食品蛋白质测定中凯氏定氮法凯氮测定回收率试验

使用凯氏定氮仪定氮可行性实验报告1．引言在现国标中，测定食品、饲料等的粗蛋白时，在样品消化后蒸馏时，一般采用成套玻璃蒸馏装置进行蒸馏。本实验室在测定食品、饲料等的粗蛋白时，在样品处理方式上，与国标的规定完全一致，但蒸馏时，本实验室自1990年来一直采用半自动定氮仪蒸馏。通过实验，确认采用定氮仪进行蒸馏可将待测液中的氮蒸馏完全。2．仪器设备本实验所用的玻璃仪器，均经检定合格。2.1半自动凯氏定氮仪：KDN-2C，编号200109123，上海嘉定纤检仪表厂。2.2移液管，共六支；容量瓶：1000mL；酸式滴定管：50mL；名称规格（mL）编号检定结论检定单位移液管21679合格湖北省计量院移液管51683合格湖北省计量院移液管101686合格湖北省计量院移液管151690合格湖北省计量院移液管201693合格湖北省计量院移液管251694合格湖北省计量院容量瓶10001705合格湖北省计量院酸式滴定管501725U95=0.021mL湖北省计量院3．试剂本实验所用试剂，除指示剂外，未特别注明的均为分析纯，所用的水，除冷凝水外均指高纯水。3.1硫酸铵溶液[中国医药（集团）上海化学试剂公司提供，高纯试剂]：含氮（N）1mg/mL；3.2硼酸溶液：2%；3.3氢氧化钠溶液：40%；3.4甲基红溶液：称取0.1g甲基红，加100mL95%的乙醇溶解；3.5溴甲酚绿溶液：称取0.1g次甲基蓝，加100mL95%的乙醇溶解；3.6甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：将一份甲基红溶液与五份溴甲酚绿溶液临用时混合使用。3.7硫酸标准滴定溶液：0.05298mol/L。4．试验方法4.1取10mL硼酸溶液（3.2）与250mL三角瓶中，加入1滴混合指示剂（3.6），作为接收液。将盛有接收液的三角瓶放在定氮仪的接收台上，将定氮仪蒸馏出口导管伸至接收液液面以下。4.2用移液管分别吸取0、2、5、10、15、20mL硫酸铵溶液（3.1）至蒸馏管中，加入10氢氧化钠溶液（3.3）。立即蒸馏。4.3当三角瓶内溶液达到150mL左右时，降低定氮仪的接收台，使定氮仪蒸馏出口导管脱离接收液液面。用蒸馏水冲洗蒸馏出口导管，再蒸馏1min后，停止蒸馏。4.4用硫酸标准滴定溶液滴定，记下滴定体积。5．结果统计实验编号吸取样品体积（mL）滴定消耗体积（mL）样液中氮含量的理论值，mg样液中氮含量的实测值，mg回收率%实测值极差/理论值100.150///20.150//30.150//422.8522.0041100.20.75%52.8522.0041100.262.8321.989299.46756.9055.0102100.20.74%86.8554.973199.4696.8854.995399.91106.9055.0102100.2111013.60109.983399.830.74%1213.60109.983399.831313.62109.998199.981413.701010.057100.6151520.351514.99399.950.05%1620.50（舍）1515.105100.71720.351514.99399.951820.361515.001100.0192027.102020.004100.00.07%2027.20（舍）2020.078100.42127.122020.018100.12227.102020.004100.0注：表中数据按4d法取舍计算样液中氮含量时以吸取样品体积为0mL作为空白v0。a)样液中氮含量的实测=0.05298×(v1-v0)×0.014×1000式中：0.05298——硫酸标准滴定溶液的实际浓度，mol/L；v1——测定样品时消耗硫酸标准滴定溶液的体积，mL；v0——样品体积为0mL时消耗硫酸标准滴定溶液的体积，mL；b)样液中氮含量的实测值回收率%=——————————×100样液中氮含量的理论值6．结果讨论6.1从实验结果可看出，用定氮仪定氮具有很好的回收率和重现性。回收率在99.46%～100.7%，同一组数据的极差与平均值之差的比值不大于0.75%，因此我们完全可以用定氮仪代替国标中的全玻璃蒸馏装置进行定氮。6.2用定氮仪定氮的线性范围较宽，本实验所做的0～20mg的氮（N）的范围内都能得到良好的结果。有实验表明，定氮仪定氮的范围可达到更大。凯氏定氮仪检查1．仪器设备本实验所用的玻璃仪器，均经检定合格。1.1半自动凯氏定氮仪：KDN-2C，编号200109123，上海嘉定纤检仪表厂。2.2移液管、容量瓶、酸式滴定管：50mL；名称规格（mL）编号检定结论检定单位移液管25J0096合格自检移液管251694合格湖北省计量院容量瓶5001707合格湖北省计量院酸式滴定管501725U95=0.021mL湖北省计量院3．试剂本实验所用试剂，除指示剂外，未特别注明的均为分析纯，所用的水，除冷凝水外均指高纯水。3.1硫酸铵：中国医药（集团）上海化学试剂公司提供，高纯试剂；3.2硼酸溶液：3%；3.3氢氧化钠溶液：30%；3.4甲基红溶液：称取0.1g甲基红，加100mL95%的乙醇溶解；3.5溴甲酚绿溶液：称取0.1g次甲基蓝，加100mL95%的乙醇溶解；3.6甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：将一份甲基红溶液与五份溴甲酚绿溶液临用时混合使用。3.7硫酸标准滴定溶液：0.09690mol/L。4．试验方法4.1称取0.5607g硫酸铵，溶解，定容500ml。4.2取25mL硼酸溶液（3.2）于250mL三角瓶中，加入5滴混合指示剂（3.6），作为接收液。将盛有接收液的三角瓶放在定氮仪的接收台上，将定氮仪蒸馏出口导管伸至接收液液面以下。4.2用移液管分别吸取25mL硫酸铵溶液（4.1）至蒸馏管中，加入30ml氢氧化钠溶液（3.3）。立即蒸馏。4.3当三角瓶内溶液达到150mL左右时，降低定氮仪的接收台，使定氮仪蒸馏出口导管脱离接收液液面。用蒸馏水冲洗蒸馏出口导管，再蒸馏1min后，停止蒸馏。4.4用硫酸标准滴定溶液滴定，记下滴定体积。4.5同时做空白实验一个。5．结果计算v0=0.05ml，v1=4.38ml，v2=4.39ml0.09690×（4.38-0.05）×0.01401N1%=———————————————×100=20.