显齿蛇葡萄中总黄酮和二氢杨梅素的含量测定

显齿蛇葡萄中总黄酮和二氢杨梅素的含量测定

野生蛇是属于葡萄科的蛇科植物。它是属于梅科可达亚科的。w.t.旺[a.kon]a.phl。var.g洛斯代达.maoye]还有甜茶藤、天竺葵、兔子、红五爪金龙、牙蛇等。主要分布在湖南、湖北、广西、广东、云南、贵州、江西、福建等省区。我国广西和湖南等省区壮族和瑶族人民常用茎叶作饮料。味甘淡,性凉,具有清热解毒,祛风湿,强筋骨之功效,主治皮肤癣癞,黄疸型肝炎,感冒风热,咽喉肿痛,急性结膜炎,痈疖。经初步化学研究,藤茶中主要有效成分为黄酮类化合物,从中分得二氢杨梅素,经药理实验表明,具有明显拮抗去甲肾上腺素和高K+所致的兔胸主动脉条收缩反应及钙拮抗作用,且毒性低,可作为抗心律失常、抗心肌缺血、抗高血压的新型药物。本文对显齿蛇葡萄中总黄酮及二氢杨梅素的含量进行了测定,为今后对显齿蛇葡萄的进一步研究及充分开发利用此药材奠定了基础。1点样定量毛细管CS-930型薄扫描仪(日本岛津),岛津UV-265FW分光光度计,751DG紫外分光光度仪(上海仪器总厂),硅胶G(青岛海洋化工厂),点样定量毛细管(DrummondScientificCo.USA)。二氢杨梅素对照品(由本院周天达教授提供,经光谱鉴定,含量99.95%),显齿蛇葡萄A.grossedentala(Hand-Mazz)W.T.Wang(湖南江华县林业科学研究所提供,本院周天达教授鉴定),所用试剂均为分析纯。2方法和结果2.1热回流提取法供试品溶液显齿蛇葡萄约1g(粉碎,过20目筛),精密称定,置索氏回流器中,石油醚适量加热回流2h,95%乙醇于80℃加热回流提取4h,得醇提取液,放冷,过滤,滤液水浴蒸除部分乙醇,浓缩液移至10ml容量瓶中,95%乙醇定容,吸取1ml置10ml容量瓶中,定容。对照品溶液精密称取二氢杨梅素对照品10.50mg,加95%乙醇溶解并定容至10ml。2.2最大吸收波长测定精密吸取二氢杨梅素对照品溶液0.3ml和供试品溶液0.5ml,分别置于10ml容量瓶中,精密加入5%AlCl3溶液3ml,95%乙醇定容,摇匀后室温放置40min,随行空白,扫描。结果供试品和对照品的吸收图谱一致,最大吸收波长为314nm(见图1)。精密吸取对照品溶液0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5ml分别置10ml容量瓶中,照2.2.1项下进行,于314nm处测定吸收度。以对照品溶液的体积为横坐标,吸收度为纵坐标,回归方程A=5.48X-0.054,r=0.9995(n=5)。精密吸取样品液0.5ml置于10ml容量瓶中,照2.2.1项下进行,测定吸收度。根据回归方程计算总黄酮含量,结果见表1。2.3透明胶纸密封二氢杨梅素检测定量毛细管吸取供试品溶液1μl,对照品溶液2μl,分别点样于硅胶G-CMC-Na薄层板(105℃活化0.5h)上,甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶5)展开,展距15cm,3%FeCl3乙醇溶液喷雾,显色后,覆盖相同大小的玻璃板,四周用透明胶纸密封。二氢杨梅素斑点呈紫色,薄层扫描图见图2。故选λS=440nm,λR=650nm,反射法锯齿扫描,狭缝1.2mm×1.2mm,SX=3,灵敏度中,背景校正。准确吸取对照品溶液2,4,6,8,10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,展开,显色,覆盖玻璃后扫描测定各斑点的面积积分值。以对照品点样量(μg)为横坐标,斑点面积积分值为纵坐标,回归方程Y=1338X+927,r=9951,二氢杨梅素在0.21～1.05μg具良好的线性关系。采用外标两点法测定含量。吸取样品液5μl及对照品溶液3μl和6μl点于同一硅胶G薄层板上,展开,显色,扫描,计算各样品中二氢杨梅素的含量,结果见表1。已知含量的显齿蛇葡萄粉末,分别添加对照品溶液,100℃烘干,按供试品溶液的制备方法,扫描测定,计算回收率,结果见表2。4显齿蛇葡萄互氮化产品分离效果4.1本品含有大量色素,采用石油醚脱脂除去杂质,较好地解决了斑点重叠和拖尾现象。4.2样品在进行TLC时,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶5)和甲苯-乙酸乙酯-甲醇(10∶8∶5)为展开剂展开,结果后者分离效果好。4.3从图2的展开情况看,显齿蛇葡萄中黄酮主要是二氢杨梅素,另外还含有杨梅素等,但含量很低,故以二氢杨梅素为对照品。4.4经测定显齿蛇葡萄中总黄酮含量为43.4%～44.0%,二氢杨梅素的含量高达37.4%～38.5%,该药材具有非常重要的开发利用价值。4.5由于二氢杨梅素的结构中具有邻三酚羟基,容易氧化,所以总黄酮含量测