家禽用饲料品质检验-营养成分的测定

项目三：家禽用饲料品质检验液相色谱的检测器液相色谱的检测器对色谱柱溶出的成分进行检测，检测得出的数据则被转换为电信号。应选择适合样品的检测器。紫外检测器光源为D2灯。该类型检测器主要用于检测波长小于等于400纳米紫外区内具有紫外吸收的成分。紫外•可见光用检测器采用D2灯和钨灯作为光源。该类型检测器由于可以检测可见光区域，所以对于检测色素和着色剂等有色成分十分有效。二极管阵列检测器（DAD）该类型检测器可收集从紫外区到可见光区的光谱数据。荧光（FL）检测器该类型检测器可专门用于检测荧光物质，灵敏度高。示差折光（RI）检测器用于检测折光率变化。对于紫外区无吸收的成分，使用该类型检测器，但灵敏度较低。电导检测器该类型检测器主要通过监控样品电导特性检测无机离子。表1

检测器的主要类型也采用电化学检测器（ECD）、蒸发光散射检测器（ELSD）、Corona®电雾式检测器以及其它检测器。另外，液相色谱-质谱联用分析系统通过质谱仪对由高效液相色谱仪分离出来的成分做进行进一步分析，具有较高的灵敏度并可以进行特定检测，逐渐获得广泛应用。紫外/紫外•可见光用检测器是检测在紫外区或可见光区具有吸收成分的最常用仪器。

紫外/紫外•可见光用探测器采用氘灯（D2灯）作为光源，检测波长范围从190纳米至380纳米。

如检测成分波长超过这个范围，则采用加装有钨灯的紫外•可见光用检测器。紫外•可见光用检测器许多种成分在紫外区或可见光区具有吸收。但应注意不同的成分有不同的吸收光谱。摩尔消光系数大的成分，即使量少，其色谱峰也很大。因此不可根据色谱峰尺寸确定物质成分的浓度。比较典型的是以某一固定波长检测。

如需对样品所有成分进行高灵敏度检测，则可使用时间程序功能检测各种成分及其在分析过程中的最大吸收波长。该检测器部件中使用了光电二极管阵列（半异体设备）。二极管阵列检测器可检测紫外光至可见光区的吸收光谱。紫外•可见光用检测器只有一个样品侧光接收段，而二极管阵列检测器拥有多个（L-2455/2455U有1024个阵列）光电阵列，可在较宽波长范围内获取信息，这也是二极管阵列检测器的优势之一。二极管阵列检测器（DAD）和光电二极管阵列检测器（PDA）检测器的原理为连续送液进行高效液相色谱法分离过程中，每隔1秒钟或少于1秒钟检测一次光谱。如以一个固定波长进行检测，则物质的成分可根据其保留时间识别出来；然而，保留时间的微波偏差可能造成成分识别困难。在这种情况下，可使用二极管阵列检测器通过比较光谱来识别物质成分。

二极管阵列检测器与紫外•可见检测器不同的是，光线直接照射到流动池。光线通过流动池后被衍射光栅散射，并且散射光的数量在光电二极管阵列中分别按每个波长估算。二极管阵列检测器（DAD）和光电二极管阵列检测器（PDA）特点：用光电二极管阵列同时接受来自流通池的全光谱透过光例：山梨酸和苯甲酸部分分离的色谱峰a.山梨酸b.苯甲酸c.混合物紫外/紫外•可见检测器可监控特定波长的光吸收。然而，一些物质吸收一种波长的光，然后以另外一种波长发射光，称之为荧光。出现这种现象的原因是一种物质吸收光线后达到高能量级别，然后再通过发射光恢复到原有的能量水平。有的物质具有特定的光波长，这种光波长即可以吸收（激发波长）又可以发射（发射波长）。荧光漆和荧光笔以清晰的颜色发出荧光。荧光（FL）检测器荧光检测通常具有高灵敏度和选择性（不探测杂质），适合痕量分析。不是所有物质都能天生发射荧光（天然荧光）。但是，像氨基酸等物质与荧光反应剂（衍生作用）反应后可以作为荧光物质检测。使用该种方法可高灵敏度检测各种成分。折光检测器是根据光在溶液中的折射原理检测物质成分的。如图所示，折光检测器的流动池分成样品池和参比池。分析前，将洗托液引入其中一池，直到洗脱液流达到平衡。参比池注满洗脱液，并将色谱洗脱液通过更改过的流道引入样品池。当成分从色谱柱中洗脱出来后，其化学成分在样品侧溶液中发生了变化，改变了光折变水平。结果，光接收部分接收光的数量发生了改变，显示为可以检测到的峰型。任何洗脱液中的成分都可以被检测到，因此折光检测器通常被叫作“万用检测器”。示差折光（RI）检测器蒸发光散射检测器的工作原理是将色谱洗脱液雾化后，向生成微粒成分照射光，并检测生产散射光。理论上说，蒸发光散射检测器可检测任何不挥发性物质成分。蒸发光散射探测器的灵敏度是折光检测器的10倍，但对小分子的物质成分灵敏度稍低，原因是小分子物质的分子较小。蒸发光散射检测器主要用于检测非紫外吸收成分。应注意不挥发性的食盐不能用作洗脱液。蒸发光散射检测器（ELSD）由于在漂移管中流动相的蒸发使ELSD是唯一在检测前去除流动相的检测器，从而消除了溶剂峰对基线的扰动，而获得稳定的基线，并且扩大了对流动相组分的选择范围。此检测器可用于梯度洗脱，且响应值仅与光束中溶质颗粒的大小和数量有关，而与溶质的化学组成无关。检测器选择性灵敏度优点光学检测紫外/紫外•可见检测器23可检测物质范围宽。可吸收的光波长为190纳米到900纳米不等。灵敏度很大程度上取决于物质成分。二极管阵列检测器

（DAD或PDA）23可检测物质范围宽。可吸收的光波长为190纳米到900纳米不等。灵敏度很大程度上取决于物质成分。每种物质成分光谱可以确认。荧光（FL）检测器34可有选择性检测到发射荧光的物质成分，检测灵敏度高。常用于柱前柱后衍生性检测。示差折光（RI）检测器11可检测到任何与洗出液折射率不同的物质成分，但灵敏度较低。不能用于梯度分析。蒸发光散射检测器（ELSD）12该检测器是将色谱洗脱液雾化后，检测生成微粒物质成分的散射光。对非紫外吸收成分探测灵敏度高。电学检测电导检测器（CD）23该检测器可检测电离成分，主要用于离子色谱法。电化学检测器（ECD）34可检测到电氧化-还原反应产生的电流。检测电活性物质成分，灵敏度高。Corona®电雾式检测器

（Corona®CAD®）13该检测器使洗脱液雾化并检测经过电晕放电处理后的生成微粒成分。检测紫外非吸收成分灵敏度比蒸发光散射检测器高。各种检测器优点汇总检测器的选用项目三：家禽用饲料品质检验微量移液器微量移液器微量移液器微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用项目三：家禽用饲料品质检验梯度洗脱技术液相色谱的洗脱方式使用高效液相色谱仪进行分析时，常用两种洗脱方式，一种为等度洗脱（isocraticelution），另一种为梯度洗脱（gradientelution）。等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。不同洗脱方式下流动相的组成变化1、梯度洗脱的可变参数A及B流动相的成分和化学特性梯度的陡度梯度的变化形状两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度凹形梯度凸形梯度阶梯形梯度线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。2、梯度洗脱的优缺点优点单位时间的分离能力增加检测灵敏度提高缺点仪器设备要求高不适合某些检测方式柱需再生定量分析的重复性较低3、实现梯度洗脱的方法低压梯度只用一个输液泵，靠梯度单元中电磁阀开关时间的比例来控制AB液的比例实现流动相浓度的变化高压梯度靠两个或更多的输液泵不同流速来直接实现各流动相的比例低压梯度设备便宜，但流动相比例精度不够，而且存在浓度梯度延迟。高压梯度设备较贵，精度好，浓度梯度延迟很小。4、梯度设置的方法不同仪器软件，设置方法有所区别，仅示例说明。5、梯度洗脱的作用梯度洗脱可在下列情形中发挥重要作用： A 在等度下具有较宽k值的多种样品分析。 B 大分子样品分析。C 样品含有强保留的干扰物，在目标化合物出峰后设置梯度洗脱，将干扰物洗脱出来，以免其影响下一次分析。D 单组份化合物方法建立时，不知道其洗脱情况，使用梯度洗脱，找出其较优的洗脱条件。5、梯度洗脱的作用5、梯度洗脱的作用6、梯度洗脱带来的问题及解决方法6、梯度洗脱带来的问题及解决方法6、梯度洗脱带来的问题及解决方法7、梯度洗脱的方法开发7、梯度洗脱的方法开发7、梯度洗脱的方法开发7、梯度洗脱的方法开发7、梯度洗脱的方法开发7、梯度洗脱的方法开发7、梯度洗脱的方法开发项目三：家禽用饲料品质检验衍生化技术1、衍生化的定义衍生化是色谱分析中常用的一种辅助手段。原理是待测样品与具有特定功能基团的衍生化试剂通过定量快速反应，生成符合分析要求的衍生化物，通过检测衍生化物的量来间接测定待测样品的量。2、衍生化的目的改变待测物的色谱保留特性以改善分离度改善待测物的检测特性，以增加其对检测器的响应（例如：紫外标记、荧光标记、电化学