锁阳水提物andcy对缺氧小鼠物质代谢和心脑组织结构的影响

锁阳水提物andcy对缺氧小鼠物质代谢和心脑组织结构的影响

cyboroncyboron，csr）也被称为cyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncyboroncygophylacea的根是完全寄生的种子。分布于甘肃、新疆、青海和内蒙古等半荒漠或荒漠地带。我们的前期实验证明锁阳水提物PartⅢ具有良好的抗缺氧能力。本实验研究锁阳PartⅢ对缺氧小鼠大脑含水量、脑和心肌组织蛋白含量的影响,并观察心脑细胞的形态结构变化。1材料和方法1.1实验动物清洁级BALB/C小白鼠,♂,体重(20±2)g,由兰州生物制品研究所实验动物中心提供,饲养于兰州军区兰州总医院动物实验科。1.2真空低压舱fic公司Vitalab21半自动生化分析仪,荷兰VitalScientific公司;真空低压舱由实验室自行改装;HP-8453紫外分光光度计(美国惠普公司);IECMICROMAX离心机(美国ThermoElectron公司);BP210S电子天平(荷兰赛多利斯有限公司)。1.3药物和试剂人参皂苷(吉林宏久生物科技股份有限公司,批号041006-Z)。考马斯亮蓝G-250,0.1N盐酸及其余试剂均为国产分析纯。1.4最佳水提物的制备Ⅲ的制备:取2kg锁阳粉碎物按生药∶水=1∶8(m/v)的比例浸泡30min后煎煮1h,过滤;残渣继续按上法再提取2次,合并3次滤液静置过夜。上清液减压干燥后得锁阳水提物,得率为35.2%。再取上述水提物200g复溶,其中沉淀部分(PartⅠ)干燥后得率为21.17%。上清部分加至大孔树脂柱,先用水洗至流出液为无色,再换用95%的乙醇洗脱,分别得到水洗脱物(PartⅡ)和95%的乙醇洗脱物(PartⅢ),得率为别为49.59%和19.77%。本研究的试验用药为PartⅢ,经初步鉴定主要含酚类和少量的皂苷,临用前用蒸馏水配成15mg/ml的药液,4℃保存。1.5小鼠急性毒性及生化指标检测BALB/C小鼠40只,分为空白对照组,缺氧模型组,缺氧+锁阳PartⅢ组和缺氧+人参皂苷组,每组10只。试验用药和阳性对照药剂量均为300mg/(kg·d)×7,空白对照组和缺氧模型组给予同体积的蒸馏水。于末次灌胃后1h,将所有小鼠置自制的减压装置内,调整压力,在30min内将装置内压力逐步减至0.04MPa(相当于海拔7000m),维持6h,完成预定缺氧时间后将装置内压力升至正常大气压,取出小鼠迅速摘眼球取血,之后断头处死取大脑和心脏,洗净,称重后加入0～4℃的生理盐水制成10%组织匀浆进行相关生化指标的测定。空白对照组置常氧室温低氧装置附近(相当于海拔1520m)。1.6脑水分析用干湿质量法测定脑含水量,取左半脑称重,置50℃烘干至恒重。按公式计算含水量:脑含水量(%)=(湿重量-干重量)/湿重量×100%。1.7测定大脑和心肌的含量用考马斯亮蓝法测定脑匀浆和心肌匀浆总蛋白含量,结果以mg/ml表示。1.8心脑病理的mri观察取缺氧后小鼠心脑,洗净残血,中性福尔马林固定,制作心、脑石蜡切片,常规HE染色,显微镜下观察心、脑细胞的病理改变。1.9统计处理各组实验数据均用x¯±sx¯±s表示,组间差异的显著性用t检验方法进行统计学处理。2结果2.1锁阳气调剂对小鼠脑含水量的影响Ⅲ对缺氧小鼠大脑含水量、脑和心肌蛋白含量的影响:由表1可见,急性减压法模拟高原缺氧可使小鼠脑含水量比空白对照组明显增加,与缺氧模型组比较,锁阳PartⅢ处理的小鼠脑含水量比较明显降低(P<0.01)。同时,与空白对照组相比,用锁阳PartⅢ处理的小鼠脑组织蛋白含量亦无明显的变化,但心肌蛋白含量则显著升高(P<0.01),人参皂苷亦有类似趋势。见图1。2.2小鼠脑形态改善Ⅲ对缺氧小鼠脑组织细胞形态的影响:锁阳PartⅢ处理后可以明显改善小鼠脑组织细胞形态,表现为细胞排列较缺氧模型组紧密,大部分细胞水肿减轻,核与胞质界限较清晰;整个脑组织结构变化不大,结构层次较清楚。2.3小体法制备心肌组织病理学Ⅲ对缺氧小鼠心肌组织细胞形态的影响:锁阳PartⅢ可以减轻心肌膜血管扩张和肌细胞肿大程度,使细胞界限变得清晰,心肌纤维排列紧密,纹理较清楚。人参皂苷亦有类似作用。见图2。3锁阳培养对小鼠脑含水量及心肌组织蛋白的影响动物实验发现,缺氧缺血可致能量代谢障碍,Na+/K+泵功能异常,细胞内外离子平衡失调,钠水潴留;兴奋性氨基酸受体激活,使Na+、Ca2+进一步内流引起细胞内钠钙积聚,造成细胞源性水肿,严重者导致细胞破裂。缺氧缺血还可以破坏血脑屏障,血液中的成分渗入脑实质,造成血管源性水肿。缺氧缺血后脑组织出现水肿已经得到公认。本实验结果表明,将小鼠暴露在相当于海拔7000m的低压舱中,小鼠脑含水量较常氧对照组动物显著增加(P<0.05),说明该模型可诱发动物出现急性脑水肿,这与相关文献报道一致。用锁阳PartⅢ处理的小鼠,其脑含水量明显比单纯缺氧组降低,说明锁阳PartⅢ可缓减缺氧状态下小鼠脑水肿的程度,对高原缺氧性脑损伤具有一定的保护作用。同时,我们在实验中发现小鼠经急性模拟高原缺氧暴露后心肌组织蛋白含量无明显变化,此点与文献报道的不同。预先给予锁阳PartⅢ可显著增加心肌蛋白的含量,在一定程度上可能会增强心肌功能。人参皂苷也有类似的作用。我们通过制作病理组织切片,用光学显微镜观察发现,模拟高原低压缺氧6h,单纯缺氧组小鼠脑组织和心肌组织都出现了血管扩张和组织结构受损,细胞明显水肿及空泡化现象严重,细胞核边缘化,严重的有细胞融解,甚至破裂等病理变化。