扬子鳄野外种群资源调查技术规程

扬子鳄野外种群资源调查技术规程范围本规程规定了扬子鳄野外种群数量调查的相关技术，包括调查目的、调查对象、调查范围、调查时间、调查内容等。野外放归种群及栖息地监测可参照使用。本标准适用于野生动物相关自然保护地管理机构，其他机构可参照执行。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。HJ710.5生物多样性观测技术导则爬行动物GB/T37364.1陆生野生动物及其栖息地调查技术规程第1部分:导则术语和定义下列术语和定义适用于本文件。扬子鳄Alligatorsinensis（Chinesealligator）扬子鳄属爬行纲（Reptilia）、鳄目（Crocodylia）、鼍科（Alligatoridae）、鼍属（Alligator），野外种群主要分布于南部的芜湖市和宣城市。栖息地Habitat野外扬子鳄栖息地现主要分为三种类型：第一类栖息地：残留湿地，一般沿着主河道，地势低洼、宽阔、肥沃的山谷。第二类栖息地：中间地带，支流山谷间的池塘，但其以上的山腰多为耕地。第三类栖息地：支流山谷间的池塘，其下多为稻田，上部是树林（松树为主）。。调查区域Surveyarea指具有一定的水文联系和生态功能的扬子鳄分布区域。调查地点Surveylocation指在各调查区域内确定的调查单元，该单元应具有相对明确的边界和固定的范围，并使调查结果具有相对独立性。夜间灯光照射计数法Nightlightspotcountingmethod鳄类特有的一种野外数量调查方法，指在每个调查地点的观测分区内，日落以后，利用夜间扬子鳄眼睛在强光照射下反射出橙红光的特点，对发现的实体进行逐一计数和统计，从而获得调查地点范围内扬子鳄数量的方法。间接调查法Indirectsurveymethod共包括3种调查方法：（1）基于环境DNA技术的野外扬子鳄踪迹调查法；（2）扬子鳄幼鳄鸣声回放法；（3）问卷走访法对调查区域内的扬子鳄数量进行调查的方法。种群数量populations一个种群中的物种个体数量。总则调查目的查清保护区及周边地区的扬子鳄野外种群数量、分布地点及栖息地现状，掌握扬子鳄野外种群的动态变化情况，建立扬子鳄野外资源的连续性监测档案，为扬子鳄野外种群保护的进一步规范化、科学化管理提供决策依据。调查对象野外环境下的扬子鳄及其栖息地。调查范围安徽扬子鳄国家级自然保护区及周边所有可能存在扬子鳄野外分布的区域。调查时间分为两次调查。第一次调查时间宜为5月21日~6月10日，期间野生扬子鳄都已结束冬眠，活动行为较强，处于求偶、交配阶段，几乎昼夜都在洞穴外活动，便于观察计数和活动痕迹探查。第二次调查时间宜为8月25日~9月15日；期间处于扬子鳄行为活跃期，可见扬子鳄捕食、筑洞和护蛋巢等行为，便于观察计数和活动痕迹探查，并且能发现野生扬子鳄产卵情况。每次调查分为白天调查和夜晚调查，夜晚调查又分为两个时间段：第一次调查：第一时间段20点开始，第二时间段22点开始。第二次调查：第一时间段22点开始，第二时间段24点开始。调查内容扬子鳄野生种群资源调查内容包括：扬子鳄分布现状；扬子鳄栖息地现状；扬子鳄种群数量及变动趋势；扬子鳄及其栖息地受威胁因素；扬子鳄及其栖息地保护现状；扬子鳄分布区的社会经济情况；扬子鳄与周边居民的冲突情况。调查方案调查区域确定根据早期的扬子鳄野外调查数据及近期巡护记录等，确定扬子鳄野外种群资源监测的调查区域。调查地点确定在划定的调查区域内，根据扬子鳄的分布情况，确定扬子鳄野生种群资源调查的调查地点及各调查地点的调查范围。调查方法预调查利用问卷走访和环境DNA技术，对一些扬子鳄野外的潜在分布区进行预先调查，以便于更精确地在调查区域内设定调查地点。5.3.1.1问卷走访通过问卷调查和走访，初步确认新增加的扬子鳄潜在分布地点，同时搜集有关扬子鳄分布的信息，包括个体数量、生存状态、活动区域、见证人等，并了解掌握社区群众对扬子鳄保护的态度。5.3.1.2基于环境DNA技术的野外扬子鳄踪迹调查（1）水体样品采集：使用2L规格的有机玻璃水体采样器，在每个有鳄活动的塘口分三个位点随机收集水体，采取中层水样。将3个位点混合形成一个3L的水样，混合后的水样保存于2个无菌的1.5L无菌采集瓶中待过滤。每个塘口重复3次采样。分别对采集的水样进行标记（地点、时间）。所有采集瓶及过滤器均使用10%次氯酸钠进行无菌处理，采集过程中全部戴一次性手套操作。以相同体积的无菌双蒸水水样作为阴性对照。野外采集的水样冷冻保存1～2d，建议冷藏运送至实验室。（2）样品处理及PCR扩增：先使用无纺布的过滤布200目对水样进行预先过滤，去除水体样品中的过多泥沙及水草杂质，以利于后续水体过滤。初步过滤后的水体利用隔膜真空泵及0.45ul孔径滤膜进行水体过滤，-20℃冷冻保存。待所有水体过滤完毕后，利用环境DNA抽提试剂盒进行总DNA抽提。利用本课题组前期的扬子鳄物种特异性鉴定研究成果，使用普通PCR或定量PCR对水体总DNA进行扩增，根据扩增结果判定采样点水域近期有无扬子鳄活动。实地调查5.3.2.1鸣声回放法利用便携式MP3外放装置播放事先录制好的幼鳄求助鸣叫声频文件，引诱亲鳄出现，增大遇见率。每个塘口应选择至少2个不同的点位进行重复操作。对于水域面积较大的分布点（如水库、河流），调查人员应乘充气橡皮艇至水面中心点附近，尽可能地观察全域。（1）播放声音来源：使用便携式专业录音机（SoundDevices，Model702，SoundDevices，WI，USA；frequencyrange：10Hz~128kHz）和超声话筒（G.R.A.S.40BE,G.R.A.S.Sound&VibrationA/S,Holte,Denmark,frequencyrange:5Hz～100kHz）Hz，进行录音，录取幼鳄叫声20声以上；使用同样的方法录取自然环境下自然音15秒。（2）剪辑：将录取的整体声音片段导入CoolEdi_2.1软件，截取每一声的有效叫声片段，筛选典型的幼鳄鸣叫声两声。使用CoolEdi_2.1软件，以15秒自然音为间隔音，将两声典型的幼鳄鸣叫声依次排序，每声播放十次，组合成5分钟以上的长声音片段。（3）播放：将声音导入Sony-NWZ-B183FMP3，连接AltecLansing-OrbitIM227播放器，进行播放。（4）记录：使用Canon-BP-808摄像机，记录播放期间的水面情况，进行统计分析。5.3.2.2白天痕迹调查痕迹调查主要指白天统计扬子鳄在野外分布或活动的痕迹（可与访问调查结合起来），通过在分布点的沟、塘、水库等水体岸边寻找其洞穴及巢址，并根据粪便、足迹、尾迹等印迹调查来进一步确定是否有鳄活动，并为夜间勘察制定好行进线路，同时对其周边生境（植被及水体情况、人为干扰等）进行调查。5.3.2.3夜间灯光照射计数法利用夜间扬子鳄眼睛在灯光照射下反射出橙红光的特点来计数；调查时间一般是在天黑后至凌晨，期间调查人员沿着水体周边陆地缓慢行走，边走边打开手电筒依次扫射全域水面，特别注意被植被掩盖的水边，记录观察到的扬子鳄数量；然后关闭手电筒，静候5分钟，重复观察至少3次，记录观察到的鳄数量，并估测鳄体大小。野外调查分布调查在调查区域的任一地点发现有扬子鳄野外个体时，即认为该调查地点是扬子鳄的分布点。与此同时，及时记录扬子鳄分布点的地理位置信息，并依据保护区制定的命名规则对分布点进行规范命名。种群数量调查对每一调查地点的所有扬子鳄个体进行计数，同时记录下小地名、数量、经纬度和海拔高程等信息。栖息地调查记录扬子鳄数量的同时，还应记录该栖息地的相关信息，包括地貌、植被类型等栖息地因子，以及人为干扰和潜在威胁等情况。受威胁因素调查参考《第二次全国陆生野生动物资源调查技术规程》的相关要求，调查对每个调查地点的扬子鳄及栖息地受干扰状况及受威胁因素。受威胁程度和受干扰强度分为强、中、弱。保护现状调查实地调查和访问调查相结合，记录每个调查地点的保护状况。人鳄冲突调查走访社区居民，了解记录扬子鳄对居民财产、生产、生活的干扰情况，以及居民对扬子鳄保护的态度。影响资料在每一调查地点都应尽可能获得相关的扬子鳄野外物种照片或视频资料。照片应在野外自然状态下拍摄获得，图片清晰，鉴别特征明显。数据处理和统计汇总调查结束后，开始统计调查数据，并对结果进行分析，评估扬子鳄野生种群数量及其栖息地变化状况。数据统计汇总填写的调查表格，检查核实表格是否完整详实，认真统计各调查地点的扬子鳄数量及分布状况，得出实见扬子鳄数量和扬子鳄分布面积，给出鳄个体大小分类数量。分析评估结合历史调查数据对本次调查进行全面分析，按照IUCN物种生存委员会鳄类专家组提供的鳄类野外种群数量评估方法，统计野生扬子鳄种群数量。同时，评估扬子鳄及其栖息地保护状况及受威胁因素。调查报告编撰根据调查数据、资料以及评估结果，编撰调查报告。调查结果调查成果包括各调查地点和调查区域的所有表格材料、图面材料、文字材料、影像材料。具体为：调查地点（1）表格材料扬子鳄野生种群资源数量调查记录表；各调查地点扬子鳄及栖息地保护、受干扰和受威胁因素调查评估表。（2）图面材料各调查线路分布图；扬子鳄发现位点图；各调查地点范围图；各调查地点分布图。（3）文字材料各调查地点调查报告。（4）影像材料扬子鳄调查照片、视频等相关材料。调查区域（1）表格材料各调查区域扬子鳄调查统计表。（2）图面材料各调查扬子鳄分布图；各调查区域范围图。（3）文字材料各调查区域调查报告。（4）影像材料扬子鳄调查照片、视频等相关材料。质量控制人员构成承担单位和管理单位应设置相应的管理人员，制定质量管理制度，加强质量管理工作。野外调查人员应有野外调查经验的专业技术人员或经过培训考核的人员组成。成果要求文字材料与表格材料文字材料与表格材料应按照相关标准制定印刷，并应附有调查人员名单及主要分工。图面材料符合专题图的制图标准及精度要求，具有准确完整的制图投影参数。电子材料文字材料应为doc或docx格式，表格材料为xls或xlsx格式，图面材料为ARCGIS矢量文件；照片、录像均为未经任何处理的原始素材。重新调查质量不合格的调查地点或调查区域应进行重新调查。高新技术运用鼓励引用新技术、新手段、新方法进行调查；如3S技术、新型环境DNA检测技术等的应用。

附录A资料性附录表A.1野外扬子鳄资源调查问卷访问者：访问地点：访问时间：经纬度：扬子鳄种群数量的估计？；附近有没有污染源？如重金属矿区、冶炼厂、农药厂等；与扬子鳄生活的水域相通处有无水坝水电站？；目前主要使用哪些农药？；村民目前主要使用什么能源？；近期有无发现扬子鳄的踪迹（如足迹、尾部拖迹、巢址、洞穴及吼叫声等）；对保护野生扬子鳄的态度？；你周围的扬子鳄是否得到了保护？从年代开始保护的。保护前后村民对扬子鳄的态度有何变化？扬子鳄数量仍在下降：（是否）？主要原因是什么？你对扬子鳄的保护现状满意吗？；谈谈你对扬子鳄保护的建议。；其他：

表A.2扬子鳄资源调初查结果记录调查地点：市县（区）村小地名：经纬度：海拔高度：调查日期：调查人：区县地点是否历史分布天气鳄编号发现时间是否成体估计体长小生境及位置备注广德

（示例）朱村是晴123:12否60-70cm东岸上段1米水面静浮水面朱村是晴223:16否60-70cm东岸中段沿岸静浮后潜入水中朱村是晴323:21亚成体110cm塘西北角距北岸1.8米静浮后游动

表A.3野生扬子鳄栖息环境调查表调查地点：市县（区）村小地名：经纬度：海拔高度：调查日期：调查人：