内毒素葡聚糖开展

微生物室新开项目简介

(1-3)-ß-D-Glucan(葡聚糖)与细菌内毒素1对于侵袭性真菌感染……诊断滞后,治疗手段有限基础疾病病死率很高念珠菌血症若不治疗死亡率可以达到45-76%，侵袭性曲霉病死亡率高达55-70%2诊断方法显微镜检查培养血清学分子生物学3镜检和培养方法敏感性低

血培养：在肿瘤和血液病病人中，50%尸检证实深部念珠菌感染的病例血培养阴性。培养结果阳性仅表示存在某种真菌，区分定植和感染困难培养时间长有些标本采集困难4非培养方法优点快速报告结果敏感性提高取材简便多以真菌在致病状态产生的物质为检测标志物，结果阳性提示有致病性定量检测可判断感染严重程度及疗效评估5非培养诊断的方法简介真菌细胞壁成分（1-3）-β-

D-葡聚糖检测（G试验）真菌抗原检查半乳甘露聚糖（galactomannan)抗原（GM)甘露聚糖(mannan)抗原隐球菌荚膜多糖抗原（乳胶凝集试验）真菌特异的代谢产物D-阿拉伯糖醇真菌DNA的检测6深部真菌感染的诊断标准

EORTC/MSG2008修订版宿主因素临床特征病原学真菌镜检真菌培养组织病理学检查血清学检查方法（间接证据）CSF隐球菌抗原阳性——确诊GM-test,G-test——临床诊断ClinicalInfectiousDiseases2008;467(1-3)-ß-D-Glucan(葡聚糖)“G”试验8b1,6葡聚糖

磷脂双分子层几丁质麦角固醇b1,3葡聚糖合成酶mannoproteinsβ1,3真菌细胞膜、壁结构羊毛固醇C－14去甲基化酶14位还原和7－8位异构酶角鲨烯环氧化酶9(1-3)--D-Glucan生物活性(1-3)--D-Glucan作为真菌细胞壁成分之一，一旦进入机体后，将引起真菌病，严重时将会引起严重的深部真菌感染疾病，因此,深部真菌感染对患者的健康与生命构成严重威胁.传统检测方法为真菌培养，一是周期长，二是阳性率特别低．主要是抗生素类药物的滥用所引起．真菌感染出现逐渐上升趋势．10“G”试验缘何而来？11比浊法反应机理

细菌内毒素 （1-3）

-D-Glucan LAL-RM(反应物)因子C 活化因子C

因子B 活化因子B活化因子G 因子G

凝固酶原 凝固酶

凝固蛋白原 凝固蛋白（凝胶）定量浊度仪 TurbidimetrictechniqueGEL12鲎试验是1968年由Levin和Bang建立。其原理是利用鲎的变形细胞与微量内毒素产生凝集反应的现象，作为判断试品中细菌内毒素含量的一种方法。13

背面观

就像是古代武士的心甲

腹面观

腹部基本呈六角形，

还可以看到它发达的附肢

图2鲎的外形14已知能与鲎试剂发生反应的物质有细菌内毒素和β-葡聚糖，但它们的反应曲线不一样。内毒素反应曲线为S型特征曲线，而β-葡聚糖反应曲线为经过0点的斜线。15

内毒素和β-葡聚糖与鲎试剂反应的特征曲线16酵母菌、丝状真菌细胞壁成分不仅检测曲霉菌，还可以检测念珠菌、镰刀菌、毛孢子菌、支顶孢属不能检测：隐球菌和接合菌美国FDA已批准，欧洲部分国家已注册中国SFDA已获批准进入临床应用敏感性、特异性：90％左右－D－葡聚糖的价值17美国大多数研究限于念珠菌菌血症其他真菌感染（侵袭性曲霉菌病）的研究资料少假阳性：血液透析(纤维素滤膜）；接受血制品治疗（免疫球蛋白）抗生素对结果的影响？？－D－葡聚糖的价值18假阳性问题

污染（无热源的试管、枪头和蒸馏水等）血液透析、腹膜透析纱布或其他医疗物品（外科手术）某些品牌的静脉制剂（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等）抗肿瘤多糖（香菇多糖）某些细菌败血症患者（尤其是链球菌败血症）假阳性与应用β内酰胺类抗生素无关对策:动态监测葡聚糖的变化19－D－葡聚糖（G试验）的缺陷标本采集不能鉴定何种真菌感染20－D－葡聚糖参考值健康人：<10pg/ml可疑感染：10~20pg/ml深部真菌感染：>20pg/ml