ph示差法测定桑椹红色素中花青素的含量

ph示差法测定桑椹红色素中花青素的含量

1配糖体化合物的结构桑蚕红素属于纯水性朝花，具有含青草素的化学结构。花色苷是以黄酮核为基础的能呈现颜色的一类糖苷,天然花色苷配糖体的基本结构为3,5,7-三羟基-2-苯基苯并吡喃,由于苯环中取代羟基和甲氧基的位置数量的不同,衍生出6种配糖体化合物,分别为天竺葵花素PG(草莓,萝卜皮),矢车菊花素CY(苹果皮,桑椹),飞燕草色素DP(茄子,石榴),芍药花色素PN(芒果,樱桃),矮牵牛花素PT(葡萄皮),锦葵花色素MV(葡萄皮)。配糖体上的羟基以糖苷键形式与糖结合便形成花色苷。花色苷存在于植物花朵、根茎、浆果中,常用于果酱、果汁、果冻、冰淇淋的着色。目前对花青素的定量没有较好的方法,常用的方法是以色价或吸光度表示其相对含量。也有用花青素纯品配制不同浓度梯度制作标准曲线测定色素的含量,但由于花青素的标准品很不稳定,限制了这种方法的使用。本文用pH示差法,对桑椹中的花青素进行了定量分析。2-测量黑莓红色素中的蓝色素含量的ph显示2.1最佳ph的确定花青素的色调和色度随pH值的不同而发生改变,而干扰物质特征光谱不随pH的改变而改变。pH为1时,花青素以红色的2-苯基苯并吡喃的形式存在,pH为4.5时,花青素以无色的甲醇假碱的形式存在。结合朗伯-比尔定律可得出,在两个不同的pH值下,花青素溶液的吸光度的差值与花青素的含量成比例。大多数水果中不止含有一种花青素,而且每种花青素的消光系数都有稍微差别,所以测定的结果就取决于所选用的标准。桑椹红色素主要成分为矢车菊花素-3-葡萄糖苷(Cyd-3-glu)。据文献报道,纯矢车菊花素-3-葡萄糖苷在pH1的缓冲溶液中的消光值如表1:2.2实验2.2.1仪器、试验设备722光栅分光光度计:上海第三分析仪器厂;LG10-2.4A离心机:北京医用离心机厂;旋转蒸发器RE-52A:上海亚荣生化仪器厂;SHB-3循环水多用真空泵:郑州杜甫仪器厂;LYO-Ⅰ型冻干机:东富龙有限公司;电子天平(JA5003):上海精称天平;PHS-3C型精密pH计:上海雷磁仪器厂;层析柱(ф1.5×30cm):西安天星化玻仪器有限公司;AB-8树脂:天津南开达大学化工厂;桑椹原汁。2.2.2kcl-l盐混合体系pH1.0的缓冲液:准确称取1.49gKCl用蒸馏水定容至100mL。准确量取1.7mL盐酸(分析纯)用蒸馏水定容至100mL,配成0.2mol/L盐酸溶液,将KCl溶液与盐酸溶液以25∶67的比例混合。用KCl溶液调pH(1.0±0.1)。pH4.5的缓冲液:准确称取1.64gNaAc用蒸馏水定容至100mL,用盐酸调pH(4.5±0.1)。2.2.3ph对动态平衡的影响因为花青素在溶液介质中存在4种结构形式,这4种结构形式在某一pH下处于动态平衡,当pH改变时,动态平衡发生转移,总的趋势是pH降低时,平衡向红色的2-苯基苯并吡喃阳离子移动,pH升高时,平衡向蓝色的醌式移动,一定时间后达到一个新的平衡。因此色素溶液用缓冲液稀释后,必须静置一段时间,等动态平衡处于稳定后,才能测吸光度值。2.2.4中色光刻的制备2.2.4.1.提取色素的方法桑椹原汁→离心→上清液→大孔吸附树脂→蒸馏水冲洗→酸性乙醇洗脱→低温减压浓缩→冷冻干燥→成品。2.2.4.桑虾汁吸附桑宏观温度选择AB-8树脂装柱,50℃,pH2.00,桑椹汁糖度为4°Bx的条件下吸附。pH1.5,50%的乙醇室温条件下洗脱。本方法产品得率为0.88%,色价为38.9。2.2.5不同缓冲液对样品质的测定准确称取0.1g色素产品,先用稀醇溶解,用蒸馏水定容至100mL。分别移取10mL样液2份,分别用pH1.0、pH4.5的缓冲液定容至100mL。达平衡后,分别测定吸光值。2.2.6日本pcr测定葡萄糖苷的u-pb花青素含量(%,w/w)=(A/εL)×MW×DF×V/Wt×100式中:A──吸光度;ε——矢车菊花素-3-葡萄糖苷的消光系数,26900;DF──稀释因子;MW——矢车菊花素-3-葡萄糖苷的分子量,449.2;注:一蒸馏水作参比;用A700nm来消除样液混浊的影响。2.3结果与讨论2.3.1样液的吸光值随时间的变化由表2可知,在pH1.0的缓冲液中,样液的吸光值随时间的延长而增大,50min时达平衡;在pH4.5的缓冲液中,样液的吸光值随时间的延长而增大,80min时达平衡。所以,平衡时间为80min。2.3.2测定了蓝色信号的含量2.3.2.1.产品中花青素含量的测定由表3中的数据