中药炮制理论的实验研究

中药炮制理论的实验研究

醋煮和醋蒸工艺延胡索是一种常用的理气止痛药，具有活血、益气、止痛的功能。用于胸胁、脘腹疼痛,经闭痛经,产后瘀阻,跌扑肿痛等症。历代对延胡的炮制有生用、炒、醋炙、酒炙、醋煮、盐炙等,现多采用醋炙、醋煮和醋蒸,部分地区沿用酒炙和盐炙。《中国药典》2000年版及2005版收载的只有生延胡索和醋延胡索2种。延胡索主要含有多种生物碱,包括叔胺碱、季铵碱及酚性叔胺碱。药理实验证明,延胡总生物碱、延胡甲素、乙素、丑素均有较强的镇痛作用,以乙素镇痛作用最强。现代研究主要以总生物碱、元胡乙素、季铵碱的含量为成分指标,以镇痛及小鼠耐缺氧实验为药理指标,对其炮制原理、炮制工艺进行探讨。本研究为探讨不同炮制方法制得的生延胡索和醋延胡索的抗炎、镇痛药效作用,进行了抗炎、镇痛的实验研究,现报道如下。1scxk粤昆明种小鼠,雌雄兼用,2~3月龄,体重18~22g;以上动物均由广州中医药大学实验动物中心提供(动物许可证:粤监证字2008A005,SCXK(粤)2008-0001)。生延胡索和醋延胡索颗粒由广东省中医研究所提供(批号:070713、070816)。实验时取药物颗粒以生理盐水溶解,配置生理盐水溶液,4℃保存备用。二甲苯、冰醋酸、伊文思兰等试剂均为市售分析纯试剂。消炎痛,河南安阳华安制药有限公司,批号:080716,以生理盐水溶解,4℃保存备用2方法和结果2.1抗炎试验2.2镇痛实验3中药质量与药理中药是植物、动物、矿物等原生药材,所含成分非常复杂,往往一种中药,含有多种化学成分。具有明显药理作用的成分,有生物碱、苷类、挥发油、多糖、有机酸、鞣质、蛋白质、氨基酸、无机成分及微量元素等。中药炮制是以中医药基本理论为指导,根据辩证施治用药的需要和药物自身的理化性质以及制剂的不同要求,对原药材进行的一整套加工处理,使药物的某些作用突出,某些作用减弱,力求符合疾病实际的治疗需要,以提高临床疗效。中药炮制成饮片后其化学成分、理化性质发生改变,从而影响药物的疗效。所以必须重视中药的炮制工作,以保证临床用药的安全、准确、有效。延胡索为罂粟科植物CorydalisyanhusuoW.T.Wang的干燥块茎。主产于河北、山东、江苏、浙江等地。具有活血、利气、止痛之功效,用于胸胁、脘腹疼痛、经闭通经、产后瘀阻、跌扑肿痛等。现在,临床主要集中用于各种疼痛、心血管疾病及痛经等。延胡索镇痛的主要药效物质基础是延胡索总碱,其中延胡索乙素是主要有效成分。现代研究证实,醋炙元胡水煎液的生物碱含量比生延胡索显著升高,而酒炙元胡水煎液中的生物碱含量最低,因此药典已未再收载。目前,从中药延胡索中提取的延胡索乙素(dl-tetrahydropalmatine,dl-THP),即左旋四氢巴马汀(l-tet2rahydropalmatine,l-THP,又称颅痛定)已经广泛用于临床。本实验研究显示,醋延胡索及净制延胡索能显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀,抑制小鼠腹腔毛细血管的通透性,提高热板法疼痛模型小鼠痛阈值,抑制醋酸所致小鼠扭体痛反应,具有良好的抗炎镇痛药理效应。但在镇痛作用方面醋延胡索要显著优于净制延胡索,这可能与经醋炙后,延胡索中的生物碱与醋酸结合成易溶于水的醋酸盐易于溶出有关。本实验研究进一步说明了中药炮制理论的科学性。2.1.1连续给药对小鼠耳水肿度的影响取昆明种小鼠60只,体重18-22g,雌雄各半,随机分为4组,即生理盐水对照组、消炎痛组(给药量为1mg/kg)、醋延胡索组(给药量为4g/kg)、生延胡索组(给药量为4g/kg)、每组小鼠10只,灌胃给药(对照组给予等容的生理盐水),每天1次,连续给药3天。末次给药后0.5h,将0.02ml二甲苯均匀涂于每只小鼠右耳耳廓两面致炎,左耳不涂作为正常对照。1h后脱颈处死各小鼠,用直径8mm打孔器在左耳及右耳同一部位打下圆耳片,用电子天平称重,以右耳重量减去左耳重量为肿胀度,计算耳肿胀度及肿胀抑制率。肿胀抑制率(%)=(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/(对照组平均肿胀度)×100%,分别计算耳肿胀度及肿胀抑制率,结果以SPSS11.5进行组间t检验,结果见表1表1结果显示,醋延胡索组、净制延胡索组和消炎痛组在给药后均能不同程度地抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀,p<0.05;但经t检验发现醋延胡索组、净制延胡索组与消炎痛组有显著性差异,p<0.05。2.1.2小鼠肠道感染后成分的变化取小鼠随机分组(用药方法同上),末次给药1h后尾静脉注射1%伊文思蓝10ml/kg,同时腹腔注射0.6%醋酸10ml/kg,20min后拉颈处死,打开腹腔,用6ml蒸馏水分3次冲洗腹腔,收集腹腔洗液,测定光密度值OD。抑制率=(对照组渗出量-用药组渗出量)/对照组渗出量×100%,结果以SPSS11.5进行组间t检验,结果见表2。由表2可见,净制延胡索、醋延胡索各组及消炎痛组对致炎小鼠尾静脉注射伊文思兰后,腹腔毛细血管的通透性有明显的抑制作用(P<0.01或P<0.05);而消炎痛组优于醋延胡索组、净制延胡索组,差异显著,p<0.05。2.2.1对小鼠的痛行为检测取雌性小白鼠,将智能热板仪温度调至(55±0.5)℃,预热10分钟后,将雌性小鼠每次1只放在热板上,小鼠自放上至出现舐后腿、趾所需时间(s)作为该鼠的痛阈值,将筛选合格(舔足时间小于5s或者大于30s或者踊跃者弃之不用)的雌性小鼠50只,随机分成5组,每组10只,分组及给药方式同2.1.1,每组给药前重复测定痛阈值,取两次痛阈平均值作为正常痛阈值。连续给药3d,每天1次。第3天给药后在第0.5h、1h、3h、6h测量小鼠的痛阈值,记录结果,计算各组痛阈提高百分率,结果以SPSS11.5进行组间t检验,结果见表3。表3结果显示,净制延胡索、醋延胡索各组及消炎痛组在给药后均能显著提高痛阈值(P<0.05或P<0.01),而消炎痛组和醋延胡索组则优于净制延胡索组(P>0.05)。2.2.2单次给药后小鼠的镇痛试验取小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,每组10只,分组及给药方法同2.1.1,均于末次给药后30min,各小鼠腹腔注射0.8%的醋酸0.1ml/10g,观察记录15min内每只小鼠出现扭