第二章 提取分离方法

第二章中药化学成分的一般研究方法第一节中药化学成分及生物合成简介一、中药化学成分类型简介1、糖类——单糖、低聚糖、多糖大多属于水溶性成分。2、苷类——糖和非糖物质通过糖的端基C原子链接而成的化合物。

苷苷元

苷多亲水苷元偏亲脂3、醌类——分子中具有醌式结构的化合物萘醌类分子含酚羟基，有一定酸性，可溶于碱水。4、苯丙素类——含有C6－C3骨架的化合物（1）香豆素：邻羟基桂皮酸形成的酯，分子多含酚羟基，偏亲水性（2）木脂素：具有2个C6－C3骨架的衍生物

5、黄酮——具有C6－C3－C6骨架的衍生物

异牡荆素多含酚羟基，显酸性，可溶于碱水。6、萜和挥发油——分子式符合（C5H8）n通式的化合物。薄荷醇龙脑挥发油有挥发性，可随水蒸汽蒸馏。7、生物碱——含N有机化合物，有碱性，可溶于酸水。8、甾体类化合物——含甾体母核的化合物。龙胆碱9、三萜化合物——基本骨架由30个C组成。10、鞣质——复杂的多元酚类化合物总称。没食子酸逆没食子酸属于水溶性成分。二、各类中药化学成分的主要的生物合成途径类型分类C2单位（CH3COOH）：脂肪酸、酚酸、苯醌、等聚酮类C5单位（异戊二烯）：萜类、甾类C6单位：香豆素、木脂素等苯丙素类化合物氨基酸：如生物碱类复合单位：由上述单位复合构成（一）醋酸——丙二酸途径（AA－MA途径）产物：脂肪酸、酚类、蒽醌等1、脂肪酸饱和脂肪酸——AA－MA途径(乙酰丙二酸酯途径：缩合、还原)不饱和脂肪酸——氧化成羟基衍生物（脱水而成）（注：ATP：三磷酸腺苷ADP：二磷酸腺苷）2、酚类——AA－MA途径：只有缩合3、醌类在AA－MA途径中由多酮环合成各种醌类和聚酮类

（二）甲戊二羟酸途径（

MVA）产物——萜类、甾体类MVA头—尾DMP（焦磷酸二甲烯丙酯）IPP(焦磷酸异戊烯酯)氧化、还原、脱羧、缩合、重排→反式角鲨烯→三萜、甾类（三）莽草酸途径（桂皮酸途径）产物具有C6-C3骨架的苯丙素衍生物：香豆素、木质素、木脂素等具有C6-C3-C6骨架的衍生物：黄酮类前体——苯丙氨酸（四）氨基酸途径

（aa途径）产物——生物碱前体——乌氨酸、赖氨酸——脂肪胺（TCA循环中α酮酸还原氨）苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸——芳香族生物碱（莽草酸途径）（五）复合途径1、AA－MA途径——莽草酸途径2、AA－MA途径——MVA途径3、aa——MVA途径4、aa——AA－MA途径5、aa——莽草酸途径第二节中药化学成分的提取分离方法

一、中药有效成分的提取方法（一）溶剂提取法依据：化学成分的溶解性（极性）关键：提取溶剂的选择溶剂的选择原则：相似相溶的原则，价廉、易得、无毒、安全等。提取方法：浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续回流提取法。

提取溶剂性能特点适宜提取成分提取方法强极性溶剂溶解范围广（酸水、碱水）生物碱盐穿透能力强苷类价廉易得、安全糅质煎煮法糖类渗漉法水有些脂溶性成分溶解不完全氨基酸（酸水）有些苷类成分的酶解蛋白质水提液易发霉、变质水溶性杂质多，过滤困难沸点高，浓缩困难常用提取溶剂性能特点

提取溶剂性能特点适宜提取成分提取方法

除去多糖、溶解范围广（不同浓度乙醇）蛋白质外渗滤法（稀醇）水溶性杂质溶出少的大多数浸渍法乙醇可抑制酶的活性化学成分回流法提取液不易发霉、变质均可连续回流法大部分可回收利用但有挥发性、易燃烧甲醇溶解特点与乙醇相似，但有毒丙酮溶解性能同乙醇，但沸点低、易挥发，作为提取溶剂不常用；但对色素溶解性能好，在分离、精制时常用。亲水性有机溶剂（和水可任意混溶）常用提取溶剂性能特点提取溶剂性能特点适宜提取成分提取方法

对化合物溶解选择性较强;水溶性杂质少、易纯化;游离生物碱回流法挥发性大、易燃烧、有毒;苷元连续回流法价格昂贵，对提取设备要求高;某些苷类穿透力较弱，提取时间长;作为提取溶剂不常用。

如:乙醚bp.35℃，极易燃氯仿bp.61℃、d1.480，不易燃，毒性大,对生物碱溶解性好苯bp.80.1℃，毒性大石油醚沸程30~60℃、60~90℃、90~120℃脱脂、脱色常用于甲醇、乙醇不能任意混溶。亲脂性有机溶剂常用提取溶剂性能特点（二）水蒸气蒸馏法适用于挥发性成分（主要是挥发油）的提取

（三）二氧化碳超临界流体萃取技术（CO2-SFE）超临界流体萃取技术：以超临界流体作为萃取介质的一种提取新技术。超临界流体：处于临界温度（Tc）、临界压力（Pc）以上，介于气体与液体之间的流体。特点：具有液体和气体的双重特性。如：密度与液体近似黏度与气体近似，对很多物质有很强的溶解能力，扩散系数是液体的100倍（不及气体）中药提取常用的超临界流体CO2的优点：1.临界温度（Tc=31.4）接近室温,热敏成分稳定。2.临界压力（Pc=7.37MPa）不太高,易操作。3.本身呈惰性，与化合物不反应。4.价格便宜。超临界流体萃取中药成分的主要优点：1.可以在接近室温下工作，防止热敏成分的破坏或逸散。2.萃取过程几乎不用有机溶剂，萃取物中无溶剂残留，对环境无污染。3.提取效率高，节约能耗。二、中药化学成分分离与精制方法分离依据分离方法分离原理或特点

二相萃取法分配系数（K）差异逆流分溶法（CCD）液滴逆流色谱法（DCCC）高速逆流色谱法（HSCCC）液-液分配柱色谱正相色谱和反相色谱加压液相色谱法正相色谱和反相色谱快速色谱低压液相色谱（LPLC）中压液相色谱（MPLC）高压(效)液相色谱法（HPLC）分配系数（K）差异溶剂沉淀法:1.水提醇沉法（水/醇法）除去多糖、蛋白质等水溶性杂质2.醇提水沉法（醇/水法）除去树脂、叶绿素等脂溶性杂质3.醇/醚（丙酮）法皂苷的纯化（除去脂溶性杂质）4.酸/碱法生物碱的分离纯化5.碱/酸法酸性成分（如苷元）的分离纯化试剂沉淀法:1.钙、钡、铅盐沉淀法酸性成分的分离2.生物碱沉淀试剂沉淀法生物碱的分离纯化3.结晶及重结晶化合物的进一步精制溶解度差异中药化学成分分离与精制方法物理吸附（表面吸附）特点:无选择性、吸附可逆、可快速进行，应用较多如:硅胶极性吸附剂氧化铝极性吸附剂吸附性差别活性炭非极性吸附剂化学吸附的特点:有选择性、吸附牢固或不可逆、洗脱难，应用少。如:碱性氧化铝对酚酸类（黄酮、蒽醌）的吸附强酸性硅胶对生物碱的吸附强吸附性差别中药化学成分分离与精制方法半化学吸附的特点：吸附力介于上述二者之间，较弱。如:聚酰胺（氢键吸附）大孔吸附树脂吸附原理（范德华引力或产生氢键）分子筛原理（本身多孔性结构的性质决定的）吸附性差别中药化学成分分离与精制方法透析法(半透膜膜孔的分子筛作用)凝胶滤过法(三维网状结构的分子筛作用)

超滤法(分子大小不同引起的扩散速度的差别)超速离心法(溶质在超速离心作用下沉降性的差别)蛋白质的脱盐精制蛋白、多糖的分离及小分子化合物的分离大分子化合物精制分离同上。分子大小差别中药化学成分分离与精制方法阳离子交换树脂离子交换树脂法阴离子交换树脂

应用：用于氨基酸、生物碱、有机酸的分离）离解程度不同中药化学成分分离与精制方法常用色谱分离方法介绍

吸附色谱吸附剂分离原理吸附规律应用

硅胶吸附原理弱酸性、极性吸附剂广泛（酸、碱及化合物极性越大、中性成分均可）吸附能力强（难洗脱）溶剂极性越小，吸附力越强

氧化铝吸附原理碱性、极性吸附剂碱性、中性成分吸附规律同上（酸性成分与铝络合）活性炭吸附原理非极性吸附剂从稀水溶液中富集微量物吸附规律与上相反脱色（脂溶性色素）吸附剂分离原理吸附规律应用

聚酰胺氢键吸附酚羟基数目多，吸附力强能形成分子内氢键者，吸黄酮、蒽醌的分离附力下降

母核芳香化程度高者，吸附力增强，水（介质）中除鞣质吸附力强，水洗脱力弱

大孔吸附树脂吸附原理非极性化合物易被非极性树脂吸附糖与苷的分离

分子筛原理溶剂中溶解度增大，吸附力下降（从水提液富集苷非极性树脂，极性小的溶剂洗脱力强生物碱的精制常用色谱分离方法介绍

类型固定相流动相应用正相色谱水>BAW系统极性、中极性物质分离（以PPC为例）反相色谱ODS<甲醇-水、乙腈-水最广泛，非极性、中极性各类物质的分离

液-液分配色谱（分配原理）加压液相色谱类型压力（Pa）分离规模

分析用高压液相色谱（HPLC）>20.2×1051mg左右制备用高压液相色谱（HPLC）>5mg中压液相色谱(MPLC)5.05~20.2×105>100mg低压液相色谱(LPLC)<5.05×1050mg~1g快速色谱约2.02×105>10mg

类型原理溶胀溶剂应用葡聚糖凝胶分子筛（大→小）水多糖、多肽、（SephadexG）蛋白质分离

羟丙基葡聚糖凝胶分子筛（糖苷）水、极性有机溶剂适于不同类型（SephadexLH-20）吸附原理（苷元）或二者的混合溶剂化合物分离葡聚糖凝胶色谱

离子交换吸附树脂树脂类型原理应用阳离子交换树脂离子交换从酸水溶液中吸附碱性成分（生物碱）强酸性（R-SO3-H+）（阳离子）（除去酸性、中性成分）弱酸性（-COO-H+）阴离子交换树脂离子交换从碱水溶液中吸附酸性成分（有机酸）强碱性（RN+(CH3)3CI-）（阴离子）（除去碱性、中性成分）弱碱性(伯、仲、叔胺)第三节、中药有效成分化学结构的研究方法（一