涉县夏季正常人群和发作样病人中盖塔病毒感染状况调查

涉县夏季正常人群和发作样病人中盖塔病毒感染状况调查

昆虫病毒有很多种类和分布。它以吸收血液为手段，通过动物和人类之间的接触传播。病毒学分类中包括14个科,其中与人畜疾病传播密切相关的主要是被膜病毒科甲病毒属、黄病毒科黄病毒属、布尼安病毒科和呼肠病毒科。自上个世纪90年代以来,我国陆续监测到多株甲病毒属虫媒病毒,对甲病毒的研究不断有许多新的发现。盖塔病毒(GETV,GetahVirus)属于被膜病毒科甲病毒属虫媒病毒,作为甲病毒属成员之一,分离时间最早,于1964年在海南首次分离到第1株GETV(M1株),但直到1992年才在美国疾病预防控制中心得到最后鉴定,在我国甲组虫媒病毒研究中意义重大。2002年,在河北省涉县采集的蚊标本中,得到13株具有相同细胞病变特征的分离物,其中HB0215-3和HB0234两株病毒经过系统鉴定为GETV,这是我国分离的第2和第3株GETV,为我国内陆地区和北方地区首次分离的GETV。GETV对人和动物感染状况,目前仍不十分清楚。为了解GETV是否感染人类,感染率如何,感染后是否发病以及临床表现如何,在GETV分离标本采集地涉县,我们分别于分离病毒的当年(2002年夏季)采集了部分正常人群血清,和2008年夏季采集了部分发烧样病人血清,进行GETVIgM抗体和IgG抗体筛查,并对所有观察对象进行了流行病学调查,现将抗体筛查和流行病学调查结果分析如下。1材料和方法1.1调查和收集血标本我中心于2002年夏季采集蚊标本,同时开展正常人群流行病学调查并收集部分正常人群血标本,采集地点为涉县各乡村。2008年夏季开展对发烧样病人流行病学调查同时收集其血标本,调查和收集地点包括县医院和各个乡镇卫生院。采集静脉全血,及时分离血清,-20℃冻存备检。1.2测试指标正常人群检测GETVIgM和IgG抗体;发烧样病人检测GETVIgM抗体。1.3检测方法1.3.1抗体酶活性测定具体方法为抗体捕捉ELISA方法检测GETVIgM抗体。具体操作步骤包括包被抗人IgMμ链抗体,4℃保湿过夜,洗板后加稀释待检血清,37℃保湿温育,洗板后加单克隆抗体酶标结合物,37℃再次温育,洗板后37℃避光显色,最后测定OD值,判读结果。包被液为PH9.6、0.05M碳酸盐缓冲液,洗涤液为含0.5%吐温-20生理盐水,底物缓冲液为PH5.0柠檬酸磷酸盐缓冲液,封闭液为含10%胎牛血清洗涤液,终止液为2M硫酸,底物为过氧化氢和邻苯二胺,酶标仪选取490nm测定OD值,判读标准:(待检血清OD值/阴性血清OD值)≥2.1为阳性,阴性血清OD值<0.05时按0.05计算。1.3.2etv产物的检测具体方法为间接ELISA方法检测GETVIgG抗体。具体操作步骤包括包被GETV抗原,4℃保湿过夜,洗板后加稀释待检血清,37℃保湿温育,洗板后加酶标记抗人IgG抗抗体,37℃保湿温育,洗板后37℃避光显色。实验使用的包被液、洗涤液、底物缓冲液、终止液、底物及检测条件和结果判读标准与IgM抗体检测都相同。1.3.3用包被液液液膜冻存将HB0215-3和HB0234两株病毒接种到BHK-21细胞,病变收获后冻存,经病毒滴定、热灭活后,以10-1用包被液稀释后1∶100使用。2结果2.1发病时间及血清采集情况正常人群采血时间为2002年7、8、9月,采血数量为300份,男女比例为137∶163。发烧样病人血标本采集时间为2008年夏季7、8、9、10月份,共采集血清317份。其中7月上、中、下旬各23份、15份、15份;8月上、中、下旬各47份、41份、35份;9月上、中、下旬各30份、54份、53份;10月上旬4份。2.2年龄及性别分布正常人群年龄范围为1～30岁,分为6个年龄组,1岁～,5岁～,10岁～,15岁～,20岁～,25～30岁,每个年龄组数量各50份。发烧样病人年龄范围1～86岁,其中1岁～组18例,11岁～组30例,21岁～组40例,31岁～组50例,41岁～组59例,51岁～组64例,61岁～组35例,71～86岁组21例。2.3热点难度检测情况正常人群分布于涉县3个乡镇的4个村,4个村分别采集102份、89份、84份和25份血清,其中分离到GETV的2个乡镇分别采集114份和84份血清。317例发烧样病人来自全县17个乡镇119个行政村,占全县行政村总数的38.64%;就诊于全县14所医院,其中涉县县医院就诊100例(占31.55%),分离到GETV的2个乡镇卫生院分别为64例(占20.19%)和59例(占18.61%),4所乡镇卫生院病例数在15～27例之间(4.73%～8.52%),有8所卫生院就诊数在10例以下。2.4感染及并发症317例发烧样病人中,上呼吸道感染最多,为89例,(急性)扁桃体炎34例,肺炎32例,咽炎及咽喉炎24例,腹泻17例,发热及发热待查15例,感冒12例,(急性)肾盂肾炎6例,感染性发热、泌尿系感染各5例,鼻炎、肠炎、(急性)菌痢、阑尾炎、支气管炎各4例,腹膜炎、感染性腹泻、咳嗽、原发性肝炎、胃炎、乙型脑炎各3例,布病、胆结石、风湿热、急性肠炎、头痛、膝关节炎、中暑或血小板减少性紫癜各2例,病毒性心肌炎、单纯疱疹病毒性脑炎、肠梗阻、恶性肿瘤、肺气肿、分娩、关节炎、急性淋巴结炎、角膜炎、结核性胸膜炎、颈椎病、口腔溃疡、囊肿切除、脑部循环缺血、脑出血、贫血、脂肪瘤术后、双下肺炎、糖尿病上感、未痰检、下肢外伤、心脏病、牙术后、腰椎间盘突出、叶胸梗塞、自发性腹膜炎各1例。2.5中草药、设专类型病例选择选择为1位患者临床诊断及治疗效果明显300份正常人群血清经实验室检测,有1份IgM抗体阳性,阳性率为0.30%,年龄组为25～30岁,人员失访;300份正常人群血清中有49份IgG抗体阳性,阳性率为16.30%,IgG抗体阳性血清也分布在大年龄组。317例发烧样病人血清有2份IgM抗体阳性,阳性率为0.63%。1位患者临床诊断为中暑合并血小板减少性紫癜,女性,55岁,临床症状表现为低热、乏力、头晕、精神差、全身皮肤黏膜散在出血点、十指甲床变黑、下肢肿胀,白细胞为8.5×109/L,没有肌炎或脑炎、皮疹、皮炎、关节炎等临床症状,采用抗炎、补液和激素及中草药综合治疗后,效果明显。另1位患者临床诊断为单纯疱疹病毒性脑炎合并高血压Ⅰ级,女性,61岁,临床表现为高热、头晕或昏睡、抽搐和惊厥及呼吸衰竭等,布氏征和克氏征阴性;白细胞为12.5×109/L,中性粒细胞为82.6%;脑脊液压力增高为180mmHg,肉眼可见外观清晰,有核细胞为260×109/L,主要为中性粒细胞,无淋巴细胞。病例经抗病毒和抗感染以及脱水降颅压等综合治疗后,效果明显。经流行病学调查,2位患者居住地都没有发现类似病人,也没有发现马、牛、羊等动物异常的疾病发生和流行。3与受试人群的关系研究结果显示,甲病毒在我国广泛存在。在自然界中甲病毒感染主要发生在脊椎动物,某些表现为无症状、长期的、高滴度的病毒血症,以利于病毒传播,一旦传播到人和家畜可引起疾病流行,临床表现为发热、皮炎、关节炎、肌炎或脑炎,严重的还可造成死亡。目前,GETV已在亚洲地区多个国家采集的标本中被分离到,这些国家包括马来西亚、日本、印度、巴基斯坦和俄罗斯远东地区。日本研究表明,GETV可感染马造成流行,临床表现为发热、流产、皮疹和后腿水肿等。但还没有研究表明盖塔病毒可感染人引起人的疾病和流行。该研究结果揭示,在河北省涉县GETV循环地区,人群对GETV是易感的,而且感染率较高,不仅对30岁以下人群易感,而且对高龄人群也易感,感染后还可引起发热、病毒性脑炎或出现皮肤粘膜散在出血等疾病症状,以及头晕、乏力、昏睡、抽搐等精神疾病症状。鉴于观察数量有限,有待于更多的或进一步调查研究。研究结果提供了GETV感染人和动物以及疾病流行的重要数据,具有非常重要的意义。研究表明,我国甲病毒的分离主要出现在南方和新疆等地,这次在我国北方地区分离到GETV并发现感染人类,而且感染率如此之高,具有非常重要的流行病学意义,为进一步研究GETV的流行病学奠定了基础和提供了宝贵的资料。以往海南和广东11个地区GETV血清抗体检测结果表明,广东省未发现GETV抗体阳性者;海南省的6个地区中只有琼中地区发现有GETV抗体阳性,阳性率分别为1.95%和2.37%。然而,此次对河北省涉县人群GETV感染率调查中,正常人群的总感染率为16.67%,大大高于海南琼中地区的感染率,结果具有重要的流行病学意义。从本研究结果来看,正常人群分布于