中药鉴别的历史发展

中药鉴别的历史发展

中医药是中国人民几千年来疾病防控过程中积累的宝贵财富。从中药用于人们防病治病开始,中药的真伪问题便随之而产生,中药鉴别的方法、技术和理论也随之经历了一个形成、发展、不断完善和不断提高的过程。尤其是在当前中药正面临走向世界和实现中药现代化的新形势下,加强中药的鉴别研究乃是确保中药原药材和制剂质量可靠,确保中药现代化及其它各项研究工作顺利进行的首要环节。下面就我国中药鉴别研究的发展和现代鉴别技术作简单介绍。1相关学科不断发展的是一个不断发展的过程,一个过程是一个过程,一个过程一个过程,一个过程一个过程,一个过程中药鉴别研究的发展是随着中药事业的不断发展,随着相关学科的不断发展而经历一个由简单到复杂,由主观到客观,由浅显到深入、全面综合的过程。1.1中药鉴别类著作这是中药的形成和发展期,自最早的《神农本草经》至清朝的《植物名实图考长编》,每一部本草均有大量关于中药鉴别的记载,其中宋朝苏颂的《图经本草》,明朝陈嘉谟的《本草蒙筌》、李时珍的《本草纲目》、李中立的《本草原始》,清朝郑天岩的《伪药条辨》等著作更是重视中药鉴别的佳作。这一阶段的鉴别研究特点是以人的经验鉴别为主,即以药材的形状、大小、颜色、气、味、表面特征、质地、断面等判别药材的真伪,对部分药材,还辅以简单的理化试验,如火烧试验、沉水试验等多种方法,具体叙述如下:1.1.1鸡骨多肽产品目录2利用外观包括形状、大小、颜色、质地、表面特征、气味等作为鉴别药材的依据,这是最常用的鉴别方法。(1)形状:如鉴别太子参(RadixPseudostellariae),李时珍谓:“其形似人形者,谓之孩儿参”。鉴别川乌(RadixAconiti),吴普谓:“乌头,形如鸟之头也”。(2)大小:苏颂谓大黄(RadixetRhizomaRhei):“大干乃佳……根如芋,大者如碗,长一二尺”。苏恭谓白头翁(RadixPulsatillae):“实大者如鸡子,白毛寸余”。(3)颜色:鉴别白芍(RadixPaeoniaeAlba)时,马志谓:“有赤、白两种,其花亦有赤白二色”。《名医别录》载黄连(RhizomaCoptidis):“其连珠而色黄,故名”。李时珍谓阿胶(CollaCoriiAsini):“当似黄透如琥珀色,或光黑如瑿医漆者为真”。(4)质地:《神农本草经》载常山(RadixDichroae):“细实黄者,呼为鸡骨常山,用之最胜”。(5)气味:鉴别荜茇(FructusPiperisLongi),李时珍谓:“气味正如胡椒”。对于鱼腥草(HerbaHouttuyniae),李时珍又谓:“其叶腥气,故俗呼为鱼腥草”。1.1.2刮指评估利用手指甲刮刻药材以进行鉴定,如对于海螵蛸(OsSeplae)的鉴别,李时珍谓:“两头尖,,……”。1.1.3透甲黄的鉴别利用药材在指甲上所染的颜色对药材进行鉴定。如对于牛黄(CalculusBovis)的鉴别,苏颂谓:“然人多伪之,试法但揩摩手指甲上,透甲黄者为真”。这是最早的“挂甲试验”记录。1.1.4照明试验方法1.1.5谓虫、事物纹对肉豆蔻(SemenMyristicae)的鉴别,李时珍谓:“外有皱纹,而内有斑缬,纹如槟榔纹”《本草汇编》谓虫白蜡(CeraChinensis):“碎之,纹理如白石膏而莹彻”。苏颂谓木瓜(FructusChaenomelis):“始实成则镞纸花粘于上,夜露日烘,渐变红,花纹如生”。苏颂谓大黄(RadixetRhizomaRhei):“以蜀川锦纹者佳”。1.1.6青莎、熊胆的鉴别对郁金(RadixCurcumae)的鉴别,李时珍谓:“人以浸水染色,亦微有香气”。对于不同质的乳香(Olibanum)的鉴别,李时珍谓:“次为水湿塌,水渍色败气变者”;对于青黛(IndigoNaturalis)的鉴别,李时珍又谓:“以蓝浸水一宿,入石灰搅至干下,澄去水,则青黑色”。《唐本草》载熊胆(FelUrsi)的鉴别:“然多伪者,但取一粟许滴水中,一道若线不散者为真”;李时珍谓:“熊胆佳者通明。每以米粒点水中,运转如飞者良。余胆亦转,但缓尔”。《名医别录》载寒水石(Calcitum,GypsumRubrum):“折片投水中,与水同色,其水凝动”。1.1.7香港特区liagumaquelilihae利用药材在水中的沉降性质来进行鉴定。沈怀远《南越志》载沉香(LignumAquilariaeResinatum)云:“坚黑沉水者,即沉香也。半浮半沉与水面平者,为鸡骨香。细枝坚实未烂者,为清桂香”。1.1.8对大血藤、指牛的鉴别用酒来浸泡药材,观察颜色等来进行鉴定。如对于大血藤(CaulisSargentodoxae)的鉴别,吴其浚的《植物名实图考》载:“酒浸—宿红艳如血”。1.1.9粗廉之家民硝李时珍谓芒硝(NatriiSulfas):“生于盐卤之地,状似末盐……煎炼入盆,凝结在下粗朴者为朴硝,在上有芒者为芒硝,有牙者为马牙硝”。《名医别录》载寒水石(Calcitum,CypsumRubrum):“研末,煮汤入瓶,倒悬井底,即成凌冰”。1.1.1信石、石膏、gypsumfibrom《海药本草》载降香(LignidalbergiaeOdoriferae):“其香似苏方木,烧之初不甚香,得诸香和之则特美”。对蜂蜜(Mel)的鉴别,李时珍谓:“凡试蜜以烧红火箸插入,提出起气是真,起烟是伪”。对于信石(ArsenicumSublimatum)的鉴别,苏颂谓:“将生砒就置火上,以器覆之,令烟上飞,着器凝结,累然下垂如乳尖者入药为胜”。对于石膏(GypsumFibrosum)的鉴别,李时珍谓:“石膏有软硬二种。软石膏……松软易碎,烧之即白烂如粉”。吴普谓硫磺(Sulfur):“烧令有紫焰”。《神农本草经》载硝石(NatriiSulfas):“以火烧之,紫青烟起”。陶弘景谓琥珀(Succiinum):“烧之亦作松气”。《唐本草》谓苏合香(Styrax):“烧之灰白者好”。1.1.11.焊接试验《本草汇编》载虫白蜡(CeraChinensis):“以水煮熔,虑置冷水中,则凝聚成块亦”。1.1.12-识别标记1.1.13.声音识别对于浮海石(Pumex)的鉴别,《本草衍义》谓:“以指撩之,铮铮有声,此石花(浮海石)也”。1.1.14.摩擦和静脉识别1.1.1便枝的传统“去青色”观对于秦皮(CortexFraxini)的鉴别,苏恭谓:“取皮渍水便碧色,书纸看之皆青色者,是真”。此为历史上最早观察荧光现象应用于鉴别药材的记载。而欧美直到十九世纪中叶以后才开始注意荧光现象的应用,比我国迟了1200年。1.1.16使用粘合剂丝识别1.1.17次打击1.21化学鉴别法的初创期1838年法国学者Schleiden阐明了细胞是植物体构造的基本单位以后,显微镜就被用来研究生药的内部构造,根据显微构造的不同来鉴别各种生药。1857年Schleiden发表了“GrundnissderPharmakognosiedesPflanzenreiches”(《植物性生药学基础》)一书,其中描述了许多植物性生药的显微构造,其后Berg于1865年,Vogl于1887年先后发表了生药解剖图谱,于是利用显微镜来鉴定中药的方法得到了进一步的发展而成为生药鉴定的重要手段之一年赵遹黄徐伯軻等编著了我国第一部介绍近代中药学的著作现代本草学—生药学》上册,1937年叶三多编著《生药学》下册,这两本书首次将显微鉴别技术介绍到我国,并很快在国内推广和不断完善成为中药鉴别的重要手段。18世纪中叶瑞典博物学家林奈(CarlLinnaeus)在他的三部著作《自然系统》、《植物志属》和《植物种志》中记述了大量的植物的种和属的特征,创立了一个完整的植物分类系统和植物的科学命名法(即林奈双名法)。此后植物自然分类系统不断完善,1859年达尔文(CharlesRobertDarwin)《物种起源》的发表,更加推动了植物亲缘关系的研究和建立更完善的植物自然分类系统。目前较有影响的植物自然分类系统有Engler系统和Hutchinson系统。本世纪30年代赵遹黄等学者利用现代植物分类学的知识,对本草进行研究整理,为我国中药学基原鉴定打下了良好的基础。此后裴鉴的《中国药用植物志》第一册(1939年),王声道的《药用植物图考》,沈嘉微的《中国药物形态学》,顾学裘的《生药学》,李承祜的《药用植物学》等均是应用现代植物解剖学植物分类学,中药学的知识对本草进行整理研究的佳作。1803年法国Derosne等在天然药物中发现了生物碱成分,1806年德国学者Sertǜner从阿片中提出了吗啡纯碱,此后开始了生药有效成分的研究。利用生药中所含的化学成分的某些理化性质进行鉴别也是在这个时期发展起来的。1933年丁福保先生著《中药浅说》,首次引进化学鉴别法,从而促进了化学鉴别法在中药鉴别中的应用。由于中药中的有效成分是其药效的物质基础,因此通过有效成分的鉴别将直接和药效相关,化学鉴别法不但能辨明中药材的真伪,还能区分优劣,故化学鉴别法很快在中药鉴别中占有一席之地。这个时期,由于物理学、生物学等相关学科的发展,使比重、旋光度、折光率、荧光分析和色层分析等方法相继引入中药鉴别中,奠定了中药理化鉴别的基础。至本世纪50年代,中药鉴别研究中较为全面的“四大鉴别法”已确立起来,并为1953年的药典所采用,为确保中药质量起到了十分重要的作用。下面详细介绍基原鉴别、性状鉴别、显微鉴别和理化鉴别方法的内容和应用。1.2.1基本起源标记即中药的原植(动)物鉴定,是应用生物分类学的知识和方法,鉴定每一种中药的生物学来源,确定其正确的学名,这是中药鉴定工作的基础。1.2.2中药、饮片鉴别法性状鉴别就是运用看、摸、闻、尝及水试、火试等直观的方法,对中药的性状,包括形状、大小、色泽、表面、质地、断面、气味等特征进行观察作为鉴别的依据,它是我国中医药工作者长期积累的丰富经验的总结,具有简单、快速、直观的优点。性状鉴别主要是观察完整的中药及饮片。水试法是利用中药在水中发生浮沉溶解、颜色变化、透明度、味甜辣、膨胀度、旋转性、粘性、酸碱变化等现象进行鉴别;火试法是利用中药受火燃烧后发生的颜色、烟雾、响声、膨胀、熔融聚散等现象进行鉴别,如红花浸入水中,水变金黄花不褪色,苏木投热水中,水显鲜艳的桃红色。1.2.3显微观察方法显微鉴别是利用显微镜来观察药材的组织构造,细胞形状以及内含物的特征,用以鉴定药材真伪、纯度甚至品质。通常应用于单凭性状不易识别的药材、破碎药材、粉末药材以及丸、散、膏、丹等中药成方制剂。显微观察主要包括横切片或纵切片观察、表面片观察、粉末观察、解离组织观察、显微测定、偏振光显微镜观察等几个方面。中药丸、散、膏、丹等成方制剂,大多直接用各种中药粉末配制而成,因此可应用粉末鉴定的方法进行鉴定;用药材浸膏制备的浓缩丸剂、片剂、颗粒剂、冲剂等,因浸膏中残留有药材的细胞、组织碎片及其它微细特征,显微鉴定对此也有一定的应用价值。鉴定时,根据处方和显微观察,选取足以说明在成药中是该药所专有的特征,作为鉴别依据。1.2.4化学成分鉴定是利用中药所含化学成分的某些物理性质或化学反应对中药进行定性和定量分析,一般应用于含不同化学成分的性状相似而又无明显显微鉴别特征的药材。树脂类中药,虽来源于植物,但由于多取其分泌物或经加工提取的产物,故有关植物的组织特征多已不存在,所以显微鉴别和原植物鉴别不适用,而理化方法则是鉴别这类药材的理想方法。1.32中药鉴别是一种丰富的、可扩张性的中药鉴别方法,主要体现在20世纪20世纪20世纪20年代中期、20世纪20世纪40年代中期的中国规划设计、20世纪20世纪2020世纪的中国鉴定”中,有利于中药走向世界在堪称知识爆炸的年代,由于物理、化学、生物学和计算机的加速发展使仪器分析的手段不断更新,紫外、红外、气相、高效液相、核磁共振、扫描电子显微镜、计算机图像分析、各种电泳、同功酶分析法、分子生物学技术、X射线衍射技术、差热分析技术、聚类分析法等均被吸收到中药鉴别的方法中,大大丰富了中药鉴别的内容,形成了以“四大鉴别法”为基础、以理化分析为重点、逐步适应中药现代化并有利于中药走向世界的一套更为科学、完善、先进的中药鉴别体系。2现代评估方法的介绍2.1中药鉴别色谱法是在20世纪初产生,于60年代开始用于中药分析,经逐步完善最后列入1977年版中国药典,且在以后各版药典的中药和成方制剂中的应用比例迅速上升,成为中药鉴别最主要的方法之一。色谱法根据离方法分为:纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法。2.1.1薄层层析分离法此法具有快速、经济、可靠、操作简单、适用范围广、重现性好等优点,为国内外学者最快接受和广为应用是理所当然的。在中药新药研制中,几乎所有的新药都必须提供薄层层析谱,并需附有标准品或阴阳药材对照的彩色照片。在实际的薄层层析鉴别中,有时因中药的成分性质相近而难以分开时,还可采用高效薄层层析法(HPTLC)。该方法是采用更细更匀的吸附剂,因而提高了分离效果,使斑点小而圆,重现性增强。同时点样量也可减少到0.1μl以下,使原点直径控制在1mm内,展开时间缩短,展距缩小(3～7cm/10～15min),达到微量、快速和高效的目的。为使薄层层析的结果更为直观,可将经溶剂展开的薄层板置薄层扫描仪上作可见光-紫外光测定或荧光测定。这种用固定波长对薄层展开的各斑点作薄层扫描,以鉴别药材的方法称为薄层扫描法(TLCS)。本法所得图谱比目测的层折图谱更为客观准确,因而具有更好的鉴别意义。如李信炯用此法进行数种黄连(RhizomaCoptidis)的生物碱的薄层扫描时发现云连中不含有表小檗碱和非洲防己碱,可资鉴别。2.1.2在南、北药中的应用HPLC法由于具有分离效能高,分析速度快等优点,近期已广为普及用于中药的定量分析,在中药的定性鉴别中亦能发挥很好的作用,如童玉懿等用此法对我国主要产区的南北五味子中的木质素作了定性分析,结果表明,南、北五味子的高效液相图谱有明显的区别。用此法进行中药鉴别时,为不使层析柱被中药粗提液中大量的杂质成分污染而损坏,必须在进样前对提取液进行去除杂质、保留待测的一类成分的预处理,这一操作必须化费较多的分析时间,这一缺点是导致此法较少用于定性分析的主要原因。2.1.3gc/ms定性鉴定气相色谱法以气体为流动相,具有高效、高选择性、高灵敏度、用量少、分析速度快等优点,对于一些具有挥发性成分的中药的鉴别,GC能发挥独特的优点。如将气相色谱与质谱联用(GC/MS),将经气相分离的成分直接输入质谱仪进行定性鉴定,这样不但可知道不同中药中挥发性成分的差别,尚可知道两者相同或相差的成分名称。如归氏等通过GC/MS分析,得砂仁(FructusAmomi)伪品华山姜所含樟脑、乙酸龙脑酯仅为正品的1/10,山姜不含此2种成分,含1,8--桉油素高达48%,以此可将三者相区别。GC和GC/MS用于中药鉴定时,特别要考虑到含挥发性成分中药取样的影响因素,以便使实验结果更为稳定可靠。2.2光谱法选择某一波段波长,以此通过中药的粉末或提取液,测定中药对这一波段波长的吸收并记录其吸收光谱,此为光谱鉴别中药的原理。2.2.1紫外光谱法该法是依据中药中一些含有不饱和结构的成分对紫外光(通常是200～350nm)有吸收而用于鉴别。由于不同中药所含成分的不饱和程度有差异,因而导致其紫外吸收曲线的形态、峰位、峰强度亦有差异而以此达到鉴别的目的。高文博用此法对天麻(RhizomaGastrodiae)、大黄(RadixetRhizomaRhei)及其伪品进行鉴别获得了满意的结果。由于许多中药均有不饱和成分,且紫外光谱鉴别法具有操作简单、快速、重现性好、用量少等优点,故目前应用十分广泛。多溶剂紫外光谱法:在使用紫外光谱鉴别中药时发现,一些亲缘关系较近的药材,由于成分相差不大,用通常的紫外光谱法难以达到鉴别的目的,则可采用多溶剂紫外光谱法,即分别检测数种不同极性溶剂提取液的紫外吸收,通过综合比较其图谱的差异,亦可获得较好的鉴别效果。张振秋等采用水、乙醇、氯仿、石油醚等四种溶剂鉴别蝉蜕(Pe-riostracumCicadae)等虫类药材,郭澄用多溶剂紫外光谱法鉴别七种菟丝子(SemenCuscutae),结果均较理想。2.2.2导数光谱法比色法对于通常的紫外光谱法较难区别的检品,可采用对其吸收光谱(原函数)的一阶、二阶、三阶等导函数的图像(即导数光谱图)进行比较,本法可消除样品中的一些无关吸收,排除原图谱中的某些干扰,从而达到较好的鉴别效果。导数光谱法具有简易、快速和准确的优点,它不但适用于紫外光谱,也可应用于可见光的吸收光谱。李同芬应用此法对银柴胡(RadixStellariae)及其混淆品进行鉴别,结果理想。2.2.3红外图谱测定法红外光谱属于分子吸收光谱。中药的红外光谱图反映的是被测中药所含组分在红外光区域内(通常使用4000cm-1～666cm-1),总体官能团吸收的叠加。实验采取对药材检品粉末或提取物直接压片测定其红外光谱,比较其差异而达到鉴别的目的。本法在中药鉴别中具有制样简单,实验快速和图谱具有“指纹性”等优点,故应用较广。田进国等用此法对部分植物药和矿物药材进行了反复的比较研究,获得了重复性好,且可适用于鉴别的图谱。2.2.4荧光扫描图检测中药所含的某些成分在紫外光照射下,吸收一定波长的光能后,又发射出比吸收光的波长更长的光,即荧光。用荧光分析仪记录在特定波长照射下各中药相同溶剂的提取液发射的荧光光谱,并比较其区别,也可达到中药鉴别的目的。孙文基用此法鉴别中药沙苑子(SemenAstragallComplanati)及其伪品获得满意的结果。另外荧光法和薄层法相结合,即将中药提取液先经薄层展开,再将薄层板置于365nm或254nm波长荧光灯下观察,比较其斑点荧光的颜色和展开距离,或将薄层板置于薄层扫描仪内用适当的激发和发射波长进行扫描,可以得到各中药的荧光扫描图用于鉴别。这类方法对于一些含有能发射荧光成分的药材尤为适用。2.2.5核磁共振谱的建立核磁共振谱类似于红外和紫外光谱,是另一种形式的吸收光谱。在无线电波(波长10cm～100m)照射下,中药成分的溶液中某些特定元素(通常选用H)的原子可以吸收电磁辐射,以吸收频率为横座标、峰强度为纵座标作图,即得该物质的核磁共振谱。考虑到中药中的组分太复杂,通常选用某一溶剂的特征提取物进行分析,获得该中药的HNMR指纹图。秦海林等研究了人参(RadixGinseng)、天麻、黄连及其易混药材的核磁共振指纹图谱,表明本谱具有高度特征性和重现性,可以达到药材鉴别的目的。2.2.6中药中化学成分的提取质谱是指物质的质量谱,它和上述光谱的原理有本质区别,鉴于习惯的原因,本文仍放入光谱法中叙述。将中药提取液置质谱仪中进行电子轰击电离,可获得提取液中化学成分的EI-MS图,不同中药提取液所含成分不同,所得质谱图所显示的分子离子基峰及进一步的裂解碎片峰亦不一致,可资鉴别。梁惠玲等对中药天麻及其伪品进行了EI-MS分析,获得了满意的鉴别效果。本法具有准确、灵敏和指纹特征性强的优点,然本仪器尚不普及,实验时对提取液中主要成分的含量要求较高,实验费用亦较大,能否作为常用的检测方法尚待继续探索。2.3衍射法的优越性X射线衍射法是研究物质的物相和晶体结构的主要方法。当对某一物质进行衍射分析时,该物质被X射线照射而产生不同程度的衍射现象,物质的组成、晶型、分子内成键方式、分子的构型、构象等将决定物质产生特有的衍射光谱,如果该物质是一混合物,则所得衍射图是各组分衍射效应的叠加。只要混合物的组成是恒定的,这衍射图就可作为这混合物的特征图谱。由于衍射法获得的图谱信息量大,指纹性强,稳定可靠且可以记录,因此我们便可以此作为该物质定性鉴别的可靠依据。如张汉明用此法对天麻及其伪品,何首乌(RadixPolygoniMultifloria)及其易混品,巴戟天(RadixMorindaeOfficinalis)及其易混品以及部分中成药进行了分析,获得较好的鉴别效果。该法的优点是样品用量小,测试后样品不会被破坏,操作简单,判别指标多(衍射图、D值和相对强度等),结果稳定、客观,图谱指纹性强,还可直接检出物质名称,故此法对于结晶度较强的矿物类药和部分动植物类药的鉴别分析特别适宜。然而,本实验所需的衍射分析仪器尚不普及,某些植物药中的淀粉、纤维和树脂等成分结晶度低而干扰较大,有时影响结果判断。在进行衍射分析时,由于每一中药含有许多成分,每一成分通常均有许多衍射峰,各衍射峰又因其晶面间距相同而产生相互叠加最后获得的衍射图会因各组分衍射效应的叠加而使衍射图显得较为复杂从而给药材鉴别带来一定的困难。为此,吕扬等在将衍射信息进行傅里叶变换的基础上,找出图形的拓扑规律,从而可获得每一中药的较为简单且又能反映药材整体结构特征的图谱。2.4热谱分析法许多物质在加热或冷却过程中,往往会发生溶解、凝固、分解、化合、吸附、脱吸附、晶型转变等物理或化学变化,这时就会产生吸热和放热现象,研究测定这种变化的技术即为热分析技术。按分析内容可分为:热重量法(热量法TG)、差示热量分析法(差热分析法DTA)和差示扫描量热法(差动法DSC)。在中药的鉴别分析中,差热分析法最为常用。差热分析法是研究样品及参比物在相同环境下等速加温时,两者的温度与时间或与加热温度的变化关系的方法。分析的结果用热谱图表示,比较两者热图谱的差异,以达鉴别中药的目的。该法样品用量少,只需数毫克或数十毫克,故对贵重药材尤为适宜。且操作简便,图谱直观、稳定、重现性好、适用范围广(植物药、动物药、矿物药均可),对于矿物药的鉴别结果尤为满意。热分析法已解决了较难鉴别的珍珠粉(Margarita)、珍珠层粉和其伪品的鉴别和掺伪问题,值得推广应用。2.5中药生物技术鉴定的应用分子生物学技术是目前生命科学中最重要最先进的技术,已广泛应用于生命科学的各个领域,近几年来,该法亦已被引入中药鉴别研究。众所周知的生物的性状是依靠DNA遗传给后代的,不同种的生物,甚至同种不同居群的植物,其DNA序列均不相同,这为用DNA分析技术鉴定中药提供了可能。依靠目前的生物技术,已能从生物中提取微量的DNA,并采用多聚酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)测定DNA序列的差异,进行生物鉴别。在中药鉴别中更为适用是采用随机扩增多态DNA法(randomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD)而达到对动植物药材鉴别的目的。ShawP.C用AP-PCR和RAPD技术成功鉴别了人参等3种中药;张荣用RAPD技术成功鉴定了木蓝属8种中药。应用生物技术鉴定中药的研究工作发展很快,已显示出该法具有灵敏度高,特异性强的优点。然而本方法仍受到实验仪器不够普及,操作尚未规范化,结果易受外界条件和主观判断的影响等问题,相信经过不断的摸索和完善,可成为动、植物类中药的较好鉴别方法之一。2.6小球物理鉴定用光学显微镜鉴别中药的组织和粉末已是十分成熟的技术。然而由于光学显微镜的分辨率最高只能达到0.27μm,对于诸如细小的果实、种子、孢子和花粉类药材的表面所具有的细微特征却难以鉴别,扫描电子显微镜的分辨率较光学显微镜高数万倍,且观察时立体感强,样品制作较简单,在细小药材以及叶类药材的鉴别上起了较大的作用。宓鹤鸣用SEM对16种紫珠叶(FoliumCallicarpaePedunculatae)表面特征进行分析,达到了较好的鉴别效果。2.7对花粉粒的显微图像分析,可将花粉图像分析是近20年来兴起的一门新技术,它可将不同层次二维图像用计算机进行处理,获取此图像的三维定量数据。在中药鉴定方面,它可将果实、种子、花粉或组织切片中的某一特征的形态用计算机进行处理,比较其形态差异,从而达到鉴别的目的。秦路平等用此法对蛇床子属果实和22种花类中药的花粉进行了计算机图像分析测定,精确测定花粉粒的直径、周长、截面积、体积、形状因子和不规则参数等形态学参数,为花粉类药材的鉴别提供了精确的鉴别资料。肖小河等对麦冬(RadixOphiopogonis)和山麦冬(RadixLiriopes)进行连续切片,获得各个截面及各种特征组织的显微图像信息,经采用计算机图像处理和图像生成技术,实现了2种麦冬的三围重建图。该图不但能反映2种麦冬的区别,而且图像形像直观,富有生动性和立体感,还能在计算机或大屏幕上显示,对教学尤为适宜。在计算机迅速发展的时代,这一方法具有一定的特点和推广的价值。2.8聚丙烯酰胺凝胶电泳法带有电荷的粒子在电场中随缓冲液定向泳动的现象称为电泳。依据中药中的一些带电荷的成分如有机酸、蛋白质、多肽、氨基酸、生物碱和酶等在一定强度的电场中,在相同的时间内,因各中药所含成分的电荷性质(正电和负电)、电荷量和分子量等不同,造成各成分的泳动方向(向正极或负极)、速度和距离等也不同,结合谱带条数和染色结果的不同从而达到鉴别中药的目的按电泳操作中支持物的不同可分为纸电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳、醋酸纤维薄膜电泳等。其中聚丙烯酰胺法在中药鉴别中较为常用,该法所需实验设备简单,专属性强,灵敏较高。电泳法对含多肽和蛋白质类成分有差异的中药鉴别有较突出的优势,然而本法结果较易受实验条件的影响,故必须严格把握实验条件的一致性。80年代由Jorgenson等首创的毛细管电泳(CE)对常规的电泳分析技术作了重大改进。本法以高压电场为驱动力,以毛细管为分离通道,依据样品中各组分之间的淌度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术。该仪器由高压直流电源、进样装置、毛细管和检测器组成,在样品分析中具有灵敏度高、柱效高、分析速度快、进样量少等优点。自问世十几年以来,该法发展极快,已经有毛细管区带电泳(CZE)、胶囊电动毛细管电泳(MECC)和等速毛细管电泳(CITP)等多种分离模式,可对动(植)物类药中多类成分进行分析。此法在中药的定性和定量分析中已广为应用,也是中药鉴别的一种值得推广的方法。张朝晖等用高效毛细管电泳(HPCE)法对12种海马(Hippocampus)、海龙(Syngnathus)类药材进行鉴别,胡平等用HPCE法鉴别了中药菟丝子(SemenCuscutae)13个样品,结果与扫描电镜法和显微鉴别法的结果相一致。2.9统计分析方法中药是由多类成分组成的复合体,每一类成分又常由数十种结构近似的成分组成,同属不同种的成分又极其类似,往往使用单一的仪器测定,很难找出他们的明显区别点。随着近代统计学学科的飞速发展,一些统计学的方法亦被引入中药分析,将中药经观察和测定的大量数据,按一定的理论进行统计分析,从而求其差异。尤其是计算机学科的发展,可将复杂的统计学的计算简单化,从而方便地达到分类鉴别的目的。聚类分析法(CA)在多门学科中应用较广,它可对一些观察对象(样品)依据某种特征加以归类分析,将性质相近的归入同一类,将性质差别比较大的分在不同的类,从而达到鉴别的目的。苏薇薇等将10个不同产地的黄芩(RadixScutellariae)样品进行薄层色谱分析,然后将薄层色谱反映出的化学成分定性差异按数量化特征矩阵排列,并进行聚类分析。本法不但能鉴别正品和非正品黄芩,还能了解非正品与正品黄芩的差异程度。主成分分析(PCA)法是将中药提取液的UV、TLC或HPLC的定量数据,选用Shannon等信息理论进行特征选取,通过适当的数学变换寻求主成分,并分析各样本的差异。曾明等用此法对葛属9种2变种共20个不同产地的样品进行研究,为葛属植物的分类和他们药材质量评价提供了科学依据。2.10电铬ea2.10.用示波图形结合两种方法对于小球物的检测,其符合以下5个月和10中药提取液中所含的化学成分,有的是电活性物质,利用示波极谱滴定仪可测得其dE/dt-E曲线,根据被测物在dE/dt-E曲线上出现切口或消失,图形的位移或扩散的示波极谱法,用于药物分析已显示出其装置简单、操作方便、准确直观和省时快速等优点。刘英华等获得6种贝母(青贝母、浙贝母、东贝母、一轮贝母、土贝母,光慈菇)的示波图形。青贝母、光慈菇、土贝母、一轮贝母完全可从图形上分辨开。浙贝母、东贝母图形相似,可借颜色反应进一步验证。提取所用的溶剂对实验结果也有较大影响:贝母的水、酸、乙醇提取,其酸浸液灵敏度高,而且酸浸液稳定,不易变质。经16个月避光储存再测,其切口图形位置均无改变。钟世昌等用示波极谱法鉴别草豆蔻(SemenAlpiniaeKatsumadai)及其混淆品种云南草蔻和南宁草蔻。实验结果提示:在pH4.5的NH4OH-HOAC缓冲溶液中利用草豆蔻挥发油成分中的电活性物质在dE/dt-E曲线上产生切口和示波图形的不同进行鉴别。同时证明,就草豆蔻而论,如不出切口,它也就无药用价值了。2.10.两性电解质分子动物、植物性来源的中药常含各种类型的蛋白质。蛋白质分子中虽然大多数氨基和羧基以肽键相连,但仍有一定数量自由的氨基和羧基以及酚、巯、胍和咪唑基等酸碱基团的存在。由于蛋白质和氨基酸都是两性电解质分子,当其水溶液达某一pH值时,蛋白质分子所带的正负电荷正好相等,在电场中即不向阴极也不向阳极移动,此时溶液的pH值为该蛋白质分子的等电点(PI)。徐康森等用改进的蛋白质等电点法检测纯驴皮胶、猪皮胶、黄牛皮胶、水牛皮胶、杂皮胶、明胶、辅料、商品阿胶及伪胶的等电点,计41批。实验结果表明,其方法简便实用,结果准确、可靠,误差甚微,相对偏差小于1.0%。经对纯驴皮胶与其它各种胶测得的等电点进行显著分析,证明其等电点均值的差别(P<0.01)有非常显著的意义。本实验为含蛋白质类药材的真伪鉴别及内在质量的研究提供了一个切实可行的质控指标。2.11依据元素含量和测定扫描线的方法进行分析X射线荧光光谱法是经X射线荧光光谱仪定性扫描,对样品进行无损伤性分析。方法是将样品放入X射线荧光光谱仪中,作定性扫描常规测试,从定性扫描图上可观察到含有元素的种类,然后根据元素含量和定性扫描图所示各种元素分析线的强度,作定性、定量分析。孙家美等用本法对穿山甲(SquamaManitis)鳞片进行分析,表明穿山甲鲜片中,含有较多的有机和无机的含S化合物。日本学者用本法对龙骨(Fossil