白蜡树黄化植原体检疫鉴定方法_第1页
白蜡树黄化植原体检疫鉴定方法_第2页
白蜡树黄化植原体检疫鉴定方法_第3页
白蜡树黄化植原体检疫鉴定方法_第4页
白蜡树黄化植原体检疫鉴定方法_第5页
已阅读5页，还剩7页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1范围白蜡树黄化植原体(CandidatusPhytoplasmafraxini.Ashyellowsphytoplaswa),软壁菌门(Tenericutes),柔膜菌纲(Mollicutes),非固醇菌原体目(Acholeplasmatales),非固醇菌原体科(Achole-plasmataceae),植原体属(Phytoplasma),16Sr植原体组。白蜡树黄化植原体的分子生物学特性作为本标本标准应用植原体分类鉴定软件(iPhyClassifier),得到特异性的植原体核糖体16SrDNA序列限蔗糖10%(质量浓度)使用前加人0.15%(质量浓度》牛血清白蛋白(BSA)和1mmol/1.维生素C。3.3.2CTAB缓冲液CTAB2%(质量浓度)20mmol/L(pHPVP-401%(质量浓度)3.3.3其他试剂4检测鉴定方法4.1症状观察现场对白蜡树苗木进行观察，症状描述参见附录A,挑取可疑症状植株样品带回实验室检测。取0.3g组织(树根圆皮部组织，可选取叶脉和叶柄)放于研钵中，加入3mL.预冷研磨液并研磨，将粗汁液转移至2ml.离心管中，4℃下4500r/min离心5min,将悬浮液转至新的2mL离心管中，4℃下13000r/min离心15min,去掉上清液，在750pl.预热(55℃)CTAB缓冲液中悬浮沉淀，55℃下解育30min,间歌颠倒混匀，离心管在冰上冷却30s.加入750μL.三氯甲烷1异戊醇(2411体积比),涡旋振荡，4℃或室温下13000r/min离心4min。小心将上面水相转至一个新的1.5mL.离心管中，加人1体积预冷异丙醇，涡旋振荡，冰上制育4min后4℃或室温下13000r/min离心10min,去掉上清液，用500pl.70%《体积分数)冷乙醇洗涤DNA沉淀，4℃或室温下13000r/min离心1min.干燥DNA沉淀，用20gl.灭菌蒸馏水悬浮沉淀，3℃下哪育离心管10min有助于DNA再悬浮，-20℃短期贮存或-80℃长期贮存。4.3通用引物PCR扩增及序列测定用2对通用引物进行巢式PCR反应及凝胶电泳检测，扩增植原体16SrDNA序列，方法见附录B。4.4序列分析鉴定将第二轮PCR产物(引物R16fn/R16rn)进行序列测定，序列与Genebank上已知的白蜡树黄化植原体序列进行比对。应用软件(iPhyClassifier)对植原体16SrDNA序列进行分析，软件原理为以17种限制性内切醇NuI.BuwHI.Bfal.BsrU1.DraI.EwRl.HaeⅢ.Hhal.HinfI.HpaI,Hpul.KprMwI,MseI.RsaI,SspI,TagI对白蜡树黄化植原体的16SrDNA(R16fn/R16rn)进行模拟酵切图谱分析，标准酶切图谱见附录

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 各类标准

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论