专题5-DNA和蛋白质技术

专题5DNA和蛋白质技术考点一DNA的粗提取与鉴定1.基本原理提取原理DNA在NaCl溶液中的溶解度随浓度的变化而改变，DNA在0.14mol／L的NaCl溶液中溶解度最低。提纯原理（对酶、高温和洗涤剂的耐受性及在酒精中的溶解度不同）

①酶的专一性——蛋白酶水解蛋白质而对会对DNA不产生影响。（加柔嫩粉）②蛋白质、DNA热稳定性不同。温度值为60～80℃，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。③洗涤剂瓦解细胞膜，对DNA没有影响。（3）DNA鉴定原理在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色(1)材料的选取：选用DNA含量相对

的生物组织，如非哺乳动物的红细胞（鸡血）、菜花、洋葱等。（2）材料处理：鸡血（吸水胀破法），植物细胞（洗涤剂和食盐。食盐的作用是溶解DNA，洗涤剂的作用的溶解细胞膜）提取血细胞核物质(蒸馏水涨破)→溶解(2mol/L的NaCl溶液)→过滤(除杂质)→析出(滴蒸馏水，降NaCl溶液浓度至0.14mol/L)→过滤→再溶解(2mol/L的NaCl溶液)→过滤→进一步提纯(体积分数为95%的冷却酒精)→鉴定。提纯环节中还可加入肉嫩粉（木瓜蛋白酶），将滤液放在60～75℃的恒温水浴箱中保温10～15分钟能去除滤液中的杂质要点1、三次过滤

过滤目的第一次过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液获得含核物质的滤液第二次过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液获得含DNA的滤液第三次过滤含黏稠物的0.14mol/LNaCl溶液获得纱布上的粘稠物，其化学本质是DNA2、两次沉淀析出依据的原理第一次DNA在氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/L时溶解度最低第二次DNA在冷却的95%的酒精中能沉淀析出3、两次加蒸馏水加蒸馏水的目的第一次使血细胞破裂第二次降低NaCl浓度使DNA析出4.关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是A充分溶解DNA的盐溶液是0.14mol/L的NaCl溶液B实验中提取较纯净的DNA利用了DNA不溶于酒精的特点C对最后提取出DNA用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热D实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同B6.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是A．洗涤剂能瓦解细胞膜，同时也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度B．在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中，需要控制的变量是洗涤剂和植物细胞C．常温下，DNA遇二苯胺被染成蓝色D．将滤液放在60～75℃的恒温水浴箱中保温10～15分钟能去除滤液中的杂质，其原理是利用了DNA和蛋白质对高温耐受性的不同D7.下列有关“DNA粗提取与鉴定”实验原理的叙述正确的是 （） A．DNA在NaCl溶液中的溶解度，随NaCl溶液浓度的降低而减小 B．利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNA C．DNA是大分子有机物，不溶于水而溶于所有有机溶剂 D．在沸水中，DNA遇二苯胺会出现紫色反应

BPCR技术扩增DNA片段1．原理：DNA复制。

2．条件：模板、原料、酶。

3．场所：体外PCR扩增仪。

4.过程：(1)变性:当温度上升到90℃以上时，双链DNA解旋为单链，(2)复性：温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合(3)延伸：温度上升到72℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，PCR扩增技术和DNA复制的比较细胞内DNA复制PCR不同点解旋解旋酶，边解旋边复制80～高温解旋，双链完全分开酶解旋酶，DNA聚合酶，DNA连接酶TaqDNA聚合酶引物RNADNA或RNA能量ATP不加温度体内温和条件高温细胞内DNA复制PCR不同点子链合成一条链连续(先导链)，另一条链不连续，先合成片段，再由DNA连接酶连接(滞后链)两条子链均连续合成相同点①提供DNA模板；②四种脱氧核苷酸做原料；③子链延伸的方向都是从5′端到3′端PCR技术的应用

PCR技术模拟细胞内DNA的复制过程，实现对某一段DNA的扩增。PCR技术能在几小时内将极微量的DNA特异性地扩增上百万倍，从而有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的难题，大大提高了对DNA分子的分析和检测能力，被广泛地应用于基因克隆、基因序列分析、遗传病诊断、古生物学研究以及刑侦破案、亲子鉴定等诸多方面。考点二血红蛋白的提取和分离

1.凝胶色谱法凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法之一。所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是由多糖类化合物构成的，小球体内部有许多贯穿的通道，当一个含有各种分子的样品溶液缓慢流经时，相对分子质量较大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路程较短，移动速度较快；相对分子质量较小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的通道，通过的路程较长，移动速度较慢。因此，样品中相对分子质量较大的蛋白质先流出，相对分子质量较小的分子后流出。

2.电泳凝胶电泳法的原理是不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速率不同。从而达到对样品进行分离、鉴