犬瘟热诊断技术 编制说明

1犬瘟热（Caninedistemper,CD）是由犬瘟热病毒（Canine2李然栋：青岛巴特菲科技发展有限公司，负责荧光定量RT-PCR3杨珍：青岛海华生物集团股份有限公司，负责荧光定量RT-PCR4RT-PCR检测、病毒分离鉴定、荧光定量RT-PCR检测等方法进行验证，热病毒方面研究颇深。专家就标准的格式排版、主要技术内容细节、5主要内容包括技术指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检验规则等。9OIE发布的《陆生动物诊断试验和疫苗手册》以及《小动物内科学》扩增循环数，Ct值的大小与所设定的荧光阈值有关，也与初始模板定的线性关系。Ct值越小，则代表所检样品的起始浓度量越大。利7Fig1ThefuctionaLmechanismofTaqmanprobe89制备、免疫酶检测、免疫组织化学检测、RT-PCR检测、胶体金试纸Table1.1NGenePrimersandProbeSequencesN-FN-R用公式计算出标准品质粒的拷贝数，重组N基因的质粒总长度为PCR循环进行筛选，退火温度选择从55℃逐渐递增到60℃,筛选出-2-3-2-3-2-3（配方见下表获得外周淋巴细胞。6Table1.2Real-timefluorescencequantitativePCRreactionsystemPrimeScriptRTEnzyme3.2结果与分析Fig1.1RealtimefluorescencequantitativeamplificationcurveFig1.2TaqManfluorescencequantitativePCRamplificationcurvebasedonCDVNFig1.6IntrabatchrepetitionofCDV-NTaqManfluorescentquantitativePCR-2-3-4 Table1.5Batchduplicat质粒稀释倍数Cq1Cq2Cq3Cq4Cq5Cq6CV(%)-2-3-4Table1.4DetectionofLymphocytesinvitrobyCDV-NTaqManfluorescencequantitativePCRassay12456感染组29.8129.8329.8729.7929.78对照组 96孔ELISA板（美国Costar公司iMark酶标仪（北京元业伯乐科技包被液：0.05mol/LpH9.6的碳酸盐缓冲液（Na2CO3：1.59g，2PO42HPO4：对实验室保存的20份阴性血清，按照已确立的ELISA反应条件，检测OD450nm值，计算出20份血清的OD450nm值的平均值X和标准差SD，根100µL，每份血清做2个重复，向其中一个重复的每管血清中加入450nm计算变/样品数[73]。Tab.2.1TheuniformnessofELISAplateABCDEFGHIGKL1234578Tab.2.2Determinationoftheantigencoatingconcentrationandserumdilution+-+-+-+-450nmTab.2.3DeterminationoftheoptimalconditionforcoatingHprotein+ ++450nm Tab.2.4Determinatio Tab.2.5DeterminationofoptimalblockingtimeTab.2.6Determinationofoptimalreactiontimeofsera均值X=0.222和标准差SD=0.056。ELISA阴阳性临界值等于XTab.2.7ThresholdforindirectELISA3456789经抗原阻断的阳性血清OD450nm值比未经Tab.2.8Resultsofblockingtest345Tab.2.9ELISAresultsofintro-batchduplicabilitytest 平均值X123Tab.2.10ELISAresultsofinter-batchduplicabilitytest 平均值X123 Tab.2.11Theresultofs Fig.2.1ThecorrelationofindirectELISAaTab.2.12ThecomparisonofindirectELISA12345ABCDEF免疫学诊断的方法有琼脂免疫扩散试验(AGP)、SPA协同凝集试组化技术、免疫荧光技术(IF)、酶联免疫吸附试验(ELISA)法。其中琼脂免疫扩散试验(AGP