新加坡伞滑刃线虫新种膜翅目伞滑刃线虫科

新加坡伞滑刃线虫新种膜翅目伞滑刃线虫科

2004年3月，宁波出入境检验局技术中心的植物检验实验室从新加坡出入境的阔叶木材材料中删除了伞型滑动销粉。该线虫雄虫形态与松材线虫雄虫相似,但雌虫略有区别。通过与该属相似线虫的形态学比较,以及ITS—RFLP分析,最终该线虫被确认为伞滑刃属松材线虫组新种———新加坡伞滑刃线虫(Bursaphelenchussingoporensissp.n.)。现将结果报道如下。1pcr-rflp-msp电泳图谱的制备将送检的蓝变木样锯成5cm左右的木段,用斧子劈成小片,用改良漏斗法于25℃分离线虫24～48h。在体视显微镜下观察钟面皿中收集的线虫分离液,发现线虫后用200μL移液器吸取线虫并制成临时水玻片,在微镜下观察,并获得该线虫的灰葡萄孢(Botrytiscinerea)纯培养。用“甘油缓慢脱水法”制成永久玻片后进行测量。交合刺长度沿背部拱形测量。线虫DNA提取用1至数条线虫,按Braasch和Burgermeister(2002)描述的方法,用酒精沉淀法纯化后,用1对通用引物5′-CGTAACAAG-GTAGCTGTAG-3′和5′-TTTCACTCGCCGTTACTAAGG-3′对线虫rDNA中的内部转录间隔区(ITS)进行PCR扩增。获得约1000bp的PCR产物。然后用RsaⅠ,HaeⅢ,MspⅠ,HinfⅠ,AluⅠ5种限制性内切酶对上述PCR产物酶切,并对酶切产物电泳后获得PCR-RFLP电泳图谱。然后将该图谱与B.abruptus、B.conicaudatus、B.fraudulentus、B.luxuriosae、B.xylophilus、B.mucronatus比较。2结果2.1表1显示了测量值2.2神经环的排列雌虫:虫体细长,热杀死后略向腹面弯曲。表皮有细环纹。侧区宽约5μm,有4条侧线。唇区高约4.2μm,宽约9.4μm,缢缩显著。口针细弱,基部略增厚,杆部占口针长的2/3。食道前体部圆柱形,中食道球发达,卵圆形或近矩形,瓣门位于中部靠前。食道腺从背部覆盖肠,长约2～3个体宽。神经环位于中食道球后1/4体宽。生殖腺前伸,约占1/2体长。卵母细胞多行排列。具阴门盖,长约8μm。后阴子宫囊长约肛阴距的2/3,可贮存精子。尾细长,锥形,略向腹面弯曲,末端圆,有时有较短的尾尖突。雄虫:体前部与雌虫近似。热杀死后身体弯曲呈“J”形,精巢伸展,约占1/2体长。精母细胞多行排列。交合刺成对,较大,拱形,喙突尖刺状,基顶突有时略向背面弯曲,远端具盘状突。尾端强烈向腹面弯曲,勾状,具交合伞。尾乳突7个,1个位于泄殖腔前,1对位于泄殖腔旁,2对位于交合伞起始处(图1,2,3)。2.3阴宫囊及松材线虫新加坡伞滑刃线虫明显属于松材线虫组:该组交合刺形状特殊,远端有盘状突,特殊的尾乳突排列,雌虫有阴门盖。松材线虫组雄虫基本近似,分类上主要以雌虫的尾部形态为依据。但该线虫交合刺尤其大,长约41～48μm,后阴子宫囊占肛阴距的67%,长约102μm。该线虫与B.abruptus区别:B.abruptus雄虫交合刺长23～30μm,不强烈向腹面弯曲,后阴子宫囊占肛阴距的28%(平均57μm)。该线虫与松材线虫区别:松材线虫尾部圆柱形,尾端钝圆。B.conicaudatus、B.fraudulentus、B.mucronatus、B.kolymensis、B.baujardi雌虫均有尾尖突。B.fraudulentus有时雌虫尾尖突不明显,但该线虫交合刺仅21～22μm。新加坡伞滑刃线虫与B.luxuriosae最接近,但B.luxuriosae交合刺仅27～30μm,阴门位于身体的71%处,而新加坡伞滑刃线虫阴门位于身体的76%处。2.4比较as-rfil谱新加坡伞滑刃线虫ITS—RFLP图谱与其他5种松材线虫组线虫及B.abruptus均有明显差异(图4,表2)。3松材线虫属sa需限制伞滑刃属线虫目前约70余种,其中约3/4存在于北半球的针叶木中。长期以来,作为一类营食真菌等寄生生活且通过鞘翅目昆虫传播的线虫,仅被少数科学家研究,未引起广泛的重视。1969年后,由于引起日本等国大量松树死亡的松材线虫(B.xylophilus)致病性的确认,引起了人们对该属线虫的广泛研究兴趣。目前松材线虫组线虫已知有7种,B.conicaudatus、B.luxuriosae被发现于阔叶木中,松材线虫、拟松材线虫、B.fraudulentus、B.kolymensis、B.baujardi被发现于针叶木中,其中B.conicaudatus、B.luxuriosae、B.baujardi都是近年来发现的线虫。众多线虫新种的发现和报道导致形态学分类十分困难,而ITS—RFLP方法对该属各个线虫均可获得特异的图谱,可以对形态学结果进行确认。随着世界贸易的发展,大量木质包装被随货物运输到世界各国,而线虫等有害生物亦随之扩散。在原产地无危害性或危害较小的物种在