2024年食品农产品中致病菌

PAGEPAGE12024年食品农产品中致病菌〔沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌〕检测能力验证结果分析报告浙江省质量技术监督局浙江省质量合格评定协会浙江省质量技术监督检测研究院2024年10月工程名称：食品农产品中致病菌〔沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌〕检测能力验证组织机构：浙江省质量技术监督局承办机构：浙江省质量合格评定协会浙江省质量技术监督检测研究院联系地址：杭州市天目山路222号邮政编码：310013方案负责人：陈小珍技术筹划：包玮、童小娟、陈小珍、张东雷、姜侃、梅玲玲、斯国静、周福娣统计专家：张东雷、姜侃联系人：姜侃联系电话/p>

目录一、前言二、本次能力验证概况1、目的和意义2、参加实验室概况3、能力验证技术方案4、结果报告及统计方法概述5、保密性三、统计结果及能力评价1、盲样发放情况2、结果报告单回收情况3、能力验证结果汇总4、参加实验室总体能力状况分析5、统计结果分析四、技术分析及建议五、附件附件1各实验室盲样预期结果和检测结果附件2盲样的制备和稳定性/均一性测试附件3作业指导书附件4现场领样单附件5样品确认单附件6结果报告单

一、前言参加能力验证是实验室质量控制的常用方法之一，其作用是：可以确定实验室进行某些特定的检测能力，可以保证和提高实验室检测结果的准确性、可靠性和可比性。本报告是对2024年“食品农产品中致病菌〔沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌〕检测〞能力验证方案实施过程和初次验证结果的总结，由浙江省质量技术监督检测研究院负责起草，浙江省质量技术监督局审核并批准发布。本次能力验证按照?能力验证方案依据能力验证比对设计方案?和省质监局?关于开展2024年度检验机构能力验证工作的通知?〔浙质评发[2024]68号〕的要求运作。二、本次能力验证概况1、目的与意义食品微生物检验是食品监测的重要组成局部，其中食源性致病菌检测对食品质量控制更是不可缺少的环节。通过食品微生物检验，可以判断食品加工环境及食品卫生环境，能够对食品被微生物污染的程度作出正确的评价，为各项卫生管理工作提供科学依据。GB4789及GB/T4789是现行有效并广泛使用的食品微生物检验标准，同时其它各级标准中也有分子生物学检测标准可参考。而沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌是许多食品的必检工程。本次能力验证拟通过比对食品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌检测能力，了解我省检测机构对食品中食源性致病菌检测方面的能力水平，并通过能力验证识别实验室间存在的差异，发现、分析并解决个别实验室存在的问题，有利于提高检测水平。2、参加实验室概况本次能力验证共有172家机构参加，其中171家完成了所有三个工程的能力验证，1家完成了沙门氏菌和金黄色葡萄球菌两个工程的能力验证。各机构完成能力验证情况详见表1，参加能力验证的实验室类型分布情况详见表2和图1，参加能力验证机构区域分布情况详见表3和图2。表1机构能力验证完成情况参加工程参加机构数比例〔%〕沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌17199.4沙门氏菌、金黄色葡萄球菌10.6表2参加能力验证机构分布情况机构类型参加数〔家〕比例〔%〕疾控系统9454.7质检系统5733.1农林渔业系统105.8药检系统42.3其他74.1图1参加能力验证机构分布情况表3参加能力验证机构区域分布情况地区参加数〔家〕比例〔%〕杭州3218.6湖州84.7嘉兴148.1金华179.9丽水127.0宁波2112.2衢州105.8绍兴137.6台州179.9温州2011.6舟山84.7共计172/图2参加能力验证机构区域分布情况

3、能力验证技术方案3.1参加比对的单位条件要求浙江省内通过食品农产品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌工程计量认证/审查认可〔验收〕的检测机构无论是否已参加过相关能力验证活动，都必须参加本次所列工程的能力验证。假设计量认证工程中有限制范围的，可在能力范围内对检测结果进行描述，而不能作为拒绝参加该次能力验证的理由。其他具备能力的检验机构可自愿参加。因故不能参加的，应向省质量技术监督局合格评定监督管理处书面报告。3.2本次能力验证检测标准本次方案建议实验室使用日常检测方法进行检测，可能涉及的检测标准有：GB4789.4-2024?食品微生物学检验沙门氏菌检验?；GB/T4789.5-2024?食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验?；GB4789.10-2024?食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验?。3.3本次能力验证盲样描述及分组所提供给每个实验室的能力验证盲样有A、B、C三份，盲样均为奶粉，每份盲样约重35g。盲样采用无菌塑料瓶包装，以铝薄膜封口后再加盖瓶盖，盲样瓶外粘贴编号。其中盲样A用于沙门氏菌检测能力验证〔即判定A盲样中是否含有沙门氏菌〕，盲样B用于志贺氏菌检测能力验证〔即判定B盲样中是否含有志贺氏菌〕，盲样C用于金黄色葡萄球菌检测能力验证〔即判定C盲样中是否含有金黄色葡萄球菌〕。每份盲样均通过严格的均匀性检验和稳定性检验。本次能力验证盲样共分7组〔详见表4〕。随机编号后在领样现场随机分发，从而保证盲样分发的随机性。表4盲样分组情况组号沙门氏菌志贺氏菌金黄色葡萄球菌1+++2++-3+--4-++5+-+6--+7-+-注：“+〞表示该盲样含相应致病菌，即为阳性盲样；“-〞表示该盲样不含相应致病菌，即为阴性盲样。3.4其他情况说明本次能力验证在向参加实验室发送检测盲样的同时，附有现场领样单、盲样实验室状态确认表、作业指导书和结果报告单，要求各实验室除在领样时填写现场领样单并明确实验室编号后，在试验开展时立即回复盲样状态确认单，并按照作业指导书要求进行检测，并于规定期限内上报检测结果。相关材料见附录。时间进度：本次方案于2010年9月1日向各参加检验机构发放检测盲样，9月10日之前全部收回参加检验机构的检测结果〔特殊情况除外〕。10月上旬完成初次检测结果进行统计处理和技术分析，104、结果报告及统计方法概述由于本次能力验证所涉及工程为定性分析，因此对检测结果以“检出〞或“未检出〞描述。其中沙门氏菌血清分型和葡萄球菌肠毒素检测试验不作硬性要求，志贺氏菌检测需在原始记录中详细描述血清学分型结果。统计分析时根据各实验室提交检测结果与所制盲样中实际包含致病菌种类是否一致进行判定。三种致病菌验证结果将分别进行结果评价。5、保密性原那么每个参加实验室被随机分配一个唯一性代码，为保证参加实验室检测结果的保密性，本报告中对每个参加实验室均以代码表示。三、统计结果及能力评价1、盲样发放情况本次能力验证盲样共分7组，盲样随机编号后在领样现场随机分发。实际发放盲样172份，各组发放情况详见表5。表5盲样分组情况分组编号沙门氏菌志贺氏菌金黄色葡萄球菌发放数量1+++192++-153+--344-++175+-+316--+337-+-23注：“+〞表示该盲样含相应致病菌，即为阳性盲样；“-〞表示该盲样不含相应致病菌，即为阴性盲样。2、结果报告单回收情况本次能力验证共分发盲样172份，实际收到有效结果报告单172份，结果反响率到达100%。3、能力验证结果汇总沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌初次能力验证结果详见表6，综合满意率详见表7。表6能力验证初次实验结果能力验证工程满意结果实验室代码不满意结果实验室代码满意结果实验室数不满意结果实验室数满意率〔%〕沙门氏菌1，3，4，5，6，7，9，11，12，13，15，17，18，19，20，21，22，25，26，27，28，29，32，33，34，35，38，39，42，43，44，45，48，49，50，51，52，53，54，57，59，60，61，62，64，65，66，67，68，70，71，72，73，74，76，78，79，81，84，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，99，101，102，103，104，105，106，107，109，110，111，112，113，115，116，119，121，122，123，124，125，126，127，128，129，130，131，132，133，134，135，136，138，139，140，141，142，143，144，145，146，147，148，149，151，152，153，154，157，158，159，160，161，162，163，164，165，166，167，170，174，175，176，177，178，180，182，183，186，187，188，189，190，191，193，194，195，196，197，198，199，200，201，202，203，204，205，206，207，20810，46，47，86，97，120，137，155，156，168，179，184，1851591392.44续前表能力验证工程满意结果实验室代码不满意结果实验室代码满意结果实验室数不满意结果实验室数满意率〔%〕志贺氏菌1，4，5，6，7，9，12，13，15，17，18，19，20，21，22，25，26，27，28，29，32，33，34，35，38，39，42，43，44，45，47，48，49，50，51，52，53，54，57，59，60，61，62，64，65，66，67，68，70，71，72，73，76，78，79，81，84，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，99，102，103，104，105，107，109，110，111，112，113，115，119，120，121，122，123，124，125，126，128，129，130，131，132，133，134，135，136，138，139，140，141，142，143，144，145，146，147，148，149，151，152，153，154，155，157，158，159，160，161，162，163，164，165，166，167，168，170，174，175，176，177，178，179，180，182，183，184，185，186，187，189，190，191，193，195，197，198，199，200，201，202，203，204，205，206，207，2083，10，11，46，74，101，106，116，127，137，156，188，1961581392.40续前表能力验证工程满意结果实验室代码不满意结果实验室代码满意结果实验室数不满意结果实验室数满意率〔%〕金黄色葡萄球菌1，3，4，5，6，9，11，12，13，17，18，19，20，21，22，25，26，27，28，29，32，33，34，35，38，39，42，44，46，47，48，49，50，51，52，53，54，57，59，61，62，64，65，66，68，70，71，72，73，74，76，78，79，81，84，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，101，102，103，104，105，106，107，109，110，111，112，113，115，116，119，120，121，122，123，124，125，126，128，130，131，132，133，134，135，136，137，138，139，140，141，142，143，144，145，146，148，152，153，154，155，156，157，158，160，161，162，163，166，167，168，170，175，176，177，178，179，180，182，183，186，187，188，190，191，193，194，195，197，198，199，200，201，202，203，204，205，206，207，2087，10，15，43，45，60，67，86，99，127，129，147，149，151，159，164，165，174，184，185，189，1961502287.21表7综合满意情况能力验证工程机构类型三项结果均满意实验室数一项结果不满意实验室数二项结果不满意实验室数三项结果均不满意实验室数共计〔家〕疾控79132/94质检37136157农林渔业82//10药检4///4其他61//7共计1342981172*农林渔业系统有一家实验室只参加了沙门氏菌和金黄色葡萄球菌两项能力验证，统计时视为三项验证结果均满意〔下同〕。4、参加实验室总体能力状况分析4.1各类型实验室能力状况本次能力验证参加实验室主要来自疾控系统、质检系统、农林渔业系统、药检系统和其他实验室。各系统实验室检测结果详见表8、9、10、11和图3。表8各系统实验室检测结果机构类型参加数〔家〕三项结果均满意实验室数〔家〕满意率〔%〕疾控系统947984.0质检系统573764.9农林渔业系统10880药检系统44100其他7685.7共计17213477.9图3各机构实验室综合满意情况表9各系统实验室沙门氏菌检测结果机构类型参加数〔家〕满意结果实验室数〔家〕满意率〔%〕疾控系统949196.8质检系统574782.5农林渔业系统1010100药检系统44100其他77100共计17215992.4表10各系统实验室志贺氏菌检测结果机构类型参加数〔家〕满意结果实验室数〔家〕满意率〔%〕疾控系统948893.6质检系统575189.5农林渔业系统9888.9药检系统44100其他77100共计17115892.4表11各系统实验室金黄色葡萄球菌检测结果机构类型参加数〔家〕满意结果实验室数〔家〕满意率〔%〕疾控系统948691.5质检系统574578.9农林渔业系统10990药检系统44100其他7685.7共计17215087.24.2各地区实验室能力验证满意率本次能力验证各地市结果满意率详见表12、图4。表12各地市结果满意率地区参加数〔家〕三项结果均满意实验室数〔家〕满意率〔%〕杭州322681.3湖州8562.5嘉兴141392.9金华171376.5丽水12866.7宁波212095.2衢州10660绍兴13861.5台州171270.6温州201680舟山8787.5共计17213477.9图4各地市结果满意率5、统计结果分析本次能力验证共收回有效能力验证结果报告单172份，其中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌结果报告各172份，志贺氏菌结果报告171份。其中满意率最低的是金黄色葡萄球菌〔87.2%〕，沙门氏菌和志贺氏菌满意率根本相当〔92.4%和92.4%〕。在沙门氏菌不满意的13家实验室中，有12家出现了假阳性结果，1家出现漏检结果；在志贺氏菌不满意的13家实验室中，有5家出现了假阳性结果，8家出现漏检结果；在金黄色葡萄球菌不满意的22家实验室中，14家出现假阳性结果，8家出现漏检结果。从实验室所属系统角度分析，本次能力验证综合满意率最高的是药检系统，参加的4家实验室三项检测结果均为满意，满意率达100%。其次是疾控系统，参加的94家实验室中79家三项检测结果满意，满意率到达84%。农林渔业系统参加的10家实验室中8家三项检测结果满意，满意率达80%。质检系统参加的57家实验室中37家结果满意，满意率仅为64.9%。本次能力验证共有38家实验室结果不满意，其中大局部〔29家〕为有一项结果不满意，另有8家实验室有两项结果不满意，1家实验室三项结果均不满意。四、技术分析及建议本次能力验证共有38家结果不满意实验室，假阳性和漏检结果在三种菌的检测过程中均有发生。致使实验结果发生偏差的原因可能是：1、样品中添加了一定种类和数量的干扰菌，其中某些菌种的某些生化特征与目标菌较相似，造成局部对目标菌的生化学、血清学等特性不熟悉的实验室，出现将目标菌判为阴性，或将非目标菌判为阳性的错误结果。2、个别实验室由于在实验过程中未严格按照标准要求选用两种及以上的选择性培养基进行别离，从而降低了发现可疑菌落的概率，造成目标菌的漏检结果。3、个别实验室在挑取可疑菌落时，挑取的菌落数量未按标准要求，有的甚至仅挑了一个可疑菌落进行鉴定。此种鉴定方式明显增加了漏检的概率。4、某些实验室在鉴定可疑菌落时，未按照标准要求将可疑菌落进行纯化培养，而直接采用选择性平板上的单菌落进行鉴定，造成因菌落不纯而导致的假阳性或漏检结果。5、实验室使用的培养基和试剂的质量优劣直接影响到检验结果的正确与否。本次能力验证要求各参加实验室附详细原始记录单及使用试剂的批号。从汇总的情况分析，局部实验室原始记录所含信息极少，尤其是所使用试剂的批号不得而知；另有一些实验室可能对关键培养基和血清等试剂缺少质量控制记录。6、某些实验室在进行血清学鉴定时，并未严格按照标准要求设生理盐水对照，结果将自凝菌作为阳性结果而造成错误判断。7、某些实验室在进行细菌鉴定时，并未严格按照标准所要求的目的菌鉴定要点进行操作，未能综合生化特性和血清学鉴定两方面结果进行判定，造成假阳性或漏检结果的错误判断。8、在进行金黄色葡萄球菌血浆凝固酶试验时，有些实验室没有严格按照标准设阴性对照和阳性对照，导致结果判断缺少对照依据而出现假阳性或漏检结果。为防止类似的情况再次发生，我们建议：1、加强对检验人员的技术培训，严格把握检测过程中的关键控制点，熟悉各种目标菌的检验步骤及生化学和血清学特征。2、加强对培养基和试剂，尤其是鉴定血清的质量控制。建议使用两种以上不同生产商或不同批次的血清，同时对血清学鉴定结果进行确认，防止因血清问题造成误判。3、按照标准要求，在实验中设置阳性菌株对照和阴性菌株对照，并对实验过程进行全程监控。4、建议各实验室加强技术储藏，可采用多种方法对可疑结果进行确证。

附件1各实验室盲样预期结果和检测结果实验室编号沙门氏菌〔A样〕志贺氏菌〔B样〕金葡菌〔C样〕结果评价不满意项*预期结果报告结果预期结果报告结果预期结果报告结果L1检出检出未检出未检出检出检出满意L3检出检出检出未检出检出检出不满意BL4检出检出未检出未检出未检出未检出满意L5未检出未检出检出检出检出检出满意L6检出检出未检出未检出检出检出满意L7检出检出检出检出未检出检出不满意CL9检出检出未检出未检出检出检出满意L10未检出检出检出未检出未检出检出不满意A、B、CL11检出检出未检出检出检出检出不满意BL12检出检出检出检出未检出未检出满意L13检出检出检出检出检出检出满意L15检出检出未检出未检出未检出检出不满意CL17检出检出未检出未检出检出检出满意L18检出检出未检出未检出未检出未检出满意L19检出检出检出检出检出检出满意L20未检出未检出未检出未检出检出检出满意L21未检出未检出检出检出检出检出满意L22未检出未检出检出检出未检出未检出满意L25未检出未检出检出检出未检出未检出满意L26检出检出未检出未检出检出检出满意L27检出检出未检出未检出检出检出满意L28检出检出未检出未检出未检出未检出满意L29检出检出检出检出检出检出满意L32未检出未检出未检出未检出检出检出满意L33检出检出未检出未检出未检出未检出满意L34未检出未检出未检出未检出检出检出满意L35检出检出检出检出未检出未检出满意L38未检出未检出检出检出未检出未检出满意L39检出检出检出检出检出检出满意L42检出检出检出检出检出检出满意L43检出检出未检出未检出检出未检出不满意CL44未检出未检出检出检出检出检出满意L45未检出未检出检出检出未检出检出不满意CL46未检出检出检出未检出未检出未检出不满意A、BL47未检出检出未检出未检出检出检出不满意AL48检出检出检出检出检出检出满意L49检出检出未检出未检出未检出未检出满意L50未检出未检出未检出未检出检出检出满意L51检出检出未检出未检出未检出未检出满意L52未检出未检出未检出未检出检出检出满意L53检出检出检出检出未检出未检出满意L54检出检出未检出未检出检出检出满意L57未检出未检出检出检出未检出未检出满意L59检出检出未检出未检出检出检出满意L60检出检出未检出未检出未检出检出不满意CL61检出检出未检出未检出检出检出满意L62检出检出未检出未检出检出检出满意L64未检出未检出检出检出未检出未检出满意L65未检出未检出未检出未检出检出检出满意L66未检出未检出检出检出未检出未检出满意L67未检出未检出检出检出检出未检出不满意CL68未检出未检出未检出未检出检出检出满意L70检出检出检出检出检出检出满意L71检出检出未检出未检出检出检出满意L72未检出未检出检出检出检出检出满意L73检出检出未检出未检出检出检出满意L74检出检出检出未检出未检出未检出不满意BL76检出检出未检出未检出未检出未检出满意L78检出检出未检出未检出未检出未检出满意L79未检出未检出未检出未检出检出检出满意L81未检出未检出检出检出未检出未检出满意L84未检出未检出未检出未检出检出检出满意L86未检出检出检出检出未检出检出不满意A、CL87检出检出检出检出未检出未检出满意L88检出检出未检出未检出未检出未检出满意L89未检出未检出检出检出未检出未检出满意L90检出检出未检出未检出检出检出满意L91未检出未检出检出检出未检出未检出满意L92未检出未检出未检出未检出检出检出满意L93检出检出未检出未检出未检出未检出满意L94检出检出检出检出未检出未检出满意L95检出检出检出检出检出检出满意L96检出检出未检出未检出未检出未检出满意L97未检出检出未检出未检出检出检出不满意AL99检出检出未检出未检出未检出检出不满意CL101检出检出未检出检出检出检出不满意BL102检出检出检出检出检出检出满意L103检出检出检出检出检出检出满意L104检出检出未检出未检出未检出未检出满意L105未检出未检出检出检出未检出未检出满意L106检出检出未检出检出检出检出不满意BL107未检出未检出检出检出检出检出满意L109未检出未检出检出检出未检出未检出满意L110检出检出检出检出检出检出满意L111未检出未检出未检出未检出检出检出满意L112未检出未检出未检出未检出检出检出满意L113检出检出检出检出未检出未检出满意L115检出检出检出检出未检出未检出满意L116检出检出未检出检出检出检出不满意BL119检出检出未检出未检出检出检出满意L120未检出检出检出检出检出检出不满意AL121未检出未检出检出检出未检出未检出满意L122检出检出未检出未检出未检出未检出满意L123检出检出检出检出检出检出满意L124检出检出未检出未检出检出检出满意L125未检出未检出检出检出检出检出满意L126未检出未检出未检出未检出检出检出满意L127未检出未检出未检出检出检出未检出不满意B、CL128未检出未检出检出检出检出检出满意L129检出检出未检出未检出未检出检出不满意CL130未检出未检出未检出未检出检出检出满意L131检出检出未检出未检出未检出未检出满意L132未检出未检出检出检出未检出未检出满意L133检出检出未检出未检出未检出未检出满意L134检出检出未检出未检出检出检出满意L135检出检出检出检出未检出未检出满意L136检出检出检出检出检出检出满意L137未检出检出检出未检出未检出未检出不满意A、BL138未检出未检出未检出未检出检出检出满意L139检出检出未检出未检出未检出未检出满意L140未检出未检出未检出未检出检出检出满意L141检出检出未检出未检出未检出未检出满意L142检出检出检出检出检出检出满意L143未检出未检出未检出未检出检出检出满意L144检出检出未检出未检出检出检出满意L145检出检出检出检出未检出未检出满意L146检出检出未检出未检出检出检出满意L147检出检出未检出未检出未检出检出不满意CL148未检出未检出未检出未检出检出检出满意L149未检出未检出检出检出未检出检出不满意CL151检出检出检出检出未检出检出不满意CL152未检出未检出检出检出检出检出满意L153未检出未检出检出检出检出检出满意L154检出检出未检出未检出未检出未检出满意L155未检出检出检出检出未检出未检出不满意AL156未检出检出检出未检出未检出未检出不满意A、BL157未检出未检出检出检出检出检出满意L158未检出未检出未检出未检出检出检出满意L159检出检出未检出未检出检出未检出不满意CL160未检出未检出未检出未检出检出检出满意L161未检出未检出未检出未检出检出检出满意L162检出检出未检出未检出未检出未检出满意L163未检出未检出未检出未检出检出检出满意L164检出检出未检出未检出未检出检出不满意CL165检出检出未检出未检出检出未检出不满意CL166检出检出未检出未检出未检出未检出满意L167检出检出未检出未检出检出检出满意L168检出未检出检出检出检出检出不满意AL170检出检出未检出未检出检出检出满意L174未检出未检出检出检出未检出检出不满意CL175未检出未检出未检出未检出检出检出满意L176未检出未检出未检出未检出检出检出满意L177未检出未检出检出检出检出检出满意L178检出检出未检出未检出检出检出满意L179未检出检出未检出未检出检出检出不满意AL180未检出未检出未检出未检出检出检出满意L182检出检出未检出未检出检出检出满意L183检出检出未检出未检出检出检出满意L184未检出检出未检出未检出检出未检出不满意A、CL185未检出检出未检出未检出检出未检出不满意A、CL186检出检出未检出未检出未检出未检出满意L187检出检出检出检出未检出未检出满意L188检出检出检出未检出检出检出不满意BL189检出检出未检出未检出检出未检出不满意CL190检出检出未检出未检出未检出未检出满意L191检出检出未检出未检出未检出未检出满意L193检出检出检出检出检出检出满意L194未检出未检出检出/检出检出满意L195检出检出检出检出未检出未检出满意L196未检出未检出检出未检出未检出检出不满意B、CL197检出检出未检出未检出未检出未检出满意L198检出检出检出检出未检出未检出满意L199检出检出检出检出检出检出满意L200检出检出未检出未检出未检出未检出满意L201未检出未检出检出检出检出检出满意L202检出检出未检出未检出未检出未检出满意L203检出检出未检出未检出未检出未检出满意L204未检出未检出未检出未检出检出检出满意L205未检出未检出检出检出检出检出满意L206未检出未检出检出检出检出检出满意L207检出检出未检出未检出未检出未检出满意L208未检出未检出未检出未检出检出检出满意*不满意项中的A、B、C分别代表沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌。

附件2盲样的制备和稳定性/均一性测试1、样品的制备本次制备的盲样以乳粉为基质，添加了特定菌种的菌泥后混匀分装而成。本次盲样制备所采用的菌种详见表1。表1盲样制备所用菌种盲样名称细菌组成沙门氏菌阳性盲样鼠伤寒沙门氏菌〔ATCC14028〕、弗氏柠檬酸杆菌〔ATCC43864〕、奇异变形杆菌〔ATCC12453〕、大肠杆菌〔ATCC25922〕沙门氏菌阴性盲样弗氏柠檬酸杆菌〔ATCC43864〕、奇异变形杆菌〔ATCC12453〕、大肠杆菌〔ATCC25922〕志贺氏菌阳性盲样志贺氏菌福氏2b血清型〔ATCC12024〕、铜绿假单胞菌〔CMCC10211〕、大肠杆菌〔ATCC25922〕志贺氏菌阴性盲样铜绿假单胞菌〔CMCC10211〕、大肠杆菌〔ATCC25922〕金黄色葡萄球菌阳性盲样金黄色葡萄球菌〔ATCC27217〕、表皮葡萄球菌〔CMCC29069〕、蜡样芽孢杆菌〔ATCC11778〕奇异变形杆菌〔ATCC12453〕金黄色葡萄球菌阴性盲样表皮葡萄球菌〔CMCC29069〕、蜡样芽孢杆菌〔ATCC11778〕奇异变形杆菌〔ATCC12453〕2、稳定性/均一性试验按照CNAS-GL03?能力验证样品均匀性和稳定性评价指南?中的方法对盲样稳定性/均一性进行7次检验。将所制备的各种盲样分别抽取28瓶，其中14瓶保存于4℃环境中，另14瓶保存于25℃环境中。自盲样制备完成后5日、10日、15日、20日、30日、40日、50日时，分别从两个环境中抽取2瓶用于稳定性/均一性测试。检测结果与预期完全一致，未发现假阳性和漏检结果，说明盲样均一性/稳定性完全符合能力验证要求。具体结果详见表2表2盲样稳定性/均一性测试记录2-1沙门氏菌阳性样本检测记录取样时间前增菌选择性增菌别离平板上各种菌菌落特征挑取疑似菌落生化鉴定血清学分析*鉴定结果2024.7.5BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落有金属光泽；黑色菌落无金属光泽XLD：黄色无色红色菌落有黑色中心；黄色菌落HE：绿色菌落有黑色中心；桔黄色菌落显色：紫色菌落，无色菌落赖氨酸：+氰化钾：-尿素酶：-靛基质：-H2S：+O多价H多价凝集沙门氏菌阳性2024.7.10BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落有金属光泽；黑色菌落无金属光泽XLD：黄色无色红色菌落有黑色中心；黄色菌落HE：绿色菌落有黑色中心；桔黄色菌落显色：紫色菌落，无色菌落赖氨酸：+氰化钾：-尿素酶：-靛基质：-H2S：+O多价H多价凝集沙门氏菌阳性2024.7.15BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落有金属光泽；黑色菌落无金属光泽XLD：黄色无色红色菌落有黑色中心；黄色菌落HE：绿色菌落有黑色中心；桔黄色菌落显色：紫色菌落，无色菌落赖氨酸：+氰化钾：-尿素酶：-靛基质：-H2S：+O多价H多价凝集沙门氏菌阳性2024.7.20BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落有金属光泽；黑色菌落无金属光泽XLD：黄色无色红色菌落有黑色中心；黄色菌落HE：绿色菌落有黑色中心；桔黄色菌落显色：紫色菌落，无色菌落赖氨酸：+氰化钾：-尿素酶：-靛基质：-H2S：+O多价H多价凝集沙门氏菌阳性2024.7.30BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落有金属光泽；黑色菌落无金属光泽XLD：黄色无色红色菌落有黑色中心；黄色菌落HE：绿色菌落有黑色中心；桔黄色菌落显色：紫色菌落，无色菌落赖氨酸：+氰化钾：-尿素酶：-靛基质：-H2S：+O多价H多价凝集沙门氏菌阳性2024.8.9BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落有金属光泽；黑色菌落无金属光泽XLD：黄色无色红色菌落有黑色中心；黄色菌落HE：绿色菌落有黑色中心；桔黄色菌落显色：紫色菌落，无色菌落赖氨酸：+氰化钾：-尿素酶：-靛基质：-H2S：+O多价H多价凝集沙门氏菌阳性2024.8.19BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落有金属光泽；黑色菌落无金属光泽XLD：黄色无色红色菌落有黑色中心；黄色菌落HE：绿色菌落有黑色中心；桔黄色菌落显色：紫色菌落，无色菌落赖氨酸：+氰化钾：-尿素酶：-靛基质：-H2S：+O多价H多价凝集沙门氏菌阳性*选择性平板上可疑沙门氏菌菌落纯化后用VITEK2COMPACT和API生化鉴定条鉴定：结果为沙门氏菌阳性！*鉴定血清采用宁波天润和日本生研两种血清。

2-2沙门氏菌阴性样本检测记录取样时间前增菌选择性增菌别离平板上各种菌菌落特征挑取疑似菌落生化鉴定*血清学分析*鉴定结果2024.7.5BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落无金属光泽；XLD：黄菌落有黑色中心，黄色菌落；HE：绿色菌落有黑色中心，黄色菌落；显色：无色或淡黄色菌落赖氨酸：-氰化钾：+尿素酶：+靛基质：-H2S：-O多价H多价不凝集沙门氏菌阴性2024.7.10BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落无金属光泽；XLD：黄菌落有黑色中心，黄色菌落；HE：绿色菌落有黑色中心，黄色菌落；显色：无色或淡黄色菌落赖氨酸：-氰化钾：+尿素酶：+靛基质：-H2S：-O多价H多价不凝集沙门氏菌阴性2024.7.15BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落无金属光泽；XLD：黄菌落有黑色中心，黄色菌落；HE：绿色菌落有黑色中心，黄色菌落；显色：无色或淡黄色菌落赖氨酸：-氰化钾：+尿素酶：+靛基质：-H2S：-O多价H多价不凝集沙门氏菌阴性2024.7.20BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落无金属光泽；XLD：黄菌落有黑色中心，黄色菌落；HE：绿色菌落有黑色中心，黄色菌落；显色：无色或淡黄色菌落赖氨酸：-氰化钾：+尿素酶：+靛基质：-H2S：-O多价H多价不凝集沙门氏菌阴性2024.7.30BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落无金属光泽；XLD：黄菌落有黑色中心，黄色菌落；HE：绿色菌落有黑色中心，黄色菌落；显色：无色或淡黄色菌落赖氨酸：-氰化钾：+尿素酶：+靛基质：-H2S：-O多价H多价不凝集沙门氏菌阴性2024.8.9BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落无金属光泽；XLD：黄菌落有黑色中心，黄色菌落；HE：绿色菌落有黑色中心，黄色菌落；显色：无色或淡黄色菌落赖氨酸：-氰化钾：+尿素酶：+靛基质：-H2S：-O多价H多价不凝集沙门氏菌阴性2024.8.19BPW36℃18hTTB42℃18hSC36℃18hBS36℃48hXLD36℃24hHE36℃24h沙门氏显色36℃24hBS：黑色菌落无金属光泽；XLD：黄菌落有黑色中心，黄色菌落；HE：绿色菌落有黑色中心，黄色菌落；显色：无色或淡黄色菌落赖氨酸：-氰化钾：+尿素酶：+靛基质：-H2S：-O多价H多价不凝集沙门氏菌阴性*选择性平板上的菌落用VITEK2COMPACT和API生化鉴定条鉴定：结果为沙门氏菌阴性！*鉴定血清采用宁波天润和日本生研两种血清。

2-3志贺氏菌阳性样本检测记录取样时间增菌别离平板上各种菌菌落特征疑似菌落接种TSI&Glu半固体生化及血清鉴定*鉴定结果2024.7.5GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：白色菌落，红色菌落；麦：白色菌落，红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽，无色菌落。TSI：顶层黄色或红色，斜面红色，不产气；Glu：黄色，无动力；紫色有动力甘露醇：+棉子糖：+〔2d〕其余均为：-血清鉴定为福氏2b志贺氏菌阳性2024.7.10GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：白色菌落，红色菌落；麦：白色菌落，红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽，无色菌落。TSI：顶层黄色或红色，斜面红色，不产气；Glu：黄色，无动力；紫色有动力甘露醇：+棉子糖：+〔2d〕其余均为：-血清鉴定为福氏2b志贺氏菌阳性2024.7.15GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：白色菌落，红色菌落；麦：白色菌落，红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽，无色菌落。TSI：顶层黄色或红色，斜面红色，不产气；Glu：黄色，无动力；紫色有动力甘露醇：+棉子糖：+〔2d〕其余均为：-血清鉴定为福氏2b志贺氏菌阳性2024.7.20GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：白色菌落，红色菌落；麦：白色菌落，红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽，无色菌落。TSI：顶层黄色或红色，斜面红色，不产气；Glu：黄色，无动力；紫色有动力甘露醇：+棉子糖：+〔2d〕其余均为：-血清鉴定为福氏2b志贺氏菌阳性2024.7.30GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：白色菌落，红色菌落；麦：白色菌落，红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽，无色菌落。TSI：顶层黄色或红色，斜面红色，不产气；Glu：黄色，无动力；紫色有动力甘露醇：+棉子糖：+〔2d〕其余均为：-血清鉴定为福氏2b志贺氏菌阳性2024.8.9GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：白色菌落，红色菌落；麦：白色菌落，红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽，无色菌落。TSI：顶层黄色或红色，斜面红色，不产气；Glu：黄色，无动力；紫色有动力甘露醇：+棉子糖：+〔2d〕其余均为：-血清鉴定为福氏2b志贺氏菌阳性2024.8.19GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：白色菌落，红色菌落；麦：白色菌落，红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽，无色菌落。TSI：顶层黄色或红色，斜面红色，不产气；Glu：黄色，无动力；紫色有动力甘露醇：+棉子糖：+〔2d〕其余均为：-血清鉴定为福氏2b志贺氏菌阳性*选择性平板上可疑志贺氏菌菌落用VITEK2COMPACT和API生化鉴定条鉴定：结果为志贺氏菌阳性！血清学分型采用宁波天润的血清产品。

2-4志贺氏菌阴性样本检测记录取样时间增菌别离平板上各种菌菌落特征疑似菌落接种TSI&Glu半固体生化及血清鉴定鉴定结果2024.7.5GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：红色菌落；麦：红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽。TSI：顶层红色，斜面红色，不产气；Glu：紫色有动力——志贺氏阴性2024.7.10GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：红色菌落；麦：红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽。TSI：顶层红色，斜面红色，不产气；Glu：紫色有动力——志贺氏阴性2024.7.15GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：红色菌落；麦：红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽。TSI：顶层红色，斜面红色，不产气；Glu：紫色有动力——志贺氏阴性2024.7.20GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：红色菌落；麦：白色菌落，红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽，。TSI：顶层红色，斜面红色，不产气；Glu：紫色有动力——志贺氏阴性2024.7.30GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：红色菌落；麦：红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽。TSI：顶层红色，斜面红色，不产气；Glu：紫色有动力——志贺氏阴性2024.8.9GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：红色菌落；麦：红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽。TSI：顶层红色，斜面红色，不产气；Glu：紫色有动力——志贺氏阴性2024.8.19GN增菌液36℃8hHESS麦康凯EMB36℃18hHE：蓝绿色菌落，黄色菌落有沉淀环；SS：红色菌落；麦：红色菌落；EMB：黑色菌落有金属光泽。TSI：顶层红色，斜面红色，不产气；Glu：紫色有动力——志贺氏阴性*选择性平板上的菌落用VITEK2COMPACT和API生化鉴定条鉴定：结果为志贺氏菌阴性！

2-5金黄色葡萄球菌阳性样本检测记录取样增菌别离平板上各种菌菌落特征血浆凝固酶试验*鉴定结果2024.7.510%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落，菌落周围有浑浊环，外侧有透明环；黑色菌落血平板：白色菌落，有透明环，白色菌落呈蜡样状；金葡显色：蓝绿色菌落，蓝色小菌落，白色菌落凝集金黄色葡萄球菌阳性2024.7.1010%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落，菌落周围有浑浊环，外侧有透明环；黑色菌落血平板：白色菌落，有透明环，白色菌落，呈蜡样状；金葡显色：蓝绿色菌落，蓝色小菌落，白色菌落凝集金黄色葡萄球菌阳性2024.7.1510%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落，菌落周围有浑浊环，外侧有透明环；黑色菌落血平板：白色菌落，有透明环，白色菌落，呈蜡样状；金葡显色：蓝绿色菌落，蓝色小菌落，白色菌落凝集金黄色葡萄球菌阳性2024.7.2010%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落，菌落周围有浑浊环，外侧有透明环；黑色菌落血平板：白色菌落，有透明环，白色菌落，呈蜡样状；金葡显色：蓝绿色菌落，蓝色小菌落，白色菌落凝集金黄色葡萄球菌阳性2024.7.3010%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落，菌落周围有浑浊环，外侧有透明环；黑色菌落血平板：白色菌落，有透明环，白色菌落呈蜡样状；金葡显色：蓝绿色菌落，蓝色小菌落，白色菌落凝集金黄色葡萄球菌阳性2024.8.910%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落，菌落周围有浑浊环，外侧有透明环；黑色菌落血平板：白色菌落，有透明环，白色菌落，呈蜡样状；金葡显色：蓝绿色菌落，蓝色小菌落，白色菌落凝集金黄色葡萄球菌阳性2024.8.1910%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落，菌落周围有浑浊环，外侧有透明环；黑色菌落血平板：白色菌落，有透明环，白色菌落，呈蜡样状；金葡显色：蓝绿色菌落，蓝色小菌落，白色菌落凝集金黄色葡萄球菌阳性*血浆凝固酶试验分别采用新鲜血浆和冻干血浆分别进行。

2-6金黄色葡萄球菌阴性样本检测记录取样增菌别离平板上各种菌菌落特征血浆凝固酶试验*鉴定结果2024.7.510%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落，白色蜡样状大菌落；血平板：白色菌落，呈蜡样状；金葡显色：蓝色小菌落，白色菌落；不凝集金黄色葡萄球菌阴性2024.7.1010%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落血平板：白色菌落，呈蜡样状；金葡显色：蓝色小菌落，白色菌落；不凝集金黄色葡萄球菌阴性2024.7.1510%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落血平板：白色菌落，呈蜡样状；金葡显色：蓝色小菌落，白色菌落；不凝集金黄色葡萄球菌阴性2024.7.2010%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落血平板：白色菌落，呈蜡样状；金葡显色：蓝色小菌落，白色菌落；不凝集金黄色葡萄球菌阴性2024.7.3010%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落，白色蜡样状大菌落；血平板：白色菌落，呈蜡样状；金葡显色：蓝色小菌落，白色菌落；不凝集金黄色葡萄球菌阴性2024.8.910%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落，白色蜡样状大菌落；血平板：白色菌落，呈蜡样状；金葡显色：蓝色小菌落，白色菌落；不凝集金黄色葡萄球菌阴性2024.8.1910%NaClTSB7.5%NaCl肉汤36℃18hBaird-Parker36℃48h血平板36℃24h金葡显色36℃24hB-P：黑色菌落，白色蜡样状大菌落；血平板：白色菌落，呈蜡样状；金葡显色：蓝色小菌落，白色菌落；不凝集金黄色葡萄球菌阴性*血浆凝固酶试验分别采用新鲜血浆和冻干血浆分别进行。附件3作业指导书食品农产品中致病菌〔沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌〕检测能力验证作业指导书各参加实验室：十分感谢贵实验室参加浙江省质量技术监督局组织的食品农产品中致病菌〔沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌〕检测能力验证活动，本次能力验证活动由浙江省质量技术监督检测研究院承办。本次检验能力验证活动中贵实验室代码为L。为保证本次能力验证工作顺利进行，请在测试前认真阅读本作业指导书。1样品反响信息1.1参加本次能力验证的实验室将收到三份奶粉样品，封存完好。1.2贵实验室的样品编号为：A、B、C。1.3各实验室在收到样品后，请检查样品的编号、实收数量和状态后，填写好?食品农产品中致病菌〔沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌〕检测能力验证样品确认单?，并于收到样品后两个工作日内传真至我院。如接收时发现样品有异常情况，请及时与我院联系更换事宜。2样品情况2.1所提供给每个实验室的能力验证样品有A、B、C三份，样品均为奶粉，每份样品约重35g。其中样品A用于沙门氏菌检测能力验证〔即判定A样品中是否含有沙门氏菌〕，样品B用于志贺氏菌检测能力验证〔即判定B样品中是否含有志贺氏菌〕，样品C用于金黄色葡萄球菌检测能力验证〔即判定C样品中是否含有金黄色葡萄球菌〕。每份样品均通过严格的均匀性检验和稳定性检验。2.2样品的保存：样品在测试前应防止接触极端环境条件，以保证样品的完整性和有效性。建议样品在2-8℃2.3建议各实验室收到样品后尽快完成测试。2.4由于样品量有限，请各实验室严格按照标准操作，防止样品的不必要损失。样品瓶盖开启方式为：下压瓶盖后按逆时针方向开启。2.5开封后的样品请立即用于检测，假设由于各种原因无法及时检测，请务必妥善保管，防止污染，以免影响检测结果。2.6样品仅用于本次能力验证的检测，不得挪作他用，更不得食用，如果参加实验室将样品用于本次能力验证检测以外的其他目的，