生物技术实践专项练习

生物技术实践1．蓝莓富含花青素等营养成分，具有保护视力、软化血管、增强人体免疫力等功能。某同学尝试用蓝莓来制作蓝莓果酒和蓝莓果醋。（1）制酒中利用的微生物是___________，取样后可用____________观察该微生物。发酵时一般要先通气，通气的目的是___________________。制酒过程中可在酸性条件下用橙色的重铬酸钾检验酒精的存在，检验后颜色变成___________。（2）酿制成功的蓝莓果酒如果暴露在空气中酒味会逐渐消失而出现醋酸味，尤其是气温高的夏天更易如此，分析其原因是___________________。醋酸菌将乙醇变为醋酸的环境条件是糖源_______(填“充足”或“缺少”)。（3）酿制蓝莓果酒时，并不需要对蓝莓进行严格的消毒处理，这是因为在____________的发酵液中，绝大多数微生物无法适应这一环境而受抑制。（4）为鉴定蓝莓果醋是否酿制成功，除可以通过观察菌膜、尝、嗅之外，还可以通过检测和比较_________作进一步的鉴定。2．猕猴桃是人们非常喜爱的一种水果，不仅可以直接食用，还可以对其进行深加工，制成猕猴桃果汁、果酒等。如图为生产猕猴桃果汁和果酒的流程示意图，回答下列问题。（1）在生产猕猴桃汁的流程中，为了提高出汁率和澄清度，可在压榨前加入一定量的果胶酶处理1小时。果胶酶包括_____等，其作用是_____。（2）猕猴桃汁在保藏期的某阶段会产生酚类物质导致果汁褐变或二次浑浊，后来人们发现，漆酶能有效降解酚类物质，使果汁澄清。将漆酶应用于果汁澄清的过程中，可采用_____法固定该酶。而细胞的固定化则多采用_____法，原因是_____。（3）制作好的果汁也可继续用于猕猴桃酒的生产。在进行发酵前需要在猕猴桃汁中接入的菌种从细胞结构上看是_____细胞。同时添加适量蔗糖，从微生物所需营养分析，其主要目的是_____。（4）主体发酵结束后，需将上层“酒液”转移到另一灭菌容器中进行后续贮藏，此时要防止“酒液”变酸以保证果酒品质。使“酒液”变酸的微生物的发酵条件与果酒制作的发酵条件不同的是_____。3．请回答下列关于植物芳香油提取的相关问题：（1）被誉为香料工业中的“液体黄金”的玫瑰油具有______________________以及能随水蒸气一同蒸馏的特点，所以一般采用水蒸气蒸馏法提取，该方法可使用图1中的___________（填字母）装置。（2）提取柠檬精油的步骤如图2所示。提取该精油不采取水蒸气蒸馏法的原因是________________；乙过程一般加入相当于柠檬果皮质量0.25%的小苏打和5%的硫酸钠，其目的是_____________________。（3）工业生产上，提取天然β-胡萝卜素的方法主要有三种，一种是从植物中获取，二是__________________，三是利用微生物发酵生产。按照“胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→浓缩→胡萝卜素”流程_________（填“能”或“不能”）得到纯净的β-胡萝卜素，理由是____________________（不考虑杂质）。4．在制作果汁时，为了增加出汁率和澄清度（用果汁透光率表示），常常加人果胶酶。某研究小组的研究结果如下表（注：果胶含量程度“+”越多，表示果胶含量越高）。回答下列问题：(1)根据表中数据分析，在果汁生产中，果胶酶的使用剂量为______mL/L比较适宜，原因是______。当果胶酶剂量超过0.21mL/L，时，透光率反而下降，这时使果汁变浑浊的物质是_______。(2)在工业生产中还可以将果胶酶进行固定化处理。一般来说，酶更适合采用物理吸附法和____法进行固定，而细胞多采用____法进行固定，这是因为____。与一般酶制剂相比，固定化酶的突出优点是_____________。5．为了调查某小区自来水的水质情况，研究小组对该小区自来水水样中的大肠杆菌进行了研究。回答下列问题：（1）该研究小组先采用平板划线法分离提纯自来水中的大肠杆菌，分离培养大肠杆菌可以使用_________（填“麦芽汁培养基”或“牛肉膏蛋白胨培养基”或“查氏培养基”）。在进行划线操作前灼烧接种环的目的是__________，灼烧后的接种环需要冷却后才能进行划线，原因是__________。（2）该研究小组再采用稀释涂布平板法对自来水中大肠杆菌数目进行测定，利用该方法测定活菌数目的原理是__________。（3）自来水中大肠杆菌的数目还可以采用滤膜法进行测定，将已知体积的自来水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养，然后根据培养基上__________的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。伊红美蓝培养基从用途来看属于__________培养基。（4）大肠杆菌代谢产物中含有多种蛋白质，通过凝胶色谱法分离这些蛋白质时，先收集到的蛋白质分子量较大，原因是__________。6．有机磷农药使用不当有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，危害人类健康。某生物兴趣小组同学提出：土壤中可能存在高效降解有机磷农药的微生物。请回答下列问题：（1）在制备固体培养基时需加入的常用凝固剂是__________。若培养基需要调节pH，则应在灭菌之____(填“前”或“后”）调节。（2）为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在被有机磷农药污染土壤中取样，并在培养基上添加适量的______________进行选择培养。分离纤维素分解菌，宜从富含纤维素的土壤中取样。纤维素分解菌之所以能够利用纤维素维素，是因为其细胞内含有纤维素酶，纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少含有三种组分，即______________。前两种酶使纤维素分解成___________，第三种酶将它分解成葡萄糖。（3）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的___________________。（4）若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用___________________直接计数，也可选用稀释涂布平板法统计活菌数目，当样品的___________足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的______________。用这种方法测定菌体密度时，实际活菌数量要比测得的数量多，是因为__________________________________。7．(1)要统计泳池水源中的活菌总数，应该采用的方法是_______________________。工作者将三个接种了等量水源水的培养基置于37℃的恒温箱中培养。24小时后观察到三个平板上的菌落数目为21、256、215，请分析结果出现的可能原因_____________________，并提供解决方案：_______________________________。(2)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：注：“+”表示有，“-”表示无。据表判断，培养基甲_______（填“能”或“不能”）用于分离纤维素分解菌，原因是__________________________；培养基乙________（填“能”或“不能”）用于鉴别纤维素分解菌，原因是_________________________________。(3)果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括______________、_______________和果胶酯酶等，在果汁加工中，果胶酶可以起到_________________________等作用。8．回答与淀粉酶有关的问题(1)与用葡萄酿酒相比，利用大米酿酒，需增加____________的过程。为筛选胞外淀粉酶分泌型菌种，一般可从_______________(填“果圆树下”、“米酒厂周围”或“枯树周围”)获得土样，用无菌水稀释，涂布到含淀粉的选培养基上培养，一段时间后在培养基表面滴加碘液，可在某些菌落周围观察到透明的水解圏，从培养基上挑选若干个____________比值大的菌落作为酶活性较高的菌种。(2)从上述菌种获得的纯化后的淀粉酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量越___________。(3)如想让淀粉酶能反复利用，宜采用化学结合法进行固定化，可通过检测固定化淀粉酶________确定其应用价值。除化学结合法外，酶的固定化方法还包括_________、_________、离子吸附法及交联法等。(4)普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，现通过基因工程方法得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种。以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵一段时同后，接种_______菌的发酵罐需要先排气，其原因是_______。9．已知一种有机物X（仅含有C、H两种元素）不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌（目标菌）。Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X（5g/L）。Ⅱ号培养基：氯化钠（5g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量），X（15g/L）。Ⅲ号培养基：氯化钠（5g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量）。X（45g/L）。回答下列问题。（1）在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氨源的是_______。Ⅱ、Ⅲ号培养基为微生物提供碳源的有机物是______。（2）若将土壤悬浮液种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会___________，其原因是____________。（3）Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是______________。（4）假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供_________和_________。10．土壤中含有大量分解纤维素的细菌和真菌，科研人员从土壤中筛选高效分解纤维素的细菌，以便用于生产实践。分析回答：（1）纤维素分解菌在细胞______（填“内”或“外”）将纤维素分解为葡萄糖。为了解纤维素酶的组成成分，常用____法和电泳法将其分离提纯后进行鉴定。（2）科研人员取某地土样59制得土壤溶液后稀释，取稀释液ImL接种到培养基甲上，在适宜条件下培养72h，再挑取代表性菌落进行接种培养，3d～4d后观察并初步筛选菌株如下表。①科研人员配制的培养基甲的特点是________A．葡萄糖为碳源B．纤维素为碳源C．弱碱性D．弱酸性E．加青霉素F．不加青霉素G．加琼脂H．不加琼脂②根据结果可确定分解纤维素能力最强的菌株是_______。（3）为进一步测定初步筛选出的三种菌株产生的纤维素酶的活性，科研人员分别将它们接种到等量培养基乙中，在相同且适宜条件下_____培养以便让菌体与培养基充分接触，定期取样用斐林试剂对其中的葡萄糖含量进行初步测定。本研究中纤维素酶活性可用单位时间（或单位体积）内_________来表示，判断纤维素酶活性大小的原理是_________________。11．请回答下列问题：（1）工业生产果汁的流程中，离心分离前加果胶酶，45℃条件下，处理1～3小时的目的是____，之所以能达到此目的的原因是____。探究果胶酶的最适用量时，温度和PH值是否影响结果？____（2）固定化酶更适合采用____的方法，固定化细胞则多采用____。固定化酶和固定化细胞采用的方法不同的原因是____。（3）从哪些方面检验固定化酵母细胞的凝胶珠是否合格？____12．大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。回答下列问题：（1）利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、浓度为20mmol/L的___________到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是_____蛋白质。（2）通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红和美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。①伊红-美蓝培养基属于____（填“选择”或“鉴别”）培养基，蛋白胨的作用有_________。②在微生物培养过程中，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和高压蒸汽灭菌。配制伊红-美蓝培养基时，乳糖需要单独在压力为70kPa，温度为115℃灭菌20min，原因是__________。接种前通常需要检测固体培养基是否灭菌合格，检测方法是___________。③滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是_______________。16．辣椒油是食中一绝，其制作方法相当讲究。传统的辣椒油炒制过程，需将辣椒绞碎，再与食用油混合炒制，但辣椒中辣椒素类物质（辣椒油中引起辛辣感和灼烧感的物质统称为辣椒素类物质，主要含辣椒素、二氢辣椒素）的提取效率较低，若在炒制前使用果胶酶处理绞碎的辣椒，则可有效改善此问题。回答下列问题：（1）果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括________等。它能分解果胶，破坏辣椒细胞的________，从而促进辣椒素类物质的释放。（2）某研究小组为探究果胶酶处理辣椒的适宜条件，设计并进行了三组相关实验，实验结果如图曲线所示：①上述实验的自变量分别为________。②有同学认为，图2中随pH继续降低，曲线会与X轴相交。你认为这种说法是否正确并说明理由。________。③由上述结果可知：果胶酶处理辣椒所需的适宜pH和适宜温度条件分别约为________。（3）辣椒素与二氢辣椒素的分子式分别为、，据此结合所学知识推测，凝胶色谱法________（填“适用于”或“不适用于”）分离辣椒素与二氢辣椒素。17．胡萝卜素可用于治疗因缺乏维生素A而引起的各种疾病，也是常用的食品色素。为了降低胡萝卜素的生产成本，某科研人员试图从光合细菌中提取胡萝卜素，实验流程如下图所示。回答下列问题：（1）微生物培养基一般都含有水、无机盐、碳源和氮源四大营养要素，该实验所用培养基中不需要添加的营养要素是___（2）若固体平板培养基上菌落数目过多而连成一片，原因可能是___（答出一种即可），请提出解决此问题的合理措施___（3）若需对光合细菌进行活菌计数，则②过程应采用的接种方法是___（4）从干燥的菌体中提取胡萝卜素常采用萃取法，萃取剂应具有的主要特点是___（5）对萃取液进行浓缩时可直接使用蒸馏装置，浓缩时广口瓶中收集到的是___，在浓缩之前，还必须对萃取液进行的操作是___18．Ⅰ土壤有“微生物的天然培养基”之称，下图表示对土壤中某种微生物进行分离和计数而进行的对样品的稀释和稀释液的取样培养流程示意图。请据图回答有关问题。（1）图示统计样品活菌数目的方法叫做_______________法，主要包括__________操作和____________操作。（2）当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的_____________，一般选择菌落数在_______________的平板进行计数。（3）图中选择了104、105、106倍的稀释液进行平板培养，最可能是测定土壤中_____________（填“细菌”或“放线菌”或“真菌”）的数量，这个平板需要在30～37℃温度下、PH调至______培养1-2d。Ⅱ.以下是胡萝卜素的粗提取和鉴定实验（1）请完成用萃取法提取胡萝卜素的实验流程：胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→_______→胡萝卜素。（2）胡萝卜素的纸层析标准结果示意图，图中A、B、C、D四点中，属于标准样品的样点是_______________，图中②表示________________。19．某研究小组对长江中大肠杆菌含量进行检测，并研究在高盐度（NaCl）工业废水中提取可降解有机物的耐盐菌，请分析回答有关问题：（1）大肠杆菌进行检测的操作和配方图如下：图甲中所示大肠杆菌进行活菌计数的方法称为___________法。（2）若要将图乙中大肠杆菌检测配方修改后用于培养可降解高盐度工业废水中有机物的耐盐菌，则应去除的成分有___________，同时需要添加的成分是___________。（3）将高盐度工业废水采用平板划线法接种在含3%NaCl的固体培养基上（如图一）。然后置于适宜条件下培养一段时间，观察形成的菌落特征；再将分离纯化后的菌株制成菌液，取等量菌液，分别加入到不同NaCl浓度的液体培养基中摇床培养35小时，定时取样统计活菌数目，测定结果（如图二）。图一所示操作，第一次划线灼烧接种环的目的是防止杂菌污染，第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是___________________。图二所示活菌数目在进行统计时，直接从静置的培养液中取样计数的做法是错误的，正确的操作是将培养液___________后取样计数，且每种浓度需设3个重复实验求其平均值。（4）由图二可知，该耐盐菌最适合处理含___________（浓度）NaCl的工业废水，原因是___________________。20．硝基苯酚是工业污水中的重要污染物，某同学欲从污水处理厂污泥中分离分解硝基苯酚的细菌。请回答下列有关问题：（1）为了筛选污泥中可分解硝基苯酚的细菌，在配制培养基时应选择_________（填“硝基苯酚”“硝基苯酚+牛肉膏”或“硝基苯酚”+葡萄糖）作为碳源，不采用其他两组的原因是__________________________________。（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是_____________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。分析造成第二划线区域的第一条线无菌落的可能原因是_________________________。（3）进行梯度稀释时的一般操作是将1mL菌液移入________mL的无菌水中；常用________法接种进行活菌计数，其原理是_____________________________，但统计的菌落数往往____（填“多于”或“少于”）稀释液中的活菌数，原因是________________。（4）实验数据显示，当培养基中加入碳源葡萄糖时，该细菌降解速率明显提高，原因可能是_____________________________________________。21．走进生物技术，体验运用生物技术，感受生物技术给人类生活带来的变化，正是学习生物技术的目的。（1）分离培养酵母菌通常使用__________培养基，该培养基应采用高压蒸汽灭菌法灭菌，其操作温度为______，将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间可观察到菌落，菌落的含义是________。（2）某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的A、B两桶煮熟大豆中并混匀，再将两者置于适宜条件下进行发酵，并在32h内定期取样观测发酵效果。该实验的自变量是________。如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌是_________。（3）工业生产中，若要将乳糖酶固定化，一般不适宜采用包埋法，原因是________，与使用游离酶相比，工业生产中使用固定化酶的优点是________。该实验不需要使用水蒸气蒸馏法，那么，水蒸气蒸馏法的原理是_________。（4）绿色植物甲含有物质W，该物质为无色针状晶体，易溶于极性有机溶剂，难溶于水，且受热、受潮易分解。其提取流程为：植物甲→粉碎→加溶剂→振荡→收集提取液→活性炭处理→过滤去除活性炭→蒸馏（含回收溶剂）→重结晶→成品。该实验操作过程中应注意的事项是________（答出两点即可）。22．有机磷农药广泛应用于农业生产中，常常因过量施用带来环境污染。某同学欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的微生物。请回答下列问题:（1）为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在_______的土壤中取样，若需增加目的菌的浓度，需在相应的培养基中进行_______(填“选择”或“鉴别)培养。（2）将获得的等量3种待选菌种甲、乙、丙分别接种在L含20mg有机磷的同种培养液中(其它营养物质保持充裕，条件一直适宜)。记录实验开始到有机磷被耗尽所用的时间，甲、乙、丙分别为32h、45h、16h，应选择微生物____________(填甲、乙或丙)作为菌种进行后续培养，理由是____________________________。（3）若要测定培养液中的菌体数，既可在显微镜下用__________直接计数，也可选用___________________法统计活菌数目。（4）若要长期保存菌种，我们可以采用_____________________的方法。23．有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_______________为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于__________培养基。（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即__________和________________。（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力______。（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、___________和__________。（5）为了检测某种病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A，B，C，D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，含B的滤纸片周围没有出现透明圈；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小；含D的滤纸片周围的透明圈比含C的小，按病菌对4种抗生素的敏感程度从大到小顺序写出4种抗生素________。（6）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素_______。24．（生物——选修1：生物技术实践）近年来，记录片《舌尖上的中国》引发全民关注美食热潮，其中多次讲述了利用不同微生物的发酵作用制作的美味食品。植物中许多有效成分能满足我们生活的需求，请根据所学知识回答问题。（1）制作泡菜时，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，过量亚硝酸盐会对人体造成伤害。测定检测泡菜中亚硝酸盐含量的方法是_______________，原理是在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与______________发生重氮化反应，再与N-l萘基乙二胺盐酸盐结合，形成玫瑰红色染料。测定亚硝酸盐含量实验中，处理泡菜样品液时要加入氢氧化铝乳液，目的是_______________。（2）某同学利用酵母菌分解麦芽汁，生产啤酒实验。在实验过程中，需将酵母菌细胞活化的作用是_______________；制备固定化酵母细胞过程中，海藻酸钠溶液浓度对实验结果影响很大，若浓度过高，则_______________；鉴定该实验成败通常通过观察凝胶珠的_______________。发酵一定时间后，观察发酵液不再有_______________，说明发酵基本完成。25．放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中。分离和纯化土壤中放线菌的实验流程如下：土壤取样→系列稀释→涂布平板→恒温培养→观察菌落→菌种纯化。回答下列问题：（1）取样时应选择有机物含量丰富且疏松的土壤，可判断大多数放线菌属于____（填“需氧菌”或“厌氧菌”）。将1g土样放入盛有99mL无菌水的锥形瓶中混合均匀，再取1mL土壤悬液注入盛有9mL无菌水的试管中，则该试管中稀释液的稀释倍数为____倍。（2）高氏1号培养基是培养放线菌的常用培养基，该培养基含有的营养物质主要包括____。（3）在分离土壤中的放线菌时，为减少细菌和真菌的干扰，提高放线菌的分离效率，在培养基中要加入一定量的重铬酸钾，重铬酸钾在培养基中所起的作用是____。（4）放线菌的培养温度一般应____（填“低于”或“高下”）细菌的培养温度。（5）筛选放线菌可根据菌落特征进行判断，菌落特征主要包括____（答两点）等方面。（6）分离得到土壤中的放线菌后，可利用____法对菌种进行纯化。26．果粒是将苹果等水果采用一定的方法加工制成的小颗粒，其生产在中国尚属起步阶段。果粒除了可直接食用外还可作为配料加入酸奶、冰淇淋、果冻等食品中。果粒的硬度形状直接影响着最终产品的质量，但大部分果粒经高温处理或机械泵出后成型果粒量少。果胶酶作为一种新型加工助剂，可将果粒的组织结构损坏减到最小，最大限度地提高成型果粒的含量。请回答：（1）果胶酶作为一种果粒加工助剂，它能将果胶分解成可溶性的_______，根据酶的_______（特性）可知组成果粒细胞壁的另一成分__________不会被分解。（2）__________________等条件会影响果胶酶的活性。若以苹果泥为材料，在实验室里可以通过测定等量苹果泥经果胶酶作用相同时间后所滤出的__________________来判断果胶酶在不同条件下的活性。（3）在果粒制作时按2mL酶/kg水果的量加入酶制剂，加热至40～45℃缓慢搅拌处理10～15min，最后加热到90～92℃再冷却罐装。搅拌处理要在40～45℃温度下进行的原因是_____________________________；最后加热到90～92℃后再冷却灌装的目的是_____________________________。27．现代酸酯工艺主要采用醋酸菌进行液态深层发醇。如能筛选出耐乙醇耐高温的产醋酸菌株，会大大降低生产成本。请回答下列问题：（1）利用醋酸菌进行液态深层发酵时，随着发酵的进行，醋酸菌主要通过______（填“有氧呼吸”、“无氧呼吸）释放的热能逐渐积累，导致培养温度超过______℃，从而影响酶的______而导致醋酸菌生长、代谢缓慢，甚至死亡。（2）从工业醋醅中分离出5株耐乙醇、耐高温的产醋酸菌株，为了研究5株菌株的发酵效果需要进行菌株生产性能的测定实验。该实验主测定温度、乙醇浓度对菌种的生长量和______的影响，以确定适合用于工业生产的菌种。这是一种传统的自然筛选菌种的方法，还可以用哪些方法加速菌种的选育进程？______（答出一种即可）。（3）在进行菌株生产性能的测定实验时，某同学用稀释涂布平板法测定菌种的生长量，将某种稀释度下的菌液涂布了三个平板，统计的菌落数分别是121、139、160，空白对照的一个平板上菌落数是10，该同学用130（即140-10）作为平均值。该同学的做法______（填“正确”、“不正确”）理由和建议是______。参考答案1．酵母菌(光学)显微镜酵母菌可在有氧条件下大量繁殖灰绿色醋酸菌是好氧细菌，最适生长温度为30～35℃(夏天温度较高，导致醋酸杆菌大量生长产生醋酸)缺少缺氧、呈酸性(醋酸)发酵前后的pH2．多聚半乳糖酶、果胶分解酶、果胶酯酶分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层化学结合或物理吸附包埋细胞个大，难以被吸附或结合，但不会从包埋材料中漏出真核提供碳源通入氧气、温度3．化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂A原料易焦糊，会发生部分水解为了使橘皮油易于与水分离从大面积养殖的岩藻中获得不能获得的胡萝卜素中除β-胡萝卜素外还有其他胡萝卜素4．0.15该剂量的酶分解果胶彻底，果汁澄清度高，且酶用量少果胶酶化学结合包埋体积大的细胞难以被吸附或结合，而体积小的酶容易从包埋材料中漏出容易与产物分离，可以反复利用5．牛肉膏蛋白胨培养基避免接种环上可能存在的微生物污染培养物接种环温度太高会杀死菌种当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌；通过统计培养基上的菌落数，就能推测出样品中的活菌数黑色菌落鉴别大分子蛋白质在凝胶外部移动，路程短，移动速度快6．琼脂前有机磷农药C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶纤维二糖检测培养基平板灭菌是否合格血细胞（血球）计数板稀释度一个活菌当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落7．稀释涂布平板法涂布第一个平板时涂布器未冷却就涂布平板（或者后两个平板被污染；或者操作失误）重做实验不能液体培养基不能用于分离单菌落不能培养基中没有纤维素，不会形成CR—纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌多聚半乳糖醛酸酶果胶分解酶分解果胶，瓦解植物细胞壁及胞间层，使榨取果汁变得容易果胶被分解成可溶性的半乳糖醛酸，使果汁变澄清8．淀粉水解成葡萄糖（糖化）米酒厂周围水解圈直径与菌落直径小（酶）活性[或（酶）活力]包埋法物理吸附法工程酵母工程酵母菌利用淀粉能力更强，产生CO2速率更快9．牛肉膏、蛋白胨X下降不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖稀释涂布平板法能量合成其他物质的原料10．外凝胶色谱BCFGBac-2振荡葡萄糖的增加量（或纤维素的减少量）纤维素酶能催化纤维素分解为葡萄糖，葡萄糖与斐林试剂在水浴加热时会产生砖红色沉淀，颜色深浅与葡萄糖的含量成正比11．提高出汁率并使果汁变得澄清果胶酶能催化细胞壁和胞间层的主要成分之一的果胶水解成可溶物质，瓦解细胞壁和胞间层是化学结合法和物理吸附法包埋法酶分子很小，细胞体积大观察凝胶珠的形状是否是球形或椭球形挤压凝胶珠是否容易破裂，是否有液体流出；凝胶珠是否有良好的弹性12．磷酸缓冲液甲鉴别提供碳源、氮源、维生素干热灭菌乳糖在高温