益母草中总黄酮的提取与鉴别

益母草中总黄酮的提取与鉴别

益母草是嘴唇科的一种益母草植物，通常为新鲜或干燥的土壤。原名茺蔚,始载于《神农本草经》,别名鸡母草、红花草、坤草、益母艾,属中药,其味辛、微苦,性微寒,入心包肝经。属一年或二年生草本,高0.6~1.8m;花冠红色或淡红色;小坚果褐色,三棱形生于山野荒地、路旁、田埂、河边,分布于全国各地。益母草全草含生物碱、黄酮、酚类、氨基酸、有机酸、糖类。药理研究证明其具有调经止血,保护心肌缺血再灌注损伤抗血小板聚集,降低血液粘度等作用。在临床上可用来治疗痛经、流产后出血、冠心病、心肌缺血、高黏血症、肾炎水肿、风湿关节疼痛等疾病。益母草具有广泛的药理活性。用本方法研究益母草总黄酮的提取及鉴别未见报道,我们参考文献对益母草总黄酮的提取及鉴别进行了研究。现报道如下。1设备和材料1.1真空干燥箱及离心沉淀器UV-755B紫外线分光光度计(上海分析仪器总厂);DZF——150小型真空恒温干燥箱(郑州长城科工贸易有限公司);80—2离心沉淀器(上海分析器械厂);ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)。1.2材料表面新鲜益母草(采自广西百色)。95%乙酸AR;甲醇CP;三氯化铝CP;氨水CP;正丁醇CP,芦丁标准品(中国生物制品检定所)。2方法和结果2.1工艺路线见图1。2.2滤渣、乙醇法取干益母草83g,切碎置铝锅中,加水煮沸3h。冷却粗滤后,滤液用高速离心机分离15min,1500r/min。对滤渣用上述方法进行再次浸取2次,合并3次滤液,加热浓缩(加热温度在85℃左右)。浓缩冷却后加入等体积95%乙醇,放入冰箱内2h。用高速离心机进行分离15min,1500r/min。过滤得滤液滤渣,弃去滤渣。对滤液进行蒸发浓缩(加热温度在85℃左右)。待乙醇蒸发完后,将浓液置于真空干燥箱中干燥成疏松固体,粉碎得终产物。2.3定性分析2.3.1抗紫外反应取该样品溶液点在滤纸上,在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈棕色并有荧光斑点。2.3.2氨反应取该样品溶液点在滤纸上,将滤纸在氨水上方熏0.5min,立即在紫外光下观察,呈黄绿色荧光斑点。2.3.3三氯化铝反应取样品溶液点在滤纸上,滴加1%三氯化铝乙醇溶液,吹干。在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈黄绿色荧光斑点。2.4黄酮的总含量2.4.1标准曲线的制备2.4.1.乙醇溶液的配制精密称取芦丁对照品200mg,置于100ml容量瓶中,加入95%乙醇溶液并稀释至刻度,摇匀。精密称取10ml置于100ml容量瓶中,加入95%乙醇使成100ml,摇匀即得(每1ml含有无水芦丁0.2mg)。2.4.1.uv-655b-c精密吸取对照品溶液0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0,12.0ml分置于50ml容量瓶中,各加95%乙醇12ml,加10%硝酸钠溶液2.0ml,混匀,放置6min,加10%硝酸钠2.0ml,放置6min加5%氢氧化钠试液20ml,最后用95%乙醇稀释至刻度,摇匀,以第一瓶为空白溶液,用UV-755B紫外分光光度计,在500nm上测定吸光度。见表1。根据上表得一回归方程:A=9.65C-0.0132,r=0.9999(n=6)。2.4.2萃取液的制备精密称定提取物1.5000g置索氏提取器中,加95%乙醇回流至无色,将提取液置于烧杯中,沸水浴加热浓缩至干,再用热水洗涤3次。将洗液滤至分液漏斗中,并加入饱和正丁醇液萃取3次,10ml/次。合并萃取液于小烧杯中,沸水浴蒸干,再加95%乙醇至使之溶解,并移于50ml容量瓶中,再加95%乙醇至刻度,摇匀。精密取10ml于50ml容量瓶中加95%乙醇至刻度摇匀,按标准曲线的制备操作测定吸光度。A=0.149,据A=9.65C-0.0132,计算样品中总黄酮的含量为0.28%。2.4.3回收实验精密称提取物1.2320g,加入芦丁对照品1.9506g,同前样品测定方法操作测定吸光度,求出回收率为98.6%。3全物理过程法实验结果表明利用本文所提