酶免基础知识和血筛产品介绍

酶联免疫检测技术简介

血液筛查试剂特点及发展历程北京万泰生物药业股份有限公司汪月才2012年3月一、酶联免疫检测技术简介什么是ELISA?免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。ELISA是一种免疫测定。基础定义抗原（Antigen）：能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗体（Antibody）：能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。机体被微生物感染后，先产生IgM抗体，然后产生IgG抗体。经过一段时间，IgM抗体量逐渐减少而消失，而IgG抗体可长期存在，在疾病痊愈后可持续数年之久。重要指标灵敏度：能检测到的分析物的最小量，表示检测下限的能力。特异性：鉴别阴性标本的能力。精密度：指对同一个标本进行重复分析，其结果间的符合率。重要指标稳定性：指在效期内试剂质量参数的变化。一般用非储存条件下较高温度进行破坏性实验数天，参观各质量参数的变化，一般37℃1天相当于4℃45天,还有2-8℃长期稳定性。质控血清：指为了对实验结果进行控制而配制的血清。一般用无溶血无脂血的血清或血浆。本底：指底色，如HBsAgELISA试剂盒，阳性显色、阴性不显色，本底就是阴性显色的情况；

ELISA检测方法

1.夹心法.2.间接法.3.竞争法.4.捕获法.夹心法双抗原夹心：固相(包被)抗原Ag+样品(抗体Ab)+酶标抗原Ag*→Ag-Ab-Ag*+底物(TMB)→显色双抗体夹心：固相(包被)抗体Ab+样品(抗原Ag)+酶标抗体Ab*→Ab-Ag-Ab*+底物(TMB)→显色夹心法图解TMB+H2O2TMB+H2O2显色样品酶标抗原加样洗涤加酶包被底物包被抗原21114233360’30’30’45554洗涤一步法二步法间接法固相(包被)抗原Ag+样品(抗体Ab)+酶标二抗Ab*→Ag-Ab-抗Ab*+底物(TMB)→显色TMB+H2O2样品酶标二抗底物包被抗原竞争法固相(包被)抗原Ag+样品(无抗体Ab)+酶标抗体Ab*→Ag-Ab*+底物(TMB)→显色捕获法固相-抗IgM抗体(抗µ)+样品(IgM)→抗µ-IgM+酶标抗原Ag*→抗µ-IgM-Ag*+底物(TMB)→显色TMB+H2O2样品酶标抗原包被抗IgM底物

与其他检测方法比较二、血液筛查试剂特点及发展历程1、人类免疫缺陷病毒诊断试剂HIVELSIA试剂的发展第三代检测试剂简介全称：人类免疫缺陷病毒HIV（1+2型）抗体诊断试剂盒方法：双抗原夹心酶联免疫法（第三代）检测对象：血液标本中的HIV总抗体原料：基因重组（万泰和厦大合作研制），包被GP41、GP120、GP36，片段齐全。检测窗口期：20天左右基因重组多表位嵌合抗原对HIV-2型阳性出色的检测能力试剂盒内设置有HIVⅠ型和Ⅱ型阳性对照，为国产试剂首创，我们使用美国BBI

血清盘Panel202对万泰试剂进行考核。

对HIVO亚型的检测O亚型血来源于美国BBI超强的抗干扰能力临床研究显示，多种其他疾病潜在干扰因素血清标本均不会影响万泰两步法HIV诊断试剂盒的灵敏度和特异性，适合临床使用23第四代诊断试剂简介HIV-Ab与HIV-Ag双系统检测

——HIV-Ag和HIVP24抗体共同包被

——双抗原夹心法检测HIV-Ab——双抗体夹心法检测HIV-Ag生物素-亲和素反应系统应用

——包被抗体＋生物素标记抗体＋HRP标记亲和素国产第四代HIV诊断产品明显缩短窗口期25结论

HIVAg/Ab诊断试剂全新第四代HIV筛查试剂为使用者提供:增强检验安全性更可信赖的实验结果2、乙肝系列诊断试剂简介1、乙型肝炎HBsAg及HBsAb检测2、乙型肝炎HBeAg及HBeAb检测3、乙型肝炎HBcAb及HBcAb-IgM检测4、乙型肝炎前-S1及前-S2检测（大蛋白）5、乙型肝炎HBcAg及前-S1检测（Dane颗粒）6、乙型肝炎核酸检测乙肝标志物及临床意义1乙型肝炎病毒（HBV）具有明显的种属及嗜肝特性，可致持续性病毒感染。我国属乙肝感染的高发区，乙肝表面抗原（HBsAg）的携带者超过10%。通常判断HBV感染及其状况的指标为HBV血清血标志物—乙肝两对半、HBc-IgM、HBVDNA等。乙肝病毒（HBV）又称Dane颗粒（丹颗粒），由外至内可分为包膜蛋白、核壳蛋白、HBVDNA等主要组成。包膜蛋白构成乙肝病毒表面抗原（HBsAg）核壳蛋白构成乙肝病毒核心抗原（HBcAg）和乙肝病毒e抗原（HBeAg）乙肝标志物及临床意义2乙肝表面抗原（HBsAg）HBsAg于1963年在澳大利亚土著人血中发现，故也称为澳大利亚抗原（简称“澳抗”），具有免疫原性，可刺激机体产生相应的抗体，是机体感染HBV后最早出现的血清血指标。HBsAg分为4个亚型：adr、adw、ayw和ayr。不同亚型的HBsAg刺激机体产生的HBsAb不同。乙肝标志物及临床意义3乙肝表面抗体（HBsAb）HBsAg刺激机体产生的特异性抗体，能中和体液中的HBV，感染乙肝病毒后6-23周出现。见于乙肝恢复期、HBV既往感染和乙肝疫苗免疫后。HBsAb滴度≥10mIU表示具有保护性，可抵御同一亚型的再感染。乙肝标志物及临床意义4乙肝病毒核心抗原（HBcAg）HBV核心颗粒外表面具有HBcAg活性，但外周血中没有游离的HBcAg。HBcAg阳性表示有Dane颗粒存在，有传染性。乙肝标志物及临床意义5乙肝核心抗体（HBcAb）HBcAb是乙肝核心抗原的总抗体。感染HBV后最早出现的抗体是HBc-IgM抗体，它是乙肝病毒急性感染的重要指标，慢性肝炎的炎症活动期也呈阳性。核心抗体不是中和抗体，HBc-IgG抗体可持续多年不消退，是既往感染的指标。乙肝标志物及临床意义6乙肝e抗原（HBeAg）HBV核心颗粒内表面具有HBeAg活性，也可以由HBcAg经蛋白酶降解后产生，在乙肝潜伏期后期出现，略晚于HBsAg。HBeAg阳性表示HBV在体内复制，有很强的传染性。进入恢复期后，HBeAg随着HBsAg的消失而消失，其消失前后出现HBeAb。乙肝标志物及临床意义7乙肝e抗体（HBeAb）HBeAb的出现预示HBV复制减弱或中止，疾病可能向好的方向转化。HBeAg逐渐消失HBeAb逐渐产生的时期称为血清转换期，即由复制期转为非复制期。在这一时期可能出现eAg、eAb同阳的现象。HBeAb也不是保护性抗体。乙肝标志物产生的先后顺序HBsAg→(HBcAg)→HBcAb→HBeAg→HBeAb乙肝两对半模式常见模式（出现率1～40%）

模式sAgsAbeAgeAbcAb出现率临床意义1＋－＋－＋30～40%a、急、慢性肝炎

b、提示HBV复制2＋－－－＋10～15%a、急性HBV复制

b、慢性HBsAg携带者

c、传染性弱3＋－－＋＋5～10%a、急性HBV趋向恢复

b、慢性HBsAg携带者

c、长期持续容易癌变4－－－－－1～30%未感染过HBV5－＋－－＋5～15%a、既往感染，仍有免疫力

b、非典型恢复型，急性HBV感染模式sAgsAbeAgeAbcAb出现率临床意义6－－－＋＋2～10%a、既往感染过HBV

b、急性HBV感染恢复

c、少数标本仍有传染性7－－－－＋5～10%a、既往感染过HBV

b、急性HBV感染窗口期8－＋－－－1～6%a、被动或主动免疫后

b、HBV感染后已经康复9－＋-＋＋0.5～5%a、既往感染过HBV

b、急性HBV感染后已经康复常见模式（出现率1～40%）

少见模式（出现率1～4%）模式sAgsAbeAgeAbcAb临床意义10＋－－－－a、慢性HBsAg携带者，传染性弱

b、急性HBV感染11＋－－＋－a、慢性HBsAg携带者易转阳易发生基因整合

b、急性HBV感染趋向恢复12＋－＋

－－早期HBV感染或慢性携带者，传染力强13＋－＋＋＋a、急性HBV感染，趋向恢复

b、慢性HBsAg携带者14＋＋－－－a、亚临床型HBV感染早期

b、不同亚型HBV二次感染15＋＋－－＋模式sAgsAbeAgeAbcAb临床意义16＋＋－＋－亚临床型或非典型感染17＋＋－＋＋18＋＋＋－＋亚临床型或非典型感染早期19－－＋－－a、非典型性急性感染

b、提