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文档简介
SOD活力的测定一.目的:掌握SOD活力测定方法及原理。二.基本原理:通过黄嘌呤及黄漂呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基(O2-),后者氧化羟胺形成亚硝酸盐,在显色剂的作用下呈现紫红色,用可见光光度计测其吸光度。当被测样品含SOD时,则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用,使形成的亚硝酸盐减少,比色时测定管的吸光度低于对照管的吸光度值,通过公式计算可求出被测样品中SOD活力。(三)、试剂:
1、试剂一:液体10ml×2瓶,用时每瓶加蒸馏水稀 释至100ml。
2、试剂二:液体7ml×2瓶,40C~100C保存。3、试剂三:7ml×2瓶,40C~100C保存。
4、试剂四:液体0.5ml×2支,40C保存,不可冷冻;4号稀释液7ml×2瓶,40C保存,用时二者按:1:14稀释,可以一次稀释,也可以分次稀释。配好大号试剂40C保存,不可冷冻。配好后可保存2-3个月。注:所用吸嘴必须为专用且消毒处理过。
5、显色剂的配制:按照5号试剂:6号试剂:冰乙酸=3:3:2的体积比配成显色剂,40C避光冷藏。
6、样品:血清1#2#3#1%淀粉液(ml)1111%CuSO4(ml)11%NaCL(ml)1H2O(ml)1稀释唾液(ml)1111#2#3#1%淀粉液(ml)1111%CuSO4(ml)11%NaCL(ml)1H2O(ml)1稀释唾液(ml)111试剂测定管对照管试剂一(ml)1.01.0样品(ml)0.01蒸馏水(ml)0.01试剂二(ml)0.10.1试剂三(ml)0.10.1试剂四(ml)0.10.1显色剂(ml)22用漩涡混匀器充分混匀,置370C恒温水浴40分钟(四)、操作: SOD活力的测定:(五)、计算:
1、定义:每ml反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个亚硝酸盐单位(NU)。
2、SOD计算公式:SOD活力NU/ml=(对照管吸光度-测定管吸光度)/对照管吸光度÷50%×(反应液总量)/(所取样品量)
1#2#3#1%淀粉液(ml)1111%CuSO4(ml)11%NaCL(ml)1H2O(ml)
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