中医药现代化研究实验肾阴虚型糖尿病动物模型的研制

中医药现代化研究实验肾阴虚型糖尿病动物模型的研制

用单一腔注射链霉菌（stz），导致动物糖尿病症状。然后用甲状腺素（t4）皮下注射，以恶化动物肾阴虚的表现。或用T4皮下注射先引起动物肾阴虚,再加用STZ注射,诱发动物糖尿病。或单用STZ注射诱发糖尿病。这三种给药方式,均使造模动物表现出肾阴虚型糖尿病的证候。现将动物模型的制作方法、生化指标测试结果报告如下。1材料和方法1.1动物和试剂1.1.1实验饲料的制备Wistar种雌性大白鼠,体重200～250g,由同济医科大学动物中心提供。购入后先用市售固体饲料喂养3～5天,待适应环境、体重开始增加时进行实验。动物随机分成四组:A组:正常对照组;B组:STZ造模组;C组:先用STZ,后加用T4造模组;D组:先用T4,后加用STZ造模组。对照组和模型组均饮用自来水。1.1.2试剂(1)工艺的配制、注射Sigma公司产品,批号:HO250。临用前用pH4.2枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液溶解,配成2%的溶液,按65mg/kgbw的剂量一次性腹腔注射;(2)甲状腺激素t4上海长城生化制药厂产品,批号:960102。造模时T4用量为:0.2mg/kgbw/d,给药方式为皮下注射,用药天数7天。(3)ph4。2枸杞-枸杞钠缓冲液临用前配制。(4)问卷的基本概念徐州生物化学制药厂产品,批号:961216。当造模大白鼠的血糖(空腹)超过16.8mmol/L时,连续‘两天皮下注射胰岛素8个单位。1.2实验方法1.2.1观察项目体重、食量、饮水量、尿量、体温、神态体毛、活动度、大便等。1.2.2糖和常规尿检动物用代谢笼收集尿液作尿糖定性、尿蛋白、酮体、潜血等常规检查。1.2.3尾取血糖检测造模在给药后的第3天开始,每隔3天剪大鼠鼠尾取血测空腹8小时后的血糖值,仪器为美国Lifescan公司生产的OneTouch血糖仪。并在给药后的第14天取血测肝、肾功能。2结果2.1远不如正常对照组模型组大白鼠随着给药日数的增加而日益消瘦,生长发育远不如正常对照组。三组造模组体温较正常组平均升高1.2°C,体毛无光泽,活动频度增加但反应迟钝,大便干结、色黑,饮水量、食量、尿量均高于正常组2～3倍。2.2均体重的增加正常组大鼠开始平均体重210g,饲养20天后平均体重增加30g。三组造模组大鼠随时间的延长,平均体重下降32.5g,与正常组比较,体重变化存在统计学差异,三组之间的体重变化无统计学差异。2.3d组大鼠在t4注射前后的死亡率B组大鼠在STZ腹腔注射的第5～7天有3只死亡;C组大鼠在STZ注射后的第6天有2只死亡,加用T4注射后的第3天有3只死亡;D组大鼠在加用STZ注射后的第2天有1只死亡。共有9只死亡,死亡率为26%。死亡大鼠均行心脏采血,检查血糖、肝功能和肾功能,结果均高于正常值,说明大鼠死于高血糖诱发的肝、肾功能衰竭。2.4正常组与正常组血糖比较三组造模大鼠均在STZ腹腔注射后的第3天开始,每间隔3～4天,监测空腹8小时后血糖,结果显示三组大鼠血糖均高于正常组(P<0.01)。三组之间血糖值比较无统计学差异。(见附表)2.5尿糖监测情况四组大鼠均用代谢笼收集24小时尿,测尿糖及尿常规。造模大鼠在注射STZ后24小时开始监测尿糖及常规检查。结果三组造模大鼠均表现为尿糖定性强阳性,无论血糖波动情况如何,尿糖始终表现为强阳性。50%的大鼠尿蛋白定性为弱阳性。3肾阴虚型糖尿病模型的病证结合模型用甲状腺素造肾阴虚模型早在七十年代就有报道。随着中医药理论研究的深入,迫切需要研制出能反映人类疾病症状,且能体现中医证型的病证结合的动物模型。笔者用三种方式给大白鼠注射STZ和T415天,发现三组造模大鼠均有消瘦、生长发育缓慢,体温升高、毛无光泽,活动频度增加、反应迟钝,多饮、多食、多尿,大便干结等肾阴虚证表现;同时,造模大白鼠的血糖值均在10.0～17.0mmol/L之间,尿糖定性强阳性,符合糖尿病动物模型的标准。可以认为,三种造模方式均可造模肾阴虚型糖尿病的病证结合模型。链脲佐菌素是从无色链霉菌属中分离出来的一个广谱抗菌素,为无色固体,易溶于水。STZ能选择性损伤胰腺β-细胞,而后引起这些细胞坏死。实验动物在用药后表现出人类典型的糖尿病症状,如高血糖、尿糖,多饮、多食、多尿,体重下降,酮尿及酸中毒,还可引起部分动物肾功能损害而出现蛋白尿。糖尿病的症状符合中医的消渴证特点,即多饮、多食、多尿和体重下降。中医根据“三多”症状,将消渴证分为上、中、下三消。病变脏腑在肺、胃、肾,而以肾为关键。肺主治节,为水之上源,如肺燥阴虚,津液失于敷布,则胃失濡润,肾失滋养;胃热偏盛,则可灼伤肺津,耗损肾阴。而肾阴不足,阴虚火旺,亦可上炎肺、胃,终至肺燥、胃热、肾阴虚同时存在。本实验最后观察的造模大白鼠,尿频量多、混浊如脂膏,正处于肾阴