猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC-JXA1株)工艺规程

PAGE编号:SC-TS-02-215猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC—JXA1株)工艺规程上海海利生物药品有限公司工艺规程生产管理上海海利生物药品有限公司编号:SC-TS-02-215生效日:1/14页标题:猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC—JXA1株)工艺规程起草

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:质管部、技术研发部、生产部目录TOC\o"1-2"\h\z1.主题内容 22.适用范围 23.引用标准 24.规程内容 24.1. 品名 24.2. 剂型 24.3. 规格 24.4. 菌（毒）种 24.5. 批准文号 24.6. 工艺流程图 24.7. 质量控制点 44.8. 活性物质制备工艺过程 44.9. 活性物质生产技术经济指标和原料利用率计算 64.10. 油乳剂灭活疫苗制造工艺过程 64.11. 油乳剂剂制造技术经济指标 84.12. 设备一览表 84.13. 生物安全及劳动保护 94.14. 物料 94.15. 成品质量标准 114.16. 贮藏和有效期 124.17. 包装材料要求 124.18. 标签、说明书 13

题目

:猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC—JXA1株)工艺规程编号:SC-TS-02-2152/14页主题内容本标准规定猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗达到的技术要求。适用范围本标准适用于猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗。引用标准猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗质量标准。规程内容品名通用名称：猪繁殖与呼吸综合征油乳剂灭活疫苗英文名：PorcineReproductiveandRespiratorySyndromeVaccine,Inactivated汉语拼音：ZhuFanzhuyuHuxizonghezhengyourujiMiehuoyimiao剂型油乳剂灭活疫苗规格20ml/瓶、50ml/瓶、100ml/瓶菌（毒）种来源：中国动物检验检疫中心保存毒株：猪繁殖与呼吸综合征NVDC-JAX1代次：5代保存温度：-70℃批准文号农医药便函[2007]139号工艺流程图

猪繁殖与呼吸综合征猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗（NVDC—JXA1株）工艺流程图生产用Marc-145细胞生产用Marc-145细胞弃液并加入胰蛋白酶，消化细胞弃液并加入胰蛋白酶，消化细胞加入DMEM液，分散细胞加入DMEM液，分散细胞分装，取样检测分装，取样检测制备转瓶单层成纤维细胞制备转瓶单层成纤维细胞﹡接种种毒接种种毒﹡细胞病变达70～80%细胞病变达70～80%﹡收获收获﹡油相制备油相制备TCID50TCID50检测反复冻融3次灭活检验灭活检验水相制备乳化﹡灭活水相制备乳化﹡灭活﹡入库装箱贴签轧盖分装入库装箱贴签轧盖分装百级区百级区万级区带﹡项为质量控制点

题目

:猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC—JXA1株)工艺规程编号:SC-TS-02-2154/14页质量控制点工序名称控制项目控制标准细胞消化消化液0.25%胰蛋白酶EDTA溶液；50-100mL/转瓶消化温度37消化时间转动转瓶，待细胞层开始出现裂缝时终止，一般为45秒转瓶培养温度37℃时间细胞生长成单层即可结束培养，一般为24小时左右转速转瓶机设置为9～11转/小时接毒接种量无菌控制下接种，3%无菌检测取样，T.G、G.P、G.A培养基培养应无菌观察细胞病变情况出现混浊，可能污染，弃去。病变≥70%时收获收获无菌无菌控制下操作，不污染灭活灭活剂0.2%的甲醛灭活温度调整灭活罐的温度为37灭活时间灭活充分，维持24小时乳化水相、油相比例保证抗原含量并不分层，水相：油相为2:3乳化时间90分钟乳化温度保持抗原免疫效力，30±2活性物质制备工艺过程4.8.1Marc-145传代细胞种的要求：应无菌、无霉菌、无支原体、无外源病毒污染。制苗的细胞代次：第88—140代之间。MARC-145细胞种应生长迅速，培养48小时应在1/2以上的瓶面出现细胞岛，并有部分相连、生长缓慢、形态不良的细胞培养物不可作种用，镜检时传代细胞的正常形态是梭状上皮细胞，明朗、轮廓清晰、胞浆内可见小颗粒，如出现肥大的圆细胞和空泡，是衰退的表现，不可留作种用。4.8.2生产用毒种要求4.8.2.1毒种应无细菌霉菌支原体其它外源病毒4.8.2.2毒种保存与毒种继代在-15继代应不超过5代。题目

:猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC—JXA1株)工艺规程编号:SC-TS-02-2155/14页4.8.3细胞的传代工艺过程选生长3-4天已形成致密单层的细胞种按常规法进行细胞分散，35~37℃培养，3-4天传代一次。传代细胞传代时的分种率一般1：4即1瓶分4生长不良、形态不好的细胞不能用。工作条件工作环境洁净级别：100级温度：18～26℃相对湿度：45～65%压差：大于5Pa工作器械121℃高温蒸汽灭菌工艺应进行验证4.8.4选择符合要求的圆瓶细胞培养物，弃去生长液，用Hanks液洗单层3次，然后接种5-10%PRRS毒种，置35～37℃温室的转瓶机上旋转1.5小时后，加入维持液，使维持液中毒种含量为5%，维持液含犊牛血清1～2%，于35～37℃温室旋转培养。4.8.5工艺过程接种后每天逐瓶观察细胞病变，并做好记录，大部分圆瓶应在接种后6天内收获，应该有50%以上的细胞出现明显病变，病变细胞应为胞浆收缩，细胞萎缩变形，部分细胞脱落，收获的细胞培养物置–20℃工作条件工作环境洁净级别：100级温度：18～26℃相对湿度：45～65%压差：大于5Pa工作器械121℃高温蒸汽灭菌工艺应进行验证4.8.6.灭活工艺过程工艺过程取病毒上清液导入灭活罐中,加入0.2%的甲醛

；灭活24小时，灭活温度37℃工作环境

题目

:猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC—JXA1株)工艺规程编号:SC-TS-02-2156/14页工作条件洁净级别：1000级温度：18～26℃相对湿度：45～65%压差：大于5Pa工作器械121℃高温蒸汽灭菌工艺应进行验证4.8.7半成品检验应无菌生长。取适宜稀释度，接种96孔长好单层的ST细胞微量板，每稀释度接8孔，每孔接毒0.1ml，续加维持液，培养观察细胞病变，计算TCID50。取灭活毒液，接种长成单层的ST细胞，换成维持液，逐日观察细胞形态，连续6天，不引起细胞病变。4.8.8岗位定员和生产周期岗位人员生产周期制细胞3每批共7天配液2接种2收获34.8.9原材料：ST细胞，其质量标准应符合《中华人民共和国兽用生物制品质量标准》2001年版的要求。活性物质生产技术经济指标和原料利用率计算原料营养液收获得益率数量Marc-145细胞10*100095%价值/元50010*1000*0.21000*10*0.95每ml活性物质（500+2000）/1000*10*0.95=0.2631元油乳剂灭活疫苗制造工艺过程4.10.1配方灭活液93.5份水相2份吐温-856.5份白油90.6份油相3份司本-858份硬脂酸铝1.4份题目

:猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC—JXA1株)工艺规程编号:SC-TS-02-2157/14页4.10.1.1取注射用白油90.6ml，加硬脂酸铝1.4g。边加边搅拌，直到完全透明，再加入8ml司本-80。充分混匀，高压灭菌备用。4.10.1.2水相制备取6.5份吐温-80装入的容器中，高压灭菌冷却后加入水相罐内与93.5份抗原充分搅拌直到吐温-85完全溶解。4.10.1.3乳化取油相3份放于乳化罐内，开动电机慢速转动搅拌，同时徐徐加入水相2份，加完后再以60r/min搅拌25-30分钟。在控制面板上开乳化罐自乳化化开关；乳化至60分钟时；加入1％硫柳汞溶液，使其最终浓度为0.01％。再乳化30分钟后，取3～5ml以3000r/min离心15分钟，若有分层现象，应重复乳化1次。4.10.3分装4.10.3.1内包装容器名称：西林瓶或药用高密度聚乙烯瓶、丁基橡胶塞药用高密度聚乙烯瓶由符合GMP要求的厂家直接提供。丁基橡胶塞灭菌：121℃西林瓶清洗：用超声波清洗机清洗2-3次；121℃4.10.生产好的疫苗产品，移至分装生产线上，进行分装，有4ml/瓶和20ml/瓶两种规格。4.10.3.3工作环境工作条件洁净级别：100级温度：18～26℃相对湿度：45～65%压差：大于5Pa工作器械121℃高温蒸汽灭菌工艺应进行验证4.10.4压盖贴签装箱压盖：分装完毕的产品，立即进入压盖生产线，加上铝盖，进行压盖。贴签：贴签机调整设置好相应的产品批号及有效期限，进入贴签程序。装盒：每20瓶一盒，盒内放置说明书、合格证各一份，小盒用不干胶封口。入库。注：批号设置、贴签印刷应符合《兽药瓶签、说明书的管理规定》题目

:猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC—JXA1株)工艺规程编号:SC-TS-02-2158/14页4.10.5．岗位定员和生产周期岗位人员生产周期分装41/2天压盖31/2天贴签装箱32天油乳剂剂制造技术经济指标序号项目及计算指标1分装率（%）=实际分装瓶数/理论分装瓶数*100%100%（±5%）2合格率（%）=合格瓶数/实际分装瓶数*100%≥99%设备一览表设备名称规格制造单位1恒温培养箱0-100上海一恒科学仪器有限公司2恒温摇床0-65上海一恒科学仪器有限公司3转瓶机1400*650*14000南京4-70℃450L青岛海尔集团52-8℃40m上海开灵制冷有限公司6-20℃20m上海开灵制冷有限公司7脉动真空灭菌柜2200*2000*2200华菱医疗设备制造有限公司8脉动真空灭菌柜2415*1200*1800华菱医疗设备制造有限公司11干热灭菌柜1600*1800*2550华菱医疗设备制造有限公司12灭活罐413电子天平1上海一恒科技有限公司14乳化乳化泵2000L15分装分装机HD-20050-20ml16分装机HD-20050-100ml17自动胶塞清洗机2370*1320*1880上海欣丽实业有限公司18臭氧灭菌柜1600*1800*550康尔医药设备制造有限公司19包装轧盖机XF-20051375*755*160020贴签机TLJ1650*845*120021检验恒温箱HIHENG650*445*550上海一恒科技有限公司题目

:猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC—JXA1株)工艺规程编号:SC-TS-02-2159/14页生物安全及劳动保护4.13.1技术安全上岗工人必须经过“生物安全及自我防护”培训。生产过程中，各岗位必须严格按照工艺规程、岗位标准操作程序及设备标准操作程序操作，不得违反。生产时必须在符合兽药GMP要求环境条件下进行。每次生产更换批号（或品种和规格），各工序须清洗工具容器和场地，达到清场要求。各工序半成品容器加盖密封存放，放至半成品贮存间规定的地方，防止异物混入，并有明显标志（有卡片），按品名、规格、批号存放或设棚栏隔开。机器设备有专人管理、维护、保养。严格执行安全用电规定，经常检查电源、线路，防止漏电短路，电源要接地线，禁止湿手开掣；机电设备严禁带病运转，机器运行时，严禁用手伸入转动部位；禁止用水洗电机转轴及皮带轮防护安全罩，操作时不能站在与皮带轮同一线上。随时检查燃气系统，应保持完好无损，以免发生事故，设备、设施应定期检查完好情况。管道标志明显：水管涂绿色，药液管涂黄色，蒸气管涂红色，严防漏气漏液。高压容器、管道系统等应经劳动技术安全部门检测合格方能使用。各工序均应配备防火设施和其他意外应急设施，每个员工都要学会使用灭火器材。各岗位操作人员须经严格岗位培训并经考核合格，凭岗位合格证才能上岗独立操作。非本岗位人员不能顶替上班。当班人员不能随意离开岗位，严禁窜岗，必需离开时要有本岗位人员接替方能离开。交接班应交接清楚，认真填写交接班记录。各岗位上岗须按规定穿戴工作服、帽、鞋、手套。特别是接触强酸、强碱，要穿戴防护衣、胶手套、水鞋及防护镜，避免酸、碱液溅到身上。万一被溅上皮肤，立即用大量水冲洗。4.13.2劳动保护1．上班人员均要按规定穿戴工作服、帽、鞋、防护手套等劳保用品。2．使用显微镜的人员严格执行中休、班休制度，每年检查视力一次。员工每年进行健康检查一次。建立健康档案。物料4.14.1注射用水的质量标准及检验1）性状：本品为纯化水经蒸馏所得的无色的澄明液体；无臭，无味。2）检查a

:pH值

:应为5.0～7.0（附录ⅥH）。b

:氨取本品50ml，照纯化水的方法检查，注：对照用氯化铵溶液改为1.0ml，应符合规定（0.00002％）。c

:细菌内毒素取本品，依法检查（附录ⅪE），每1ml中含内毒素量应小于0.25EU。d

:氯化物、硫酸盐与钙盐、硝酸盐与亚硝酸盐、二氧二碳、易氧化物、不挥发物与重金属照纯化水的方法检查，应符合规定。题目

:猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC—JXA1株)工艺规程编号:SC-TS-02-21510/14页4.14.2牛血清名称：牛血清质量标准：中国生物制品主要原辅料质控标准，2000年版。供应商：南京苏邦生物技术有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.3营养液名称：DMEM质量标准：中国兽药典，2005版供应商：清大天一生物科技有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.4磷酸钠名称：磷酸钠质量标准：HG31292-80供应商：上海国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.5磷酸氢二钾名称：磷酸氢二钾质量标准：GB274-93供应商：上海国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.6磷酸氢二钠名称：磷酸氢二钠质量标准：GB1909—1987供应商：上海国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.7磷酸氢二钠名称：重铬酸钾质量标准：GB/T642-1999供应商：上海国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.8硫酸名称：硫酸质量标准：GB625-89供应商：上海国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.9无水氯化钙名称：无水氯化钙质量标准：HGB3208-60供应商：上海国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）题目

:猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC—JXA1株)工艺规程编号:SC-TS-02-21511/14页4.14.10苯酚红名称：苯酚红质量标准：GB/T15351-94供应商：上海国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.11吐温-85名称：吐温80质量标准：中国药典，2000年版。供应商：美国CRODA公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.12司本-85名称：吐温80质量标准：中国药典，2000年版。供应商：美国CRODA公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.13硫柳贡名称：硫柳汞钠质量标准：Q/CYDZ-220-2004。供应商：上海国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.14名称：注射用白油（轻质矿物油）质量标准：中华人民共和国兽医生物制品规程，2000版。供应商：美国埃克森美孚石油公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.14.15甲醛名称：甲醛质量标准：中国药典，2000版。供应商：上海国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）成品质量标准4.15.1物理性状本品为乳白色乳状液，为水包油包水型，静置后，下层略带淡红色。用1ml吸管（出口内径1.2mm），吸取25℃37℃4.15.2无菌检验应无菌生长。4.15.3安全检验用猪瘟中和抗体、猪细小病毒HI抗体阴性猪2头，各深部肌肉注射疫苗10ml。观察21日，应无不良临床反应。用2-4日龄同窝乳鼠至少5只，各皮下注射0.1ml，观察7日，应健活。如有死亡，可重检一次。题目

:猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC—JXA1株)工艺规程编号:SC-TS-02-21512/14页4.15.4效力检验用体重350g以上的HI抗体阴性豚鼠4只，各肌肉注射疫苗0.5ml。28日后，连同条件相同的对照豚鼠2只，采血，测定抗体。对照抗体阴性，注射豚鼠应有3只出现抗体反应，其HI加应≥64。贮藏和有效期2-8℃包装材料要求4.17名称：猪细小病毒病灭活疫苗标签质量标准：80克铜板纸，内容符合《兽药瓶签、说明书的管理规定尺寸：20mm×60mm，25mm供应商：上海郑盛印务有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.17名称：冷冻瓶质量标准：符合《中华人民共和国药品管理法》和《药品包装用材料和容器管理办法》尺寸：7ml供应商：东营力诺玻璃制品有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.17名称：外用液体药用高密度聚乙烯瓶质量标准：符合《中华人民共和国药品管理法》和《药品包装用材料和容器管理办法》尺寸：20供应商：杭州美坚华医药包装材料有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）4.17名称：铝塑盖质量标准：符合《中华人民共和国药品管理法》和《药品包装用材料和容器管理办法》尺寸：d:2cm,h:供应商：洛阳豫洛瓶盖有限公司（或经公司批准的其