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文档简介

实验一酶联免疫吸附实验

(enzymelinkedimmunosorbent

assay,ELISA)1一、实验目的

1.掌握酶联免疫吸附试验的基本方法及原理

2.掌握酶联免疫吸附试验结果的观察与判断

3.了解ELISA在微生物检测中的应用二、实验原理抗原或抗体结合到固相载体的表面仍保持其活性抗原或抗体与酶交联成酶标抗原或抗体后，仍保持其免疫活性和酶活性标本中的抗原或抗体、标记抗原或抗体能按一定的次序与固相载体表面的抗原或抗体反应，并通过底物与酶的反应来反映标本中的抗原或抗体的量2

三、实验材料

1.器材

1）酶联免疫检测仪

2）12联孔聚苯乙烯条

3）37℃温箱

4）微量加液器及移液器头2.试剂

1）包被液

2）pH7.4磷酸盐缓冲液3）洗涤液3

三、实验材料

2.试剂

4）封闭液：5）酶标抗体稀释液6）底物液7）终止液8）未知抗原

9）HRP羊抗兔血清：4四、实验步骤

1、稀释未知抗原：用pH9.60.05M碳酸缓冲液将抗原稀释至

2、包被未知抗原：在聚苯乙烯板的反应孔中，各加入不同稀释倍数的抗原0.1ml，以不加抗原的两孔为对照，置于4℃冰箱过夜或37℃2小时

5四、实验步骤

3、洗涤：快速甩动12联孔条，倒出孔内包被液，之后在每小孔加入

洗涤缓冲液，室温静置放3min，甩出洗涤缓冲液，重复三次。最后把反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽

4、封闭：每小孔加封闭液

5、洗涤：同上

6、加酶标抗体：各孔中加入新配制酶标记抗体6四、实验步骤

7、洗涤：同上

8、加底物显色：各反应孔中加底物溶液

9、终止反应：待有颜色反映时，于各反应孔加入终止液

10、比色：在酶标仪上，于450nm读取A或

OD值

7五、

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