临床微生物学检验：实验八 肠道杆菌的检验（三）

实验八肠道杆菌的检验（三）目的要求：1熟悉肠道杆菌的分离鉴定程序及临床意义；2掌握肠道杆菌的生化反应特点和数值鉴定方法；3掌握鉴定肠道杆菌的生化反应试验和血清学试验的操作方法和结果分析实验内容（第三次实验）：1观察试验结果，查编码手册鉴定；2沙门菌及志贺菌的血清学鉴定（2人一组，小组作）；3下结论，出实验报告。1KIA、MIU试验结果记录细菌名称KIA试验（乳糖、葡萄糖、气体、H2S）MIU试验（动力、吲哚、脲酶）大肠埃希菌AA+-++-变形杆菌（普通；奇异）KA++++++-+乙型副伤寒沙门菌KA+++--痢疾杆菌

KA---+/--KIA结果观察（酚红指示剂）：未种菌的培养基为红色

上层斜面为红色，碱性，记录为K；黄色，酸性为A。下层为红色，碱性，记录为K；黄色，酸性为A。看到有气体，记录产气+，不产气-，观察到黑色，为H2S试验+MIU结果观察：（未种菌培养基为淡黄色）

动力阳性：可见接种线变宽、变模糊、培养基变浑浊；尿素酶试验阳性：培养基全部变成桃红色；靛基质阳性：加入靛基质试剂的界面形成玫瑰红色。

2微量生化管结果及数字编码鉴定（参P32）

微量生化管鉴定细菌的步骤：接种细菌，孵育一定时间判断阳性/阴性结果计算数值，组成编码查询编码手册，查找对应的细菌+变黄，气—黄色不变+黄变紫+黄变紫+变黑色+变红+蓝变黄+蓝变黄+无色变绿+黄变红+绿变蓝产品名称结果判断培养时间(小时)备注阳性阴性葡萄糖（产气）黄色产气蓝色或绿色不产气24-48穿刺接种赖氨酸脱羧酶肉汤紫色黄色18-24每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支，并加灭菌液体石蜡覆盖培养基液面。试验管紫色，对照管变黄色，为阳性；试验管与对照管均变黄色，为阴性。鸟氨酸脱羧酶肉汤紫色黄色18-24硫化氢生化管变黑沿穿刺线呈伞状生长不变黑穿刺线周围清晰，无变化18-24穿刺接种蛋白胨水红色环不变色(黄棕色环)18-24滴加Kovacs试剂2-4滴乳糖发酵管黄色绿色或蓝色或紫色或紫灰色18-24卫茅醇黄色不变色18-24穿刺接种苯丙氨酸脱氨酶绿色或深绿色不变色18-24滴加10%三氯化铁溶液2-3滴，自斜面培养物上流下。尿素酶玫瑰红黄色12-24斜面：穿刺接种；液体同其他生化管。西蒙氏枸橼酸盐蓝色浅绿色24-48有时需延长培养时间至4天氨基酸脱羧酶对照黄色黄色18-24加灭菌液体石蜡覆盖培养基液面例如：未知菌发酵葡萄糖产酸产气（AG）；赖氨酸+，鸟氨酸-，硫化氢-；蛋白胨吲哚+，乳糖+，卫茅醇？（+或-）；苯丙氨酸-，尿素-，枸橼酸盐-。

得出总值AG460orAG470

查询编码手册为大肠埃希菌3沙门菌及志贺菌的血清学鉴定（玻片法，p33）原理：Ag+Ab——Ag-Ab凝集物方法：1于干净载玻片的测试区域及对照区域分别滴加1滴抗血清和1滴生理盐水；2用接种环蘸取新鲜培养物单菌落1环于抗血清和生理盐水中；3来回倾斜晃动混合30s-1min；4观察凝结现象：O抗原为颗粒状凝集，H抗原为絮状或绒毛状凝集。志贺菌属的血清学分型鉴定志贺菌属分四个血清群（种）：即A群痢疾志贺菌，B群福氏志贺菌，C群鲍特志贺菌，D群宋内志贺菌，是人类细菌性痢疾的病原体。材料：志贺菌四种多价抗血清；福氏志贺菌抗血清；玻片，待测菌。操作方法：先用志贺菌四种多价抗血清出现凝结物阳性结果鉴定为志贺菌属细菌A群痢疾志贺菌诊断血清B群福氏志贺菌诊断血清C群鲍特志贺菌诊断血清D群宋内志贺菌诊断血清出现凝结物阳性结果鉴定为福氏志贺沙门菌的血清学分型鉴定沙门菌有2500多种血清型，含有菌体O抗原，鞭毛H抗原，有的还有Vi抗原。根据相同的O抗原分组，其中最常见的临床分离株为A—F组，常检查A—F组的O抗原确定沙门菌属；检查相应组别的O抗原成分可确定哪一组的沙门菌；但鞭毛H抗原比较特异，每种沙门菌各不相同，故常检查特异性的H抗原鉴定是哪一种血清型沙门菌。组菌名O抗原H抗原（第1相第2相）A甲型副伤寒1,2,12Ha-B

乙型副伤寒1,4,5,12Hb1,2

鼠伤寒1,4,5,12Hi1,2--------C猪霍乱6,7Hc1,5

希氏（丙型）6,7，ViHc1,5D伤寒9,12（Vi）Hd-E鸭3,10-1,6F阿伯丁11Hi1,2材料：沙门菌属诊断血清全试剂盒（教师示教，含A-F多价血清两瓶/o2/o4/o7/09/Vi/Ha/Hb/Hc/Hd/Hi)---可鉴定到沙门菌的血清型;

学生桌沙门菌A-F多价血清，沙门菌O4抗血清，只能鉴定细菌所在的组.方法：先用沙门菌A-F组的多价抗血清与细菌作用如出现颗粒状凝结物鉴定为沙门菌属细菌再用沙门菌O4抗血清与细菌作用如出现颗粒状凝集物鉴定为沙门菌