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文档简介
1CT值CYCLETHRESHOLD,反应管的荧光信号达到设定DEPCDIETHYLPROCARBONATERT-PCRREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTION荧光信号;而反应进行到延伸阶段时,Taq酶发挥5’→3’的外切核酸酶功能,上的荧光基团游离出来,所发出的荧光不再为淬灭基团所吸收而被检测仪所接收。25.2.1试剂级别HAPb:5’FAM-TCWACAGTGGCGAGTTCCCTAGCA-BHQ1-3’HAFP:5’ACRTATGACTAYCCACARTAYTCAG3’HARP:5’AGACCAGCTAYCATGATTGC3’NAPb:5’HEX-CCAATAACAGGAGGGAGCCCAGACCC-BHQ1-3’NAFP:5’CCCCACCAATGGGAACTG3’NARP:5’TCTAGGAATGCAAACCCTTTTACC3’5.2.5其他试剂样品的采集、保存及运输应符合GB19489、GB/T3将两个灭菌的棉拭子于PBS溶液中浸湿,取一个棉拭子先插入活禽喉头口及上腭裂来回刮3~5次并旋转2~3次;将咽喉拭子和泄殖腔棉拭子一起放入盛有1mL灭菌的0.01moL/LpH7.2PBS(内含青霉素将所采组织病料置于洁净、灭菌并烘干的研磨器中,按质量体积比(1:1)加入样品保存液进行充4H5N6亚型禽流感病毒核酸提取也可以采用等效RNA提取试剂及方法:如采用自动化核酸抽提仪和配9.1反应体系配置(附录B以AgPath-IDTMOne-StepRT-PCR试剂盒为例,列出反应体系配制表,仅供参考)将配制的每9.2.2.1反应条件设定9.2.2.2通道选择在试验成立的条件下,FAM及HEX通道结果均呈现Ct值≤35且呈现典型扩增曲线,判为荧光PCR阳性5检测经40个循环无Ct值且不出现扩增曲线,或者只出现单一通道有荧光信号,判为荧光PCR阴性反6A.10.01mol/LPBS(pH7.
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