西藏灵芝的质量检测及其鉴别研究 中药学专业

前言西藏灵芝为多孔菌科真菌西藏灵芝Ganodermatibetanum的干燥子实体，一年四季均可采收入药，是一种品种较为珍惜的药用真菌。入药时应先挑走夹在西藏灵芝中的杂草枯叶之类的其他杂质，再用剪刀剪去附着树皮、泥沙或培养基的下端菌柄。保存时应先阴干或在40～50℃左右的温度烘干，在密封，避光，干燥的条件下存放，避免冷藏导致药材受潮。灵芝一药，史载于《神农本草经》，称灵芝有"益心气"、"安精魂"、"补肝益气"、"好颜色"、"久食可轻身不老，延年益寿"的功效。目前灵芝的品种较多，在世界上有记录的约有110余种，《中国药典》2015年版一部收载的灵芝为担子菌类多孔菌科真菌赤Ganodermalucidum(Leyss.exFr.)Karst.或紫芝GanodermasinenseZhao,XuetZhang.的干燥子实体。根据《中国灵芝图鉴》的记载，西藏灵芝多分布西藏、海南等省区。西藏灵芝以其干燥子实体入药，有具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、抗氧化、抗过敏、降血脂、抗衰老作用、保肝护肝之功效[1]。西藏灵芝所含的化学成分比较复杂，目前研究较多的化学成分有：多糖类、三萜类、核苷类、甾醇类、生物碱类、氨基酸多肽类、无机元素、脂肪酸等。灵芝多糖是灵芝最主要的有效成分，具有提高机体的免疫力和耐缺氧能力，抑制肿瘤，消除自由基等药理活性。灵芝中的三萜类成分是灵芝中一类特有的成分，种类很多，它们是灵芝的苦味成分，其含氧官能团对苦味的产生起重要作用，具有解毒，保肝，抗肿瘤，抗炎等功效。此外，灵芝中含有一定量的核苷类，甾醇，氨基酸和无机元素，分别具有抗病毒，抗肿瘤，提高血液供氧能力，保健等功能[2-4]。张辉等[5]使用高效阴离子交换色谱（HPAEC），甲基化和GLC-MS分析以及1D和2D系统重新阐明灵芝生物活性多糖（PSG-1）的主链和支链特征的精细结构NMR光谱学。张丽霞等[6]研究发现灵芝多糖能显著增强腹腔巨噬细胞的吞噬能力，增强小鼠免疫细胞活性。林秀仙等[7]实验证明灵芝多糖的最佳提取条件为提取温度100℃浸提时间2h浸提次数3次，料液比为1:30。孙晓梅等[8]开发了在超声波辅助条件下提取，通过高效液相色谱（HPLC）与化学计量学手段相结合快速鉴别和区分不同灵芝的多糖的指纹分析方法实验证明不同栽培方式、不同年份以及不同地区的灵芝三萜的含量和峰形均没有明显的影响，即用三萜类有效成分鉴别灵芝方法准确可靠，重复性好[9-10]。刘宁等[11]对提取方法进行考察，比较了超声提取、氯仿回流，甲醇回流，结果表明甲醇回流效果最佳。黄书铭等[12]利用紫外分光光度法在提取三萜类化合物工艺的中间阶段，即碱提的NaHCO3层进行检测，根据标准曲线可计算出样品中三萜类化合物的含量，从而快速检测和定量分析灵芝中的三萜类成分。2仪器与材料2.1仪器电子天平(TP-214/LF225DR)、电热干燥箱（东方-E型）、三用紫外分析仪（ZF-C型）、低速台式离心机（TDL-80-2B）、电阻炉（SX2-2/S-10）、显微镜（FINDER）、紫外分光光度计(L6S)、超声波处理器(KQ2000E)2.2材料试剂：分析纯（甲醇，甲酸，乙醇，高氯酸，甲酸乙酯，乙酸乙酯，硫酸，蒽酮，香草醛，冰醋酸，石油醚）、蒸馏水。对照药材：西藏灵芝对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：120968-201408）葡萄糖对照品（中国食品药品检定研究院，批号:110833-201205）齐墩果酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110709-201206）西藏灵芝药材（由中山市香港启泰中药饮片有限公司提供，产地均为西藏，批号：20180203、20180204、20180205）3实验方法与结果3.1来源鉴别通过查找文献，西藏灵芝子实体一年生。菌盖半圆形或肾形，2.5～11.3cm×5.8～19.3cm，厚约0.5～3.2cm，表面由原基时的白色转变至成熟后的橙黄色或绛红色，有漆样光华，表面有环状轮纹，未成熟时子实体边缘部分较钝呈嫩白色；背面白色，孢子弹射后呈较浅的褐色；菌肉分层不明显；菌柄侧生、偏生或中生，长约5～8cm，粗约1～3cm，状似圆柱形，一般菌柄内的菌肉为白色，外部的菌肉呈绛红色与菌盖同色。成熟后的子实体木质化，韧性增加，而西藏灵芝在刚采摘时的水分含量大约在51%～67%之间。西藏灵芝所属的群落大部分以灌木层和草本层为主。群落中种类最多的科是菊科、蔷薇科及禾本科。西藏野生灵芝主要分布林芝地区的工布江达县、林芝县、米林县、波密县和察隅县等地，分布的海拔范围在2050～3100米之间，主要腐生树种是川滇高山栎、通麦栎和桃树。以阳坡居多，由于灵芝生长需要潮湿环境，灵芝生存环境中的湿度多在70%～95%之间，对温度的要求不是很高，一般在10～25℃之间，灵芝生长环境的树木郁闭度一般在70%～90%之间，即“二三分阳七八分阴”[13]。图1西藏灵芝原植物 图2西藏灵芝原植物3.2原药材鉴别本品为药用真菌西藏灵芝的干燥子实体，子实体中等或稍大。菌盖半圆形，肾形或近圆形，木栓质，宽5～15cm，厚0.8～1.0cm，红褐色并有油漆光泽，菌盖上具环棱纹和辐射状皱纹，边缘薄，往往内卷。菌肉白色至淡褐色。管孔面初期白色，后期变浅褐色、褐色，平均3～5个/mm。柄侧生，与菌盖近垂直，少数偏生呈扇状，长8～15cm，粗1～3cm，紫褐色，有光泽。担孢子褐色，卵形，中央含一个大油滴。表1西藏灵芝的三批样品序号品名批号产地123西藏灵芝西藏灵芝西藏灵芝201802032018020420180205西藏西藏西藏图3西藏灵芝样品图3.3显微鉴别图3西藏灵芝样品图3.3.1方法取药用真菌西藏灵芝粉末少许，置于洁净的载玻片上，滴加1—2滴香草醛冰醋酸溶液，轻轻盖上盖玻片，用镊子小心排出载玻片与盖玻片之间的气泡，然后将预处理好的装片置于显微镜下进行观察。3.3.2结果菌丝近无色到带褐色，有分枝，多弯曲，直径1.5～6微米，壁厚，无隔膜。菌丝系统三体型:生殖菌丝透明，薄壁，分枝，直径3～4微米；骨架菌丝淡黄褐色，厚壁到实心，树状分枝，骨架干直径4～5微米，分枝末端形成鞭毛状无色缠绕菌丝，缠绕菌丝厚壁，分枝，直径1～2微米。孢子卵形，或顶端平截，双层壁，外壁无色，平滑，内壁有小刺，淡褐色或近褐色，有时中间有一油滴，8.5～11.2(12.1)×5.2～6.9微米。如附录图4，5，6。3.4薄层色谱鉴别3.4.1样品制备取本品粉末2g，加乙醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取灵芝对照药材2g，同法制成对照药材溶液。3.4.2薄层色谱条件照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取对照品溶液4μl，三次吸取样品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。（结果见图7）43214321注：1为对照药材，2～4为供试品图7西藏灵芝薄层色谱图3.4.3结果如图7，三个不同批号的西藏灵芝在对照品相应的位置上均可见到相同颜色的斑点，说明这三个不同批号的西藏灵芝药材均含有与对照药材相同的成分。3.5水分的测定3.5.1方法照水分测定法《中国药典》2015年版四部通则0832第二法依法测定，不得超过17.0％。扁形称量瓶恒重：取扁形称量瓶置于烘箱内，打开瓶盖在烘箱内105℃干燥5小时，将瓶盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，重复干燥、称重至连续两次称重的差异不超过0.3mg为恒重(W0)。取本品(2～5g)剪碎，平铺于干燥至恒重的扁形称瓶中，厚度不超过5mn，精密称定为（W1），打开瓶盖在105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量(W2)，再在上述温度干燥1小时，冷却，精密称定重量(W2)。重复干燥、称重至连续两次称重的差异不超过5mg。根据减失的重量，计算供试品中的含水量（％）。计算公式:式中：W1—样品重量（g）W0—称量瓶空瓶重量（g）W2—（称量瓶＋样品）干燥后重量（g）3.5.2结果表2西藏灵芝的水分含量测定（％）编号西藏灵芝批号空瓶重1（g）空瓶重2（g）样品量（g）干燥后瓶+样品1（g）干燥后瓶+样品2（g）水分（%）水分平均（%）RSD（%）12018020350.964650.96445.065255.355255.354913.3213.40.4758.843258.84315.026263.194263.193813.4422018020450.856650.85655.041655.203455.203113.7913.780.1558.793158.79295.073563.168363.168213.7632018020552.308252.30805.017456.716956.716612.1312.140.1254.137654.13735.092158.610958.610712.15由表2可知，批号为20180203的西藏灵芝药材平均水分含量为13.4％，批号为20180204的西藏灵芝药材平均水分含量为13.8％，批号为20180205的西藏灵芝药材平均水分含量为12.1％。三批不同批号的西藏灵芝药材的平均水分含量为13.1％，均不超过17％，合格率100％。从药材的水分含量来看，三个不同批号的西藏灵芝药材均符合《中国药典》2015年版四部通则0832第二法的要求。3.6总灰分的测定3.6.1方法照灰分测定法《中国药典》2015年版四部通则2302法测定，总灰分不得超过3.2％。空坩埚恒重取坩埚置于高温炉内，将盖子斜盖在坩埚上，经500～600℃炽灼约30～60分钟，取出坩埚，稍冷片刻，移置干燥器内并盖上盖子，放冷至室温，精密称定坩埚重量，再在上述条件下炽为约30分钟；取出，置干燥器内，放冷，称重，重复炽灼直至连续两次炽灼后的重量差异在0.3mg以下的重量即为恒重(W0)取本品约5.0g(已粉碎，可通过二号筛，并混合均匀)，置已炽灼至恒重的埚内，精密称定为W1，置电炉上缓缓炽热，避免燃烧，至完全炭化。将坩埚移置高温炉内，盖子斜盖于坩埚上，在500～600C只灼使供试完全灰化。冷却，称重，重复炽灼直至连续两次炽灼后的重量差异在0.3g以下的重量即为恒重，记为W2。(如供试品不易灰化，可将坩埚放冷，加热水或10%硝酸铵溶液2ml使残渣湿润，然后置水浴上蒸干，残渣照前法炽灼，至坩埚内容物完全灰化。)。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（％）。计算公式式中：W1—样品量（g）W0—空坩埚恒重（g）W2—（灰化后坩埚＋样品）恒重（g）3.6.2结果表3西藏灵芝的总灰分含量测定（％）编号西藏灵芝批号坩锅原始恒重1(g)坩锅原始恒重2(g)取样量(g)坩埚+供试品恒重1（g）坩锅+供试品恒重2(g)总灰分（%）总灰分平均（%）RSD（%）12018020355.536255.53595.139855.650755.65052.232.261.5754.770554.77045.044154.885454.88522.2822018020454.584454.58425.073854.689854.68952.082.101.3556.317556.31735.152756.426656.42632.1232018020550.473850.47375.217650.596550.59632.352.360.6053.826353.82615.118453.947653.94732.37由表3可知，批号为20180203的西藏灵芝药材总灰分含量为2.26％，批号为20180204的苏西藏灵芝药材总灰分含量为2.1％，批号为20180205的西藏灵芝药材总灰分含量为2.36％。三批不同批号的西藏灵芝药材的平均总灰分含量为2.24％，均不超过3.2％，合格率100％。从药材的总灰分含量来看，三个不同批号的西藏灵芝药材均符合《中国药典》2015年版四部通则2302的要求。3.7水溶性浸出物的测定3.7.1方法照水溶性浸出物测定法《中国药典》2015年版四部通则2201项下的热浸法依法测定，不得少于3.0％。蒸发皿恒重：取蒸发皿置于烘箱内100～105℃干燥5小时，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，重复干燥、称重至连续两次称重的差异不起过0.3mg为恒重，记为W0。精密称定供试品W1，置于250的提形瓶中，精密加入纯化水100m1，塞紧，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持做沸1小时，放冷后，取下锥形瓶，密塞，称定重量，用纯化水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过。精密量取液25m1，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置于干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量W2。计算公式：式中：W0—恒重的蒸发皿（g）W2—残渣+蒸发皿干燥后总量（g）W1—样品重（g）3.7.2结果表4西藏灵芝的水溶性浸出物含量测定（％）编号批号空蒸发皿重1（g）空蒸发皿重2（g）称样量（g）样品+蒸发皿重（g）浸出物（%）平均值（%）RSD(%)12018020352.307152.30724.001252.36595.875.821.251.476351.47614.025951.53425.7722018020450.869650.86954.000950.92495.545.591.152.351752.35164.076152.4095.6332018020551.513851.51373.972951.57245.915.841.850.837250.83714.067250.89575.76由表4可知，批号为20180203的西藏灵芝药材水溶性浸出物平均含量为5.82％，批号为20180204的西藏灵芝药材水溶性浸出物平均含量为5.59％，批号为20180205的西藏灵芝药材水溶性浸出物平均含量为5.84％。三批不同批号的西藏灵芝药材的平均水溶性浸出物均不少于3.0％，合格率100％。从药材的水溶性浸出物含量来看，三个不同批号的西藏灵芝药材均符合《中国药典》2015年版四部通则2201项下的热浸法的要求。3.8灵芝多糖的测定和方法学考察3.8.1制备对照品标准曲线多糖对照品溶液的制备：取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每lml含0.12mg的溶液，即得。标准曲线的制备精密量取对照品溶液.0.6、0.8、1.0、1.2ml，分别置10ml具塞试管中，各加水至2.0ml，迅速精密加人硫酸蒽酮溶液(精密称取蒽酮0.1g，加硫酸100ml使溶解，摇匀)6ml，立即摇匀，放置15分钟后，立即置冰浴中冷却15分钟，取出，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。表5多糖对照品含量测定（％）对照品溶液123456浓度（ug/ml）24487296120144吸光度（A）0.0860.2110.2600.3520.4640.542多糖浓度（ug/ml）吸光度A多糖浓度（ug/ml）吸光度A图10西藏灵芝多糖标准曲线3.8.2灵芝多糖的提取供试品溶液的制备：取本品粉末约2g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水60ml，静置1小时，加热回流4小时，趁热滤过，用少量热水洗涤滤器和滤渣，将滤渣及滤纸置烧瓶中，加水60ml，加热回流3小时，趁热滤过，合并滤液，置水浴上蒸干，残渣用水5ml溶解，边搅拌边缓慢滴加乙醇75ml，摇匀，在4℃放置12小时，离心，弃去上清液，沉淀物用热水溶解并转移至50ml量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，取溶液适量，离心，精密量取上清液3ml，置25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。3.8.3精密度试验精密吸取2ml经3.8.2项下得到的灵芝多糖提取物5份，用硫酸-蒽酮法处理后，在625mm波长下测吸光度，计算得RSD值为1.016%，证明仪器的精密度良好。结果见表6。表6精密度试验结果编号12345平均值RSD（%）吸光度0.2530.2490.2540.2510.2480.2511.0163.8.4稳定性试验精密吸取2ml经3.8.2项下得到的灵芝多糖提取物，用硫酸-蒽酮法处理后，在625mm波长下测吸光度，每隔5min测定一次，计算得RSD值为0.455%，证明仪器和溶液的稳定性良好。结果见表7。表7稳定性试验结果编号0min5min10min15min20min平均值RSD（%）吸光度0.2490.2500.2500.2510.2520.2500.4553.8.5多糖含量测定測定法：精密量取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“迅速精密加入硫酸蔥酮溶液6m1”起，同法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的含量，计算，即得。本品按干燥品计算，含灵芝多糖以无水葡萄糖(CH12O)计，不得少于0.90%。计算公式：W=c*n/mC：代表供试品溶液中无水葡萄糖的量n：代表供试品溶液稀释倍数m：代表供试品的重量3.8.6结果表8西藏灵芝的多糖含量测定（％）编号西藏灵芝批号吸光度（A）浓度（ug/ml）取样量(g)多糖含量（%）多糖含量平均（%）1201802030.25266.71881.40120.95230.930.24965.92311.45830.90412201802040.25467.24931.48250.90720.900.25868.31031.53170.89203201802050.26169.10611.50270.91980.920.25768.04511.48010.9195由表8可知，批号为20180203的西藏灵芝药材多糖平均含量为0.93％，批号为20180204的西藏灵芝药材多糖平均含量为0.90％，批号为20180205的西藏灵芝药材多糖平均含量为0.92％。三批不同批号的西藏灵芝药材的多糖含量均不少于0.90％，合格率100％。从药材的多糖含量来看，三个不同批号的西藏灵芝药材均符合《中国药典》2015年版四部通则2201的要求。3.9灵芝三萜类的测定和方法学考察3.9.1制备对照品标准曲线对照品溶液的制备：取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。标准曲线的制备精精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，分别置15ml具塞试管中，挥干，放冷，精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液(精密称取香草醛0.5g，加冰醋酸使溶解成10ml，即得)0.2ml、高氯酸0.8ml，摇匀，在70"℃水浴中加热15分钟，立即置冰浴中冷却5分钟，取出，精密加人乙酸乙酯4ml，摇匀，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在546nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线。表9三萜及甾醇对照品含量测定（％）对照品溶液123456浓度（ug/ml）20406080100144吸光度（A）0.1540.3720.5650.7300.9650.542三萜浓度（ug/ml）吸光度A三萜浓度（ug/ml）吸光度A图11西藏灵芝三萜及甾醇标准曲线3.9.2灵芝三萜类的提取供试品溶液的制备：取本品粉末约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醇50ml，超声处理(功率率140W，频率42kHz)45分钟，滤过，滤液置100ml量瓶中，用适量乙醇，分次洗涤滤器和滤渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。3.9.3精密度试验精密吸取0.2ml经3.9.2项下得到的灵芝三萜提取物5份，用香草醛-冰醋酸法处理显色，在546mm波长下测吸光度，计算得RSD值为1.051%，证明仪器的精密度良好。结果见表10。表10精密度试验结果编号12345平均值RSD（%）吸光度0.1720.1690.1700.1720.1680.1701.0513.9.4稳定性试验精密吸取0.2ml经3.9.2项下得到的灵芝三萜提取物，用香草醛-冰醋酸法处理显色，在546mm波长下测吸光度，每隔5min测定一次，计算得RSD值为0.668%，证明仪器和溶液的稳定性良好。结果见表11。表11稳定性试验结果编号0min5min10min15min20min平均值RSD（%）吸光度0.1690.1700.1710.1710.1720.1710.6683.8.5三萜含量测定测定法：精密量取供试品溶液0.2ml，置15ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“挥干”起，同法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中齐墩果酸的含量，计算，即得。本品按干燥品计算，含三萜及甾醇以齐墩果酸(CH4sO3)计，不得少于0.50%。计算公式：W=c*n/mC：代表供试品溶液中齐墩果酸的量n：代表供试品溶液稀释倍数m：代表供试品的重量3.9.6结果表12西藏灵芝的三萜及甾醇含量测定（％）编号西藏灵芝批号吸光度（A）浓度（ug/ml）取样量(g)三萜含量（%）三萜含量平均（%）1201802030.17120.98992.01820.520.530.15319.17171.80120.532201802040.16420.28281.96150.520.520.17221.09092.02740.523201802050.17621.49501.98560.540.540.17821.69702.03710.53由表12可知，批号为20180203的西藏灵芝药材三萜及甾醇平均含量为0.53％，批号为20180204的西藏灵芝药材三萜及甾醇平均含量为0.52％，批号为20180205的西藏灵芝药材三萜及甾醇平均含量为0.54％。三批不同批号的西藏灵芝药材的三萜及甾醇含量均不少于0.50％，合格率100％。从药材的三萜及甾醇含量来看，三个不同批号的西藏灵芝药材均符合《中国药典》2015年版四部通则2201的要求。4结论参考《中国药典》2015年版四部检查通则的方法，对中药材西藏灵芝的质量控制方法进行研究，包括显微鉴别、薄层板鉴别、水分检查、总灰分检查、水溶性浸出物检查，灵芝多糖检测，灵芝三萜类和甾醇的检测并根据检测结果初步拟定其质量标准的范围，为西藏灵芝的质量标准研究提供依据。其中水分含量不得超过15.7％，总灰分含量不得超过2.7％，水溶性浸出物不得少于4.6％，多糖含量不少于0.7%，三萜及甾醇类含量不少于0.4%。5讨论中药材西藏灵芝在薄层色谱鉴别上，由于其成分复杂，且国内外对西藏灵芝成分的研究尚处于起步阶段，因此在本实验中以其对照药材进行薄层色谱鉴别比较合适。对于水分，总灰分测定结果得出一个最大值，并以最大值的120%作为上限；水浸出物、多糖含量和三萜类及甾醇含量的测定则以最低测定值的80%为限得出值，以此作为下限，为初步制定西藏灵芝的质量标准研究提供依据。

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综述西藏灵芝药材质量研究现状1前言西藏灵芝为多孔菌科真菌西藏灵芝Ganodermatibetanum的干燥子实体，全年采收，除去杂质，剪除附有朽木、泥沙或培养基质的下端菌柄，阴干或在40～50℃烘干保存，是十分珍惜的药用真菌。根据《中国灵芝图鉴》的记载，西藏灵芝主要分布西藏、海南等省区。西藏灵芝以其干燥子实体入药，有具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、抗氧化、抗过敏、降血脂、抗衰老作用、保肝护肝之功效[1]。但是目前，国内外关于西藏灵芝化学成分、药理活性及质量方面的研究报道较少，2.1药源的研究高山栎、通麦栎和桃树。具有益气血，安心2.2产地根据《中国灵芝图鉴》的记载，西藏灵芝主要分布西藏、海南等省区。西藏灵芝所属的群落大部分以灌木层和草本层为主。群落中种类最多的科是菊科、蔷薇科及禾本科。西藏野生灵芝主要分布林芝地区的工布江达县、林芝县、米林县、波密县和察隅县等地，分布的海拔范围在2050～3100米之间，主要腐生树种是川滇高山栎、通麦栎和桃树。以阳坡居多，由于灵芝生长需要潮湿环境，灵芝生存环境中的湿度多在70%～95%之间，对温度的要求不是很高，一般在10～25℃之间。灵芝生长环境的树木郁闭度一般在70%～90%之间，即“二三分阳七八分阴”[2]。2.3临床应用西藏灵芝以其干燥子实体入药，具有益气血，安心神，健脾胃的功效。西藏灵芝性平、味甘、无毒，归肺、心、脾经。主治虚劳，心悸，失眠，头晕，神疲乏力，久咳气喘，冠心病，矽肺，肿瘤。临床应用上，西藏灵芝在增强人体免疫力，调节血糖，控制血压，辅助肿瘤放化疗，保肝护肝，促进睡眠等方面颇具疗效。本品为药用真菌西藏灵芝的干燥子实体，子实体中等或稍大。菌盖半圆形，肾形或近圆形，木栓质，宽5～15cm，厚0.8～1.0cm，红褐色并有油漆光泽，菌盖上具环棱纹和辐射状皱纹，边缘薄，往往内卷。菌肉白色至淡褐色。管孔面初期白色，后期变浅褐色、褐色，平均3～5个/mm。柄侧生，与菌盖近垂直，少数偏生呈扇状，长8～15cm，粗1～3cm，紫褐色，有光泽。担孢子褐色，卵形，中央含一个大油滴。菌丝近无色到带褐色，有分枝，多弯曲，直径1.5～6微米，壁厚，无隔膜。菌丝系统三体型:生殖菌丝透明，薄壁，分枝，直径3～4微米；骨架菌丝淡黄褐色，厚壁到实心，树状分枝，骨架干直径4～5微米，分枝末端形成鞭毛状无色缠绕菌丝，缠绕菌丝厚壁，分枝，直径1～2微米。孢子卵形，或顶端平截，双层壁，外壁无色，平滑，内壁有小刺，淡褐色或近褐色，有时中间有一油滴，8.5～11.2(12.1)×5.2～6.9微米。取药用真菌西藏灵芝粉末少许，置于洁净的载玻片上，滴加1—2滴香草醛冰醋酸溶液，轻轻盖上盖玻片，用镊子小心排出载玻片与盖玻片之间的气泡，然后将预处理好的装片置于显微镜下进行观察。取本品粉末2g，加乙醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取灵芝对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验