注射用氧化型谷胱甘肽二钠有关物质的hplc法测定

注射用氧化型谷胱甘肽二钠有关物质的hplc法测定

氧化二甲苯乙二钠注射液由pharmabam生产，主要用于治疗小细胞肺癌和化疗。现在它只在俄罗斯上市，并在美国进行了临床试验。氧化二甲苯乙二钠注射液是我们研究所的研究人员开发的三种药物，规格为20mg/片，批号为200876-1。hplc法有效分离和检测制剂中的物质和含量。1药物、试剂及仪器Waters2695系列高效液相色谱(HPLC)仪(包括:PDA2996,Empower数据处理软件),Waters公司。氧化型谷胱甘肽二钠注射液(批号:02172008),俄罗斯PharmBAM;氧化型谷胱甘肽二钠原料(批号:080716-1、080716-2、080716-3),广东省中药研究所;对照品(纯度99.8%,HPLC面积归一化法测定批号080510),自制。2方法2.1m辛烷磺酸钠标准品溶液的制备反相色谱柱ZorbaxXB-C18(4.6mm×250mm,5μm);以0.006M辛烷磺酸钠溶液(称取辛烷磺酸钠1.3g,加水溶解使成1000ml,加三乙胺10ml,磷酸调节pH3.0,经0.45μm的微孔滤膜滤过,即得)-甲醇(95:5)为流动相,检测波长为210nm,柱温30℃;理论板数应不低于2500;对照品色谱图上各色谱峰的分离度应符合要求。2.2溶液的制备2.2.1对照溶液2.2.2试验溶液a2.2.3试验溶液b2.2.4对照溶液2.3试验结果及讨论未破坏样品:取本品40mg,加流动相稀释定溶至10ml容量瓶,制成每1ml约含1.0mg氧化型谷胱甘肽二钠的溶液。光照破坏:取本品约100mg,置紫外光(254nm)下照射3h,称取40mg,加流动相稀释定溶至10ml容量瓶,制成每1ml约含1.0mg氧化型谷胱甘肽二钠的溶液。热破坏:取本品40mg,加流动相稀释定溶至10ml容量瓶,制成每1ml约含1.0mg氧化型谷胱甘肽二钠的溶液,在100℃水浴加热3h,放冷。酸破坏:取本品40mg,加入1mol/l盐酸溶液2ml破坏3h后;加入2ml的1mol/l氢氧化钠溶液中和,再加流动相稀释制成每1ml约含1.0mg的溶液。碱破坏:取本品40mg,加入1mol/l氢氧化钠溶液2ml破坏3h后;加入等量的1mol/l盐酸2ml溶液中和,再加流动相稀释定溶至10ml容量瓶,制成每1ml约含1.0mg氧化型谷胱甘肽二钠的溶液。氧化破坏:取本品40mg,加30%双氧水2ml破坏3h后;加加流动相稀释定溶至10ml容量瓶,制成每1ml约含1.0mg氧化型谷胱甘肽二钠的溶液。辅料:取本品辅料26mg,加流动相稀释制成相应浓度的辅料溶液。氧空白:取2ml30%双氧水,加流动相稀释定溶至10ml。酸碱空白:分别去2ml盐酸和2ml氢氧化钠混合并加流动相定容至10ml。溶剂空白:取流动相作为空白溶液。精密量取各液10μl,注入液相色谱仪。试验结果表明,本品在各破坏条件下,都产生不同程度的降解;杂质峰与主成分峰分离良好,溶剂(流动相)和辅料在此条件下没有干扰,结果见图1-4,因此该色谱条件适宜检查本品的有关物质。2.4线性回归试验取氧化型谷胱甘肽标准品约50mg,精密称定,置50ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为母液。精密量取母液0.5ml、1ml、2ml、5ml,置10ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为各浓度梯度的供试液。精密量取供试液10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。由供试液浓度C对峰面积A进行线性回归,回归方程A=690412×C-10871,r=0.9999。本品进样量在0.5ng/ml～10ng/ml范围内呈良好线性(图5)。2.5精密度测试精密量取供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,进样精密度RSD=0.02%(n=6),2.6方法标准进样测定精密量取供试品溶液B10μl,注入液相色谱仪,分别于0h、1h、2h、4h、6h、8h进样,记录峰面积,并计算平均值和相对标准偏差。进样稳定性RSD=0.13%(n=6),表明样品在8h内稳定。2.7加样回收率试验精密称取本品原料40mg、50mg、60mg,与辅料按处方量混合,每组不同比例各3份;加流动相溶解并定量稀释制成至100ml的溶液,作为供试溶液。精密量取供试品溶液及对照品溶液10μl,注入色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算本品的含量,计算回收率RSD=0.94%。试验结果表明,按照处方比例,投料量在80%～120%时,本品含量测定方法的回收率良好,无明显差异。2.8外标法测定总峰面积的测定精密量取供试品溶液及对照品溶液10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算本品的含量。按无水物计算,含氧化型谷胱甘肽二钠(C20H30N6O12S2.2Na)应为98.0%～102.0%,结果见表1。2.9供试品溶液与检测精密量取供试品溶液A、对照溶液10μl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%～25%,再分别量取供试品溶液与对照溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的6倍。供试品溶液如有杂质峰,检测最大杂质与总杂质。取氧化型谷胱甘肽二钠对照品20mg,加流动相溶解定溶至100ml量瓶中,摇匀。取冻干制剂75mg加入流