体A、重组载体B分别是基因克隆载体和基因表达载体

B.载体A和载体B都必须含有限制酶切割位点、复制原点和标记基因

C.必须把目的基因插入重组载体A的启动子和终止子之间

D.培养细菌A和细菌B的培养基在营养成分和功能上没有明显差异

核心考点2综合考查基因工程的操作流程及应用

高考对该热点的考查形式为非选择题，主要命题方向：

1.结合基因工程的操作步骤过程图解，考查科学思维能力。

2,结合科技热点及基因工程的应用实例，考查科学思维和探究能力。

囿国图图I

画回（2021•江苏卷・13）下图是剔除转基因植物中标记基因的一种策略。

下列相关叙述错误的是（）

无筛选标记

传基因植株

杂交分离

A.分别带有目的基因和标记基因的两个质粒，都带有TDNA序列

B.该方法建立在高转化频率基础上，标记基因和目的基因需转到不同染色

C.若要获得剔除标记基因的植株，转化植株必须经过有性繁殖阶段遗传重

D.获得的无筛选标记转基因植株发生了染色体结构变异

笔记：...........................................................

画国（2021•江苏卷23）某小组为研究真菌基因m的功能，构建了融合

表达蛋白M和加g标签的质粒，请结合实验流程回答下列问题。

SmaI

上游同源序列GGG1CCC卜'游同源序列

5,-GGATTCrAGMClAGrGGArCCCCCCCC：：GGGGAAAATTTATATTrT^AAGGTCAAT-3,

3,-CCTAAGATCin'GATCACCTAGGGGGGGGMCCCCTTTTAAATATAAAA：GTTCCAGTTA-5,

引牧四/

5,---------3’

3’---------5’经Sma1单醐切

麻刎”基因m

启动字/ag左列

载体

混合酶处理A

5,

3’Am[f

添加同源序列的mURA3

6=0==O=j)

启动子Sg序列URA3：酵母筛选标记基因，缺失该

基因酵母无法合成尿唯嘘

Amp',大肠杆菌的筛选标记

URA3编码氨芋背霉素抗性基因

A-m结合体

Sg序列：编码特定氨甚酸序列

导入大肠杆菌可被特异性抗体识别

fp4>=O=^

启动子fag序列导入酵母n表达

4=0=^培养筛选

URA3Amd融合sg标

获得目的菌株

重组质粒A-m签的蛋白M

(1)目的基因的扩增

①提取真菌细胞,经逆转录获得cDNA,进一步获得基因m片段。

②为了获得融合fag标签的蛋白M,设计引物P2时，不能包含基因加终

止密码子的编码序列，否则将导致o

③热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除TizqDNA聚合酶(7hq

酶)以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94C开始PCR

扩增。下列叙述正确的有()

A.Taq酶最适催化温度范围为50-60℃

B.与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物

C.两条子链的合成一定都是从5,端向3,端延伸

D.PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了Taq酶的特异性

(2)重组质粒的构建

①将SmaI切开的载体A与添加同源序列的m混合，用特定DNA酶处理

形成黏性末端，然后降温以促进_____________,形成A-m结合体。将A-m结

合体导入大肠杆菌，利用大肠杆菌中的DNA聚合酶及酶等，完成质粒

的环化。

②若正确构建的重组质粒A-m仍能被SmaI切开，则SmaI的酶切位点可

能在o

(3)融合蛋白的表达

①用含有尿喀咤的培养基培养URA3基因缺失型酵母，将其作为受体菌，导

入质粒A-m,然后涂布于无尿喘噬的培养基上，筛选获得目的菌株，其机理是

②若通过抗原一抗体杂交实验检测到酵母蛋白中含tag标签，说明

后续实验可借助tag标签进行蛋白M的分离纯化。

笔记：___________________________________________________________

H0（2020•江苏卷・33）如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的

方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如下图所示（以EcoRi酶切

为例）。请据图回答问题。

I酶切［EcoRl

混合的DNA片段

卡知序:列|亡知序列I卡知序:列I片段F

环状DNA

UI扩增|物DNA聚合酶

।।PCR产物

IV测序、分析|

5'.............................................................................................3'片段F的完整序列

（1）步骤I用的ECORI是一种酶，它通过识别特定的

切割特定位点。

（2）步骤n用的DNA连接酶催化相邻核甘酸之间的3,羟基与5,磷酸间形成

;PCR循环中，升温到95℃是为了获得；7hq酶的

作用是催

化o

（3）若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物，步骤HI选用的

PCR引物必须是（从引物①②③④中选择，填序号）。

DNA序列（虚线处省略了部分核甘酸序列）

5-AACTATGCGCTCATGA…GCAATGCGTAGCCTCT-3'

已知序列

3f-TTGATACGCGAGTACT-CGTTACGCATCGGAGA-5,

①5-AACTATGCGCTCATGA—3'

(2)5,-GCAATGCGTAGCCTCT-3,

PCR引物

@5,-AGAGGCTACGCATTGC-3,

@5,-TCATGAGCGCATAGTT-3,

（4）对PCR产物测序，经分析得到了片段F的完整序列。下列DNA单链序

列中（虚线处省略了部分核甘酸序列），结果正确的是（）

A.5-AACTATGCG…AGCCCTT—3'

B.5-AATTCCATG…CTGAATT-3'

C.5,-GCAATGCGT-TCGGGAA-3,

D.5,-TTGATACGC-CGAGTAC-3,

笔记：...........................................................

翳图南图/

1.基因组文库与部分基因文库

基因文库类型基因组文库部分基因文库（cDNA文库）

某种生物全部DNA某种生物发育的某个时期的mRNA

!限制酣|逆转求

构建基因

许多DNA片段cDNA

文库的过程

）。载体连接导入|Lj我体连接导人

受体菌群体受体菌群体

2.目的基因导入受体细胞的方法

细胞种类植物细胞动物细胞微生物细胞

农杆菌转化法、基因枪

常用方法法、显微注射技术感受态细胞法（Ca2+处理法）

花粉管通道法

受体细胞体细胞或受精卵受精卵原核细胞

3.农杆菌转化法的原理

植物受损伤时伤口处分泌物可吸引农杆菌f农杆菌中Ti质粒上的T-DNA

可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体DNA上（若将目的基因插入到Ti质

粒的T-DNA上，则目的基因将被一起带入）。

4.目的基因的检测与鉴定

（2022•扬州三模）酵母细胞基因转录需要转录因子，转录因子包括DNA结合

功能域（DNA-BD）和转录激活结构域（DNA-AD）,两结构域分开时不能激活转录。

如果将待测蛋白质X与DNA-BD融合，蛋白质Y与DNA-AD融合，蛋白质

X和Y有相互作用时，两结构域能重新呈现完整转录因子活性，并可激活报告

基因的转录，过程如图1所示。已知报告基因LacZ表达的酶可以将无色化合

物X-gal水解成蓝色产物。研究人员为了验证蛋白质X和Y是否具有相互作

用，分别构建不同的酵母表达载体（如图2和图3所示），其中A桃「为氨芳青

霉素（抑制细菌细胞壁的形成）抗性基因，HIS3和TRPI分别为控制组氨酸和色

氨酸合成的基因。请回答下列问题。

相标‘…"

1使用外引物赤第一次

—PCR扩增

中间产物一

I使用氟1物进行第二次

图4巢式PCR的工作原理示意图

（1）研究小组采用了巢式PCR技术获取蛋白质X和Y基因的编码区序列，

技术原理是利用两套PCR引物进行两轮PCR扩增（如图4所示），首先利用第一

对引物（外引物）对目的基因所在DNA进行15〜30个循环的扩增；第二轮扩增以

第一轮扩增产物为模板，利用第二对引物（内引物或巢式引物）进行15〜30个循

环扩增。相比于常规PCR获得的产物而言，巢式PCR获得的产物特异性

（填“强”或“弱”），原因是o

（2）研究人员的主要技术路线如下表所示，请完善下表:

实验目的方法步骤要点（部分）

巢式PCR扩增蛋白质丫编码区序列时需在两个

①________（填“内”“外”或“内和外”）引物的5，

获取X和丫基因的编

端分别添加序列②___________________；为验证目

码区序列

的基因在PCR扩增时是否发生了基因突变，可对

PCR产物进行③____________o

用特定限制酶切割目的基因和载体并连接，连接产物

导入大肠杆菌后扩增；为确定质粒构建是否成功，需

pLexA-JL和pB42AD

要抽提两种质粒并酶切，电泳后观察④

载体的构建

____________________________________________________________________0

将成功构建的载体通过⑤___________法导入到营养

缺陷型酵母菌中，培养基中需添加物质有

转化酵母细胞⑥____________（用下列字母填写）。

a.氨茉青霉素b.色氨酸c.亮氨酸d.X-gal

e.琼脂f.甲硫氨酸

通过观察培养基中⑦___________来验证蛋白质X和

实验验证

Y是否具有相互作用。

（3）酵母双杂交技术在研究和鉴定蛋白质互作方面起着重要的作用。下列选

项中适合采用此技术进行研究的有。

A.在细胞体内检测抗原和抗体能否发生相互作用

B.判断控制某一性状的两对基因是否能够独立遗传

C.判断RNA聚合酶与某启动子的结合是否具有组织特异性

D.筛选宿主细胞上能与新冠病毒S刺突蛋白特异性结合的受体

第3讲基因工程

-----自主梳理•再夯基础1Y〉-------------

【网络构建】

①DNA连接酶②构建基因表达载体③基因

④没有的蛋白质

【基础自评】

1.(1)从基因文库中获取目的基因

(2)①DNA连接酶②目的基因和质粒的自我环化③EcoRI、I

EcoRISau3A.I

(3)目的基因植物组织培养细胞的全能性

(4)将转基因棉花种植在盐碱地，观察其生长状况

解析：(1)获取目的基因的方法有：从基因文库中获取、利用PCR技术扩增

和人工合成法，而将植物a不同基因的DNA片段导入受体菌的群体中储存，再

根据目的基因的特定序列从受体菌中提取该基因，这种获取目的基因的方法称为

从基因文库中获取目的基因。

(2)①构建表达载体除限制酶外还需要的工具酶是DNA连接酶，限制酶用

于切割目的基因和质粒载体，DNA连接酶用来连接目的基因和质粒载体；②用

EcoRI分别切割图1中DNA片段和图2所示质粒，由于只有一种黏性末端，

可能导致目的基因和质粒的自我环化以及目的基因与质粒的反向连接。③已知

Sa〃3Al、Ba〃汨I切割形成的黏性末端相同，由图可知在目的基因两侧有

EcoRI、BamHI的识别位点，在质粒上有Sau3AI、EcoRI的识别位点，故为

避免目的基因和质粒的自我环化以及目的基因与质粒的反向连接，最佳方案是用

两种限制酶EcoRI、BamHI切割图1的DNA,用EcoRI、Sau3AI切割图2

质粒。

(3)目的基因成功导入受体细胞后，要想得到转基因棉花苗，还需要利用植

物组织培养技术，这一技术的原理是植物细胞的全能性。

(4)目的基因的检测与鉴定有分子水平检测和个体水平检测，要在个体生物

学水平上检测耐盐新品种的培育效果，检测方法是将转基因棉花种植在盐碱地，

观察其生长状况。

2.(1)细胞核和核糖体

(2)Taq酶BamHI、HindIIIDNA连接酶

(3)基因Leu基因GFP亮氨酸不显示

(4)显微注射胚胎移植内细胞团

解析：(1)溶菌酶是蛋白质，蛋白质的合成场所在核糖体，物质A是基因，

主要存在于细胞核，故物质A控制溶菌酶的合成包括转录和翻译两个阶段，涉

及的场所主要有细胞核和核糖体。(2)过程①通过PCR技术扩增物质A基因，

即完成DNA体外复制，需要的酶是Taq酶（耐高温的DNA聚合酶）。过程②是

获取目的基因，据图分析，B形成的黏性末端GATCC…与BamHI的识别序列

一致，黏性末端AGCTT…与“由dHI的识别序列一致，故物质B是用限制酶

BamHI、4〃dill切割的结果。过程③是将目的基因和质粒S用同种限制酶切害U，

再连接形成重组质粒，需要的酶是DNA连接酶。（3）为成功筛选出含重组质粒

T的成纤维细胞，质粒S中用作标记基因的是基因Leu和基因GFP。据第2问

的分析可知，用限制酶及》出11、4〃din切割质粒s和目的基因，形成的重组质

粒T是（Leu+XOal+B）,不含有基因GRP,无法控制合成绿色荧光蛋白，而标

记基因Leu控制合成亮氨酸，为达到筛选目的，培养基的营养成分中应不含有

亮氨酸，将成纤维细胞培养一段时间后观察，含重组质粒T的成纤维细胞可以合

成亮氨酸而存活，只需要筛选出不显示绿色荧光的细胞用于过程⑤即可。（4）过

程④是将目的基因导入受体细胞，动物常用显微注射法，过程⑨为胚胎移植。图

中早期胚胎的内细胞团是发育为胚胎本身的基础细胞，将发育成转基因羊。

--------^>-1考向引领•核心突破涉-----

核心考点1

【真题解读】

ABC命题意图：本题意在考查基因工程的基本理论，要求学生能理解所学

知识的要点，把握知识间的内在联系。本题属于中等难度题。

名师点睛：不同的限制酶识别的核甘酸序列的数目不同；PCR中温度的周期

性改变是不同反应步骤需要不同的温度，如高温解旋，低温复性，中温延伸；载

体质粒通常采用抗生素抗性基因作为标记基因；外源基因导入受体细胞染色体上

后未必能正常表达。

【命题猜想】

1.D解析：PCR反应体系中应加入Taq酶（催化DNA子链的形成）、模板

DNA、dNTP（原料）、引物、缓冲液等物质，A正确；据图可知，第1阶段是在

96℃条件下处理4min,该阶段的目的是使模板DNA在高温下充分解旋，得到

单链DNA,以减少DNA复杂结构对扩增的影响，B正确；引物的碱基数量越

少，变性时破开的氢键越少，则退火温度越低，但能与引物发生配对的片段就越

多，目标DNA获得率越低，故第2阶段中退火温度较高可减少引物与模板链的

非特异性结合，为第3阶段提供更多正确的模板,C正确；72℃下维持10min,

主要目的是使引物链延伸，以形成新的脱氧核甘酸链，D错误。

2.AB解析：重组载体A导入受体菌后随着受体菌的繁殖而扩增，因此是

基因克隆载体，而重组载体B导入受体菌后，表达产生胰岛素，因此是基因表达

载体，A正确；作为运载体必须要具备的条件有：含有限制酶的切割位点（便于

目的基因的插入）、复制原点（便于目的基因的扩增）及标记基因（便于筛选含有目

的基因的受体细胞）等，因此载体A和载体B都必须含有限制酶切割位点、复制

原点和标记基因，B正确；培养细菌A的目的是扩增目的基因，不需要获得表达

产物，因此目的基因不一定要插入重组载体A的启动子和终止子之间，C错误；

培养细菌A的目的是扩增目的基因，培养细菌B的目的是获得胰岛素，因此培

养两者的培养基在营养成分和功能上有明显差异，D错误。

核心考点2

【真题解读】

画13D命题意图：本题以剔除转基因植物中标记基因操作流程为载体，

考查基因工程在生产实践中的应用，要求学生能有效提取图中信息，并结合教材

相关知识解决相关问题。本题属于难度较大题。

名师点睛：农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到

受体细胞染色体的DNA上，故分别带有目的基因和标记基因的两个质粒，都带

有T-DNA序列，进而成功整合到受体细胞染色体上；该方法需要利用农杆菌转

化法，在高转化频率的基础上，将目的基因和标记基因整合到染色体上，由图可

知，标记基因和目的基因位于细胞中不同的染色体上；通过杂交分离结果可知，

经过有性繁殖阶段遗传重组后获得了三种类型细胞，其中包括只含目的基因的、

只含标记基因的和既含目的基因又含标记基因的；获得的无筛选标记转基因植株

发生了基因重组。

画国⑴①RNA②蛋白M上不含Sg标签

③BC（2）①黏性末端碱基配对DNA连接②基因m的连接处、基因m

的内部（3）①受体菌在无尿口密咤的培养基上无法生长，导入重组质粒的受体菌

含有URA3基因可以长成菌落②融合基因表达（或融合基因正确解码）

命题意图：本题主要考查了基因工程的操作工具和基本步骤中的相关知识，

一方面需要学生识别图解，另一方面需要学生对相关知识的系统理解。建议在平

时的学习中以基因工程的基本步骤为主线，注重将教材中的知识结合题中信息进

行知识迁移能力的培养。本题属于难度大题。

名师点睛：(1)①以逆转录获得cDNA的方式，要先从真菌细胞中提取基因

m转录出来的mRNAo

②从构建好的重组质粒上看，tag序列位于目的基因下游，若机基因的转录

产物mRNA上有终止密码子，核糖体移动到终止密码子多肽链就断开，则不会

对fag序列的转录产物继续进行翻译，蛋白M上就不含fag标签。

③从题干信息可知，“80℃以上再混入酶，然后直接从94c开始PCR扩增”，

故九应酶最适催化温度范围为94c左右；PCR反应的最初加热过程中，样品温

度上升到70℃之前，在较低的温度下引物可能与部分单链模板形成非特异性结

合，并在ZqDNA聚合酶的作用下延伸，结果会导致引物错配形成的产物的扩

增，影响反应的特异性；热启动可减少引物错配形成的产物的扩增，提高反应的

特异性；DNA分子复制具有方向性，都是从5,端向3,端延伸；距夕酶没有特异

性，与普通的DNA聚合酶相比，7hq酶更耐高温。

(2)①从图上看，载体A只有一个SamI的酶切位点，故被Sami切开后，

载体由环状变为链状DNA,#SamI切开的载体A与添加同源序列的m混合,

用特定DNA酶处理形成黏性末端，然后降温以促进载体A与添加同源序列的机

的黏性末端碱基互补配对。将A-m结合体导入大肠杆菌，利用大肠杆菌中的DNA

聚合酶及DNA连接酶等，完成质粒的环化。

②重组质粒中，载体A被I切开的位置已经与基因“7相连，原来的酶

切位点已不存在，若正确构建的重组质粒A-m仍能被I切开，则Sa/”I的

酶切位点可能在基因m的连接处或基因m内部。

⑶①筛选目的菌株的机理是：导入了质粒A-m的目的菌株由于含有URA3

基因，能在无尿噱咤的培养基上存活，而UR43基因缺失型酵母则不能存活。

②若通过抗原一抗体杂交实验检测到酵母蛋白中含fag标签，位于fag标签

上游的基因，”应该正常表达，说明融合基因表达(或融合基因正确解码)。

回回(1)限制核甘酸序列(2)磷酸二酯键DNA单链以DNA为

模板的DNA链的延伸(3)②④(4)B

命题意图：本题主要考查PCR的过程和应用，意在强化学生对PCR技术的

理解，要求学生能分析题图提取有效信息，从引物碱基序列、延伸方向等方面进

行分析和解答，对考生的理解和分析能力提出了较高要求。本题属于难度较大题。

名师点睛：采用PCR技术扩增DNA的过程为变性、退火、延伸、终止，

PCR技术扩增目的基因的原理：DNA双链复制，引物是一小段单链DNA,引物

5,端的碱基可以与DNA两条链的3,端的碱基进行碱基互补配对，可作为DNA复

制的起始点，子链的延伸方向从5'f3'。

(1)EcoRI是一种限制酶，它通过识别