金氏公式在中药有效成分或组分组合药效配伍强度评价中的运用

金氏公式在中药有效成分或组分组合药效配伍强度评价中的运用

通常，确定两种药物联合使用的联合用药效果是否改善，以确认组间t检验组间差异的显著性。根据组间差异的显著性，组间t检验组的联合使用能力是否大于单用。此方法所得出的概率P值大小仅表示出现差异的可能性,并不能表示出两种药物作用强度单纯相加、增强、显著增强、拮抗或明显拮抗的作用规律。金氏公式是由金正均教授提出,通过实测合并效应与期望合并效应的比较,计算所得q值用于合并用药作用强度的评价,能弥补组间t检验缺点。本文拟通过应用金氏公式判断曲克芦丁与灯盏花素合用后的作用趋势。1材料和方法1.1注射液与灯美国聚乳酸酯曲克芦丁单用注射液制剂(批号:040228,规格:1667mg/100ml)、灯盏花素单用注射液制剂(批号:040228,规格:333mg/100ml),曲克芦丁与灯盏花素合用注射液制剂(批号:040228,规格:2000mg/100ml)均由成都百康药业有限责任公司提供。尼莫地平注射液,德国拜耳公司生产,批号BXN01EL,每瓶50ml含有10mg尼莫地平。1.2x、ldh检测试剂盒MDA检测试剂盒,批号:20030715,GSH-PX检测试剂盒,批号:20030730;LDH检测试剂盒,批号:20030726;SOD检测试剂盒,批号:20030727,以上试剂均由南京建成生物工程研究所提供。1.3《京动许字》第重第重词沙土鼠,体重45～55g,由首都医科大学动物部提供,京动许字(1999)第013号。试验时在成都百康医药工业药理毒理研究院动物室(实验动物使用许可证:SYXK(川)2003-08)饲养及观察。1.4bmj-型包埋机徕卡RM2126型轮转式切片机,上海徕卡仪器有限公司。电脑自动组织脱水机,常州中威电子仪器厂。BMJ-Ⅲ型包埋机,常州中威电子仪器厂。OLYMPUSBX41显微镜,日本OLYMPUS株式会社。PHY-Ⅲ病理组织漂烘仪,常州市中威电子仪器厂。TU-1800spc紫外可见分光光度计,北京普析通用仪器有限责任公司。1.5海马ca1区锥体神经元的检测沙土鼠60只,雌雄各半,按体重随机分为假手术组、模型组、15mg/kg尼莫地平注射液组、36mg/kg合用药物组,30mg/kg曲克芦丁药物组和6mg/kg灯盏花素药物组。于手术前尾静脉注射连续给药10天,于第10天末次给药后30min手术。各组动物均在乙醚麻醉下分离双侧颈总动脉,除假手术组外各组用血管夹夹闭双侧颈总动脉,40min后开夹使血流再通,60min后断头取脑,称重。将脑均分为2份。一份取大脑皮层测定水含量,并做病理切片观察海马CA1区锥体神经元,以2个视野下的存活锥体神经元数总和来表示海马损伤的程度。另一份用0.5mol/LpH=7.8的磷酸盐缓冲水溶液冰浴下制备10%脑组织匀浆,按试剂盒操作步骤测定匀浆中MDA、GSH-PX及LDH的含量。酶活力提高率=给药组酶活力-模型组酶活力模型组酶活力×100%=给药组酶活力−模型组酶活力模型组酶活力×100%MDA降低率=模型组ΜDA含量-给药组ΜDA含量模型组ΜDA含量×100%=模型组MDA含量−给药组MDA含量模型组MDA含量×100%神经元密度提高率=给药组神经元密度-模型组神经元密度模型组神经元密度×100%=给药组神经元密度−模型组神经元密度模型组神经元密度×100%含水量降低率=模型组含水量-给药组含水量模型组含水量×100%增效指数q=AB+C-B×C计算指标变化率和增效指数q值:其中A代表合用药物组检测指标数值变化率,B代表曲克芦丁组检测指标数值变化率,C代表灯盏花素组检测指标数值变化率。2结果2.1gsh-px活性GSH-PX的影响36mg/kg合用药物组明显升高脑缺血再灌注沙土鼠脑组织中GSH-PX活力,增效指数q值为3.37,合用作用为增强,见表1。2.2脑缺血再灌注沙地鼠脑缺血活力变化LDH活力的影响36mg/kg合用药物组显著升高脑缺血再灌注沙土鼠脑组织中LDH活力,增效指数q值为1.20,提示合用作用为增强,见表2。2.3减少脑缺血再灌注沙地鼠脑缺血的药物作用MDA含量的影响36mg/kg合用药物组有明显降低脑缺血再灌注沙土鼠脑组织中MDA含量的作用,增效指数q值为1.15,提示合用作用为增强,见表3。2.4曲克芦丁与灯监控花素单独使用降低脑缺血再灌注沙地皮质组织中的水分含量36mg/kg合用药物组明显降低脑缺血再灌注沙土鼠大脑皮层组织中水分含量,曲克芦丁与灯盏花素单独使用降低脑缺血再灌注沙土大脑皮层组织中水分含量的作用较弱,无统计学意义。计算的增效指数q值为1.23,提示曲克芦丁与灯盏花素合用后作用增强,结果见表4。2.5各组小鼠海马ca1区神经元损伤的比较CA1区神经元密度的影响36mg/kg合用药物组能显著减轻沙土鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的损伤,计算得增效指数q值为1.33,提示合用作用为增强,见表5、图1～5。3联合效应期望值公式本研究运用金氏公式表达式q=EA+B(实测合并效应)/EA+EB-EA×EB(预期合并效应)判断二药物在配伍使用后的治疗效果是否优于单独给药。如果q在0.85～1.15之间为单纯相加(+),1.15～20之间为增强(++),>20为显著增强(+++),在0.85～0.05之间为拮抗(-),<0.55为明显拮抗(--)。该法把概率论中衡量两个独立事件概率的公式PA+B=PA+PB-PA×PB,转换为合并用药(单纯相加)的效应期望值公式EA+B=EA+EB-EA×EB,以此与实测的合并效应比较,并根据生物实验大约有15%的误差,将效应相加的q值扩展为0.85～1.15。本研究中沙土鼠全脑缺血模型试验结果显示,曲克芦丁与灯盏花素单独使用在升高全脑缺血模型动物脑组织中GSH-PX活力和LDH活力,以及降低全脑缺血模型动物脑组织中MDA含量,保护海马CA1区受损神经元的作用均不及曲克芦丁与灯盏花素合用效果,根据各检测指标计算所得增效指数q值均大于1