高致病性猪蓝耳病病毒的分离、变异与融合

高致病性猪蓝耳病病毒的分离、变异与融合

1987年，野猪绿耳病（prrs）在发达国家的养猪业中发现，现在全世界都在发生。我国于1996年由哈尔滨兽医研究所首次分离到蓝耳病病毒(PRRSV),从而证实了本病在我国的存在。十几年来,蓝耳病多次在我国猪群中暴发流行,特别是2006年又出现了高致病性猪蓝耳病毒株,致使蓝耳病在猪群中持续流行,猪长期带毒,疫情越来越严重,给防控工作带来很大困难,对养猪业造成重大的经济损失。如何看待当前蓝耳病在猪群中的发生与流行?多年来,大家对本病都有认识,笔者想从以下几个方面谈点对蓝耳病的再认识,不一定对,仅供同仁参考。1猪绿耳疾病的再识别1.1经典蓝耳病和hp-prrsvPRRSV为单股正链RNA病毒,在已知的RNA病毒中,PRRSV是变异率较高的病毒之一。当前我国猪群中流行的PRRSV流行株呈现多样化趋势,不同毒株之间出现基因重组,活疫苗毒株与流行毒株重组,一个猪场、一个猪群同时存在经典蓝耳病病毒与高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV),并同属于美洲型。两种毒株之间存在差异,主要表现在HP-PRRSV在NSP2蛋白中存在30个氨基酸的缺失,其毒力增强,致病力增高,用病毒接种健康试验猪死亡率高达40%~100%,病猪发热、肺炎症状明显,并有神经症状;而经典PRRSV致病性较温和,死亡率不高。经典蓝耳病病毒代表毒株有CH-1a株、BJ-4株、YA1株等,高致病性猪蓝耳病病毒代表株有JxA1株、HuN4株、SYO608株等。近来研究证实,HP-PRRSV是由国内经典蓝耳病毒株CH-1a逐步演变而来的,已成为当前我国猪群中引发蓝耳病的主要流行毒株,占据绝对优势。HP-PRRSV随着免疫压力的增大,还在逐步变异,主要表现在个别核苷酸发生突变与基因缺失等。2010年杨汉春教授报道,对HP-PRRSV监测发现,猪群中高致病性猪蓝耳病病毒发生变异,其氨基酸出现缺失与插入,并导致其毒力增强。这必将会增加我国猪蓝耳病发生的复杂性,加大了防控难度。1.2降低中和抗体的识别能力,提高了预防难度近来研究表明,蓝耳病病毒氨基酸第N44糖链与其前一个N糖链之间正好是病毒的中和表位,由于存在空间位阻作用而影响中和抗体对中和表位的有效识别,从而降低了中和抗体的作用,使蓝耳病病毒能够逃避机体的清除作用与免疫保护,致使病毒能够在猪群中长期存在,可达2~3年之久,呈现持续性感染,长期向外排毒,难于根除,增大了防控难度。1.3病毒在细胞上复制的能力增强抗体依赖性增强作用(ADE)即当存在体液抗体时,蓝耳病病毒在细胞上复制的能力反而增强。猪体感染病毒产生的体液抗体,不但不能干扰病毒繁殖,反而还具有促进作用,使PRRSV的复制与增殖得到加强,说明体液免疫不能有效保护猪只不发病。1.4t细胞亚群的改变蓝耳病病毒能降低肺泡巨噬细胞的功能,诱导肺部巨噬细胞、血液内巨噬细胞和单核细胞等发生凋亡,引发外周淋巴细胞中的T细胞亚群发生异常改变,对B细胞的功能和体内细胞因子的产生都会产生不良影响。因而造成猪体免疫系统受到抑制,导致机体免疫力下降,易诱发多种病原的混合感染与继发感染,致使猪只发病死亡。1.5prrsv在猪体和蓝耳病中的免疫反应猪只接种疫苗后14天产生体液免疫抗体,25天后达到最高值,35天后消失。尽管PRRSV能诱导机体产生较高水平的体液抗体,但由于中和抗体出现缓慢,临床上PRRSV仍表现为长期的持续性感染,说明体液免疫保护作用并不完全。PRRSV感染猪体后,28天出现抗原特异性淋巴细胞增生,在第49天达到高峰,第77天开始下降;病毒还能刺激辅助性T细胞(TH)和杀伤性T细胞(TC)产生,说明PRRSV可以诱导猪体产生强烈的细胞免疫反应。但由于中和抗体出现缓慢,影响机体获得免疫保护。蓝耳病疫苗的免疫,同源性疫苗免疫力比异源性疫苗要高,交叉保护作用,不同的毒株有高有低,差别很大。这就造成用蓝耳病弱毒活疫苗免疫接种,有的猪场效果很好,有的猪场效果不理想。但由于中和抗体出现缓慢,严重影响机体获得免疫保护。1.6猪群中蓝耳病的传播与传播当前我国蓝耳病病毒流行毒株呈现多样化趋势,毒株变异加剧,不同毒株之间出现重组,疫苗毒株与流行毒株重组,高致病性猪蓝耳病毒株也发生变异,这必将增大我国猪蓝耳病发生与流行的复杂性与防控难度。同时,由于我国猪群中蓝耳病阳性检出率很高,特别是生产母猪、种公猪和后备母猪隐性带毒(可达2~3年之久)持续性感染并长期向外排毒,通过引种与市场流通,经垂直传播与水平传播感染新的猪群,致使病毒在猪群中形成恶性循环,导致疫病在猪群中长期存在,常年发病,甚至暴发流行。加之免疫抑制、疫苗质量不稳定、猪群免疫力低下、饲养环境恶劣、生物安全措施不到位等多种因素的影响,致使蓝耳病在猪群中长期存在,防控工作将是持久战。1.7我国猪群中prrsv毒株的现状2010年韩国与俄罗斯等国先后发生欧洲型PRRSV流行,中国香港特别行政区的猪场也分离到欧洲型PRRSV毒株,因此我国猪群也将面临欧洲型PRRSV的严重威胁,应引起高度重视。2秩序对策2.1“养防结合”的指导思想要树立“养重于防、防重于治、预防为主、养防结合”的指导思想,科学地管理好猪群,饲喂优质饲料,满足猪只各生长阶段的营养需要,使其健康生长。2.2严格消毒,饲养双病毒猪场应三点式饲养,在配种妊娠、产仔哺乳、保育与肥育(后备种猪)4个阶段实行“全进全出”隔离分群饲养制度,每批猪只全部出舍后,立即彻底清扫、冲洗、反复消毒3次,空舍2天后再进入新猪群。坚持严格的消毒制度;人员、物品与车辆进出要严格消毒,并定向流动;消毒用1∶800卫康、1∶800消毒威、1∶400菌毒敌、1%强力消毒灵等,对PRRSV都有很强的杀灭作用;带猪消毒可选用1∶1000卫康、1∶2000消毒威、1∶200农福、1∶1000百毒杀等,既安全,效果又好。场内严禁饲养牛、羊、鸡、犬、猫等动物,并驱赶鸟类;最大限度控制传染源传入猪群,切断传播途径。2.3血清学检测猪自繁自养,不轻易引种。如需引种,一定要严格检疫。引入种猪后要隔离观察1个月,进行血清学检测后,阴性猪只方可引入作种用,禁止引入阳性带毒猪只。后备种猪配种前1个月应做病原检测,带毒阳性者坚决淘汰,不能当作种用;阴性猪只免疫接种后,发情方可配种。2.4次抗体水平种猪群每季度用ELISA试剂盒或间接免疫荧光技术检测1次抗体水平;每半年用RT-PCR法或免疫过氧化物酶法检测1次病原,发现阳性带毒猪只坚决淘汰,净化种猪群,确保种猪群的安全。2.5其他疫苗的使用按照科学的免疫程序,做好下列免疫接种工作,提高猪群的特异性免疫力。(1)种猪群要做好猪瘟、伪狂犬病、口蹄疫、细小病毒病、乙型脑炎等病毒病的疫苗接种,确保免疫效果,这对防控蓝耳病的发生与流行非常重要,不可掉以轻心。其他疫苗尽可能不用,并不是疫苗接种越多就越健康。(2)仔猪群首先要做好猪瘟、伪狂犬病、口蹄疫、圆环病毒病、喘气病等疫苗的免疫接种,并确保其免疫保护力。仔猪也要避免过多使用疫苗,细菌性疫苗少用,重点是控制好病毒性疾病。(3)蓝耳病的免疫接种。(1)蓝耳病弱毒活疫苗:种公猪与妊娠母猪不准接种猪蓝耳病活疫苗,与猪瘟疫苗的免疫接种要间隔7天,否则会干扰猪瘟疫苗的免疫效果。(2)蓝耳病灭活疫苗:用于种公猪与妊娠母猪的免疫,母猪妊娠40天内首免,间隔20天后二免,以后每半年免疫1次,每次每头肌注4毫升;种公猪第1次免疫与母猪同时进行,以后每半年免疫1次,每次每头肌注4毫升。免疫期为6个月。2.6中药制剂,联合组方临床实践证实,选用细胞因子制剂,如干扰素、免疫核糖核酸、转移因子、白细胞介素、抗菌肽、溶菌酶、细菌素、排疫肽(5种高免球蛋白)、猪疫康(益生菌、细胞因子等)、黑客(益生菌、免疫晶蛋白)、加立健(细胞因子、免疫增强剂)、副猪清(含细菌素、特殊佐剂)、优康等;中药制剂,如黄芪多糖、灵芝多糖、香菇多糖、甘草多糖、板蓝根、柴胡、穿心莲、鱼腥草、双黄连、金银花、大青叶等;联合组方,定期进行保健,可有效预防蓝耳病或其他病原体混合感染与继发感染。药物保健方案推荐如下。2.6.1肌注排疫肽2次5d方案1:仔猪出生后,肌注倍健(免疫核糖核酸)0.25毫升,1、2日龄分别口服止痢宝(嗜酸乳杆菌口服液)1毫升、2毫升;或者1日龄与4日龄肌注排疫肽0.5毫升;同时1、2、3日龄各口服1次“杆诺肽”(芽孢杆菌活菌),每次0.5毫升;可有效预防红、黄、白痢和病毒性腹泻,增强免疫力,提高抗病力。方案2:仔猪1~3日龄,每头用副猪清2克对水20毫升后口服,每天1次,可预防拉稀和多种细菌感染。方案3:3日龄仔猪每头肌注牲血素1毫升、0.1%亚硒酸钠-维生素E注射液0.5毫升,补铁、补硒,防止发生缺铁性贫血和拉稀。2.6.2猪气调湿风选单克3.3克仔猪23~28日龄断奶时,断奶后母猪下产床,仔猪在产房停留5天后再转到保育舍饲养。因此,仔猪断奶前后各7天应进行药物保健,减少断奶应激、饲料应激、营养应激、温度应激及环境应激,因为应激易诱发保育仔猪腹泻、断奶仔猪多系统衰竭综合征、蓝耳病、慢性猪瘟、水肿病、链球菌病及喘气病等。方案1:喘束治(泰乐菌素、多西环素、微囊包被的干扰素与排疫肽,大连三仪公司研发)500克、溶菌酶400克、奇健(黄芪多糖粉)800克、板蓝根粉800克,拌入1吨料中连续饲喂12天。方案2:清开灵粉2000克、氟康王(10%氟苯尼考、干扰素、转移因子)400克、抗菌肽160克,拌入1吨料中连续饲喂7~12天。方案3:副猪清300克、细菌素100克、黑客250克、黄芪多糖粉1500克、甘草粉200克,拌入1吨料中连续饲喂7~12天。方案4:颗粒料不好添加药物,可改为饮水。电解质多维(每200克对水1000升)+葡萄糖粉(每200克对水1吨)+黄芪多糖粉(每400克对水1吨)+板蓝根粉(每600克对水1吨)+口服加立健(每500克对水4000千克)+猪疫康(每100克对水1500千克),连续饮用12天。方案5:保育仔猪转入肥育舍之前7天驱虫1次,丙硫苯咪唑,每千克体重10~20毫克,口服1次。2.6.3囊包的给药方案保育猪刚转群到肥育舍保健1次,肥育中期再保健1次、驱虫1次,直至出栏上市不再用药;后备种猪配种前保健7天,并驱虫1次。方案1:福乐(10%氟苯尼考、微囊包被的干扰素、转移因子)600克、溶菌酶400克、黄芪多糖粉1500克、板蓝根粉1500克、甘草粉200克,拌入1吨料中连续饲喂7~12天。方案2:呼舒佳(泰妙菌素、佐剂)1000克、抗菌肽200克、倍康肽(白细胞介素-4)300克、板蓝根粉1500克、甘草粉200克,拌入1吨料中连续饲喂7~12天。方案3:每吨饮水添加双黄连膏粉(金银花、黄芩、连翘等)400克、细菌素100克,加猪疫康(每100克对水1500千克),连续饮用12天。2.6.4其他疾病的治疗母猪妊娠中期与产仔前后各7天应进行药物保健,不仅可预防繁殖障碍和高热综合征,而且有利于母猪与胎儿的健康发育以及产仔安全,减少子宫内膜炎、阴道炎、乳房炎及初生仔猪多种疾病的发生。方案1:清开灵粉2000克、抗菌肽220克、排疫肽400克,拌入1吨料中连续饲喂14天。方案2:鱼腥草粉4千克、猪疫康120克、加立健500克、细菌素150克,拌入1吨料中连续饲喂14天。方案3:5%爱乐新800克、干扰肽1000克、转移肽500克、溶菌酶400克、黄芪多糖粉2000克,拌入1吨料中连续饲喂14天。2.7采用细胞因子疗法综合治疗临床上治疗本病难度很大,如果早发现、早诊断、早用药、早治疗,用药对路、方法科学、方案可行,药量足、疗程够,是可以治愈的。由于疾病是由多种病原混合感染与继发感染引起的,