食品微生物检验基本技术-微生物细胞大小的测定和显微镜直接计数

微生物细胞大小的测定和显微镜直接计数技术目录/Contents01微生物细胞大小测定所用器材02微生物菌体大小测定方法微生物检验室01测定用器材微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，只有在显微镜下用刻有一定刻度的测微尺才能测量。目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央刻有精确的刻度，通常是将5mm等分为50小格（或把10mm长度等分为100小格），实际每格等于100μm。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺来标定，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。01测定用器材镜台测微尺镜台测微尺为一块特制的载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有精确的刻度，将长1mm的直线等分为100小格，每小格等于10μm（即0.01mm)，是专门用来标定目镜测微尺的。01测定用器材镜台测微尺镜台测微尺为一块特制的载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有精确的刻度，将长1mm的直线等分为100小格，每小格等于10μm（即0.01mm)，是专门用来标定目镜测微尺的。01测定用器材目镜测微尺镜台测微尺01

血球计数板是一块特制的厚型载玻片。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm，面积为1mm，深度为0.1mm（即盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm），所以其体积为0.1mm。测定用器材血球计数板的构造01测定用器材01测定用器材01血球计数板的构造测定用器材01血球计数板的构造测定用器材02测定方法

目镜测微尺的校正（1）取下接目镜，旋下目镜的上透镜，将目镜测微尺有刻度的一面朝下，放入接目镜的隔板上，再旋上目透镜，装入镜筒内。（2）将镜台测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆圈位于视野中央。02测定方法

（3）用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行，并使目镜测微尺和镜台测微尺的某一区间的两对刻度线完全重合；也可使两尺的左边第一条线完全重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。02测定方法

（4）记录二对重合线间的目镜测微尺所占的格数和镜台测微尺所占的格数。因为镜台测微尺的刻度每格长10μm，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。目镜测微尺每格长度

（µm）用同样法，分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。注意：校正目镜测微尺只能在特定的情况下重复使用，若更换物镜或目镜的放大倍数时，必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。＝两个刻度重合间镜台测微尺格数×10两个刻度重合间目镜测微尺格数02测定方法

菌体大小的测定①将啤酒酵母制成水浸片。②大小换算。将标本先在低倍镜下找到目的物,然后在高倍镜下用目镜测微尺测定每个菌体长度和宽度所占的刻度,刻度乘上目镜测微尺每格和长度,即等于该微生物的大小。③求平均值

一般测量微生物细胞的大小,用同一放大倍数在同一标本上任意测定10～20个菌体后,求出其平均值即可代表该菌的大小。02测定方法血球计数板的使用

①稀释菌液

根据待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释，目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4～5个酵母细胞为宜，一般稀释100倍即可。

②准备计数板取清洁干燥的血球计数板（使用前可通过显微镜检验计数板上有无污物，若有，则需清洗后才能进行计数），在中央的计数室上加盖专用的盖玻片。02测定方法

③加样悬液摇匀，用滴管吸取一滴置于盖玻片的边缘（不宜过多），让菌悬液沿缝隙靠毛细渗透作用缓缓渗入计数室，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。

④计数静置片刻（一般5～10min)，使酵母菌全部沉降到血球计数室内。将血球计数板置于载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数室后，再换成高倍镜观察并计数。由于活细胞的折射率和水的折射率相近，观察时应减弱光照的强度。02测定方法计数方法：A．计数时，如使用16x25规格的计数板，要按对角线方位，数左上、右上、左下、右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25x16的计数板，除了数其4个对角线方位外，还需再数中央的一个中格（即80个小方格）的酵母菌数。B．如菌体位于大方格的双线上，计数时则数下方和左方线上的酵母细胞（或只计数上方和右方线上的酵母细胞），以减少误差。C．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。02测定方法每个样品重复计数三次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作取其平均值，按下列公式计算每1mL菌液中所含的酵母菌个数。计算公式：

A.16x25的血球计数板计算公式：B.25x16的血球计数板计算公式酵母细胞数/mL＝100小格内酵母细胞个数100×400×10×稀释倍数酵母细胞数/mL＝80小格内酵母细胞个数80×400×10×稀释倍数02测定方法血球计数板的清洗与保藏（l）血球计数板使用后，取下盖玻片，用自来水冲洗，切勿