总大肠菌群检验法

总大肠菌群多管发酵法范围本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。本标准适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定。术语和定义以下术语和定义适用于本标准。37P24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，具有指标菌的一般特征故以此作为粪便污染指标评价饮水的卫生质量。水中总大肠菌群数系以1mL水样中总大肠菌群最可能数(MPN)表示。培育基与试剂乳糖蛋白胨培育液2.1.3.1. 成份A蛋白胨10gB3gC5gD5gE溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L)1mLF10mL2.1.3.1. 制法pH7.2〜7.4,1mL16g/L的溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，68.95Kpa(115C10lb高压灭菌20min，贮存于冷暗处备用。二倍浓缩乳糖蛋白胨培育液按上述乳糖蛋白胨培育液(2.1.3.除蒸馏水外，其它成份量加倍。伊红美蓝培育基2.1.3.3. 成份A蛋白胨10gB乳糖10gC2gD20〜30gE10mLF伊红水溶液(20g/L)20mLG美蓝水溶液(5g/L)13mL2.1.3.3.制法pH7.2参与乳糖，混匀后分装，68.95Kpa(115C10lb20min50〜55C，参与伊红和美蓝溶液，混匀，倾注平皿。革兰氏染色液2.1.3.4.A成份

结晶紫染色液a1gb乙醇〔(C2H5OH)=95%〕20mLc草酸铵水溶液〔10g/L〕80mLB制法：将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。注：结晶紫不行用龙胆紫代替，前者是纯品，后者不是单一成份，易消灭假阳性。结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。2.1.3.4.A成份a碘1g

革兰氏碘液b2gc3mLB制法：将碘和碘化钾先进展混合，参与蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水。2.1.3.4.2.1.3.4.A成份

脱色剂：乙醇〔〔C2H5OH〕=95%〕。沙黄复染液a0.25gb乙醇〔〔C2H5OH〕=95%〕10mLc90mLB制法：将沙黄溶解于乙醇中，待完全溶解后参与蒸馏水。2.1.3.4.染色法A18〜24h的培育物涂片。B1min，水洗。C1min，水洗。D30s，水洗。E1min，水洗，待干，镜检。仪器培育箱：36±TC。冰箱：0〜4C。天平。显微镜。平皿：直径为9cm。试管。2.1.4.锥形瓶。小倒管。

分度吸管：1mL，10mL。2.1.4.1〔载玻片。检验步骤乳糖发酵试验2.1.5.1.10mL10mL1mL10mL单料1mL9mL1mL〔0.1mL水样〕10mL5管。510mL水样双10mL水样。2.1.5.1. 检验水源水时，如污染较严峻，应加大稀释度，可接种1,0.1,0.011＜至0.1,0.01,0.Lm5151mL以下水样时，101mL11mL灭菌刻度吸管。2.1.5.1. 36±TC24±2h，如全部乳糖蛋白胨培育管都不产气产酸，则可报告为总大肠菌群阴性，如有产酸产气者，则按以下步骤进展。别离培育36±1C1824h，观看菌落形态，挑取符合以下特征的菌落：深紫黑色、具有金属光泽的菌落，紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落，淡紫红色、中心较深的菌落，作革兰氏染色、镜检和证明试验。证明试验经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖蛋白胨培育液，置36±1C培育箱中培育24±2h，有产酸产气者，即证明有总大肠菌群存在。结果报告MPN1mLMPN值。稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数。如全部乳糖发酵管均阴性时，可报告未检出总大肠菌群。2-1510mLMPN510mLMPN0012.225.139.2416.05>162-2大肠菌群(MPN)检索表55.5mL510mL水样，51mL水样，50.1mL水样〕接种量，mL接种量，mLmL0mL1010.11010.112121014241026351038471041059105120102110401141116012611280137113100149114120151111514020412060216121802271221002391231202411124150251312517030613080317131100329132120331113315034131341703515135190408140110419141130421114215043131431704415144190451714522050915013051111511505213152170531515319054171542205519155242005300820173011120293021320312303162041430420205163052321073101121193111421212312172131431320214173142321519315272209320142211232117222143222022317323242241932427225223253123012330172311433121232173322423320333282342233432235253353624015340212411734124242203422824323343322442534436245283454025017350252512035129252233523225326353372542935441255323554541352340117501314022150243403255035840430504764053650595410175103341121511464122651263413315138441436514110415425151304202352049421265217042232522944233852312042444524150425505251804302753079431335311104323953214043345533180434525342104355953525044034540130441405411704424754222044354543280444625443504456954543045041550240451485513504525655254045364553920454725541645581555>16滤膜法范围本标准规定了用滤膜法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。本标准适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定。术语和定义以下术语和定义适用于本标准。总大肠菌群是指用孔径为0.45叩的微孔滤膜过滤水样，将滤膜贴在选择性品红亚硫酸钠培育基上37T24h,能形成紫红或红色有金属光泽的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。计数生长在滤膜上的典型大肠菌群菌落数。1mL水样中总大肠菌群菌落形成单位(CFU)表示。培育基与试剂品红亚硫酸钠培育基2.2.3.1. 成份A蛋白胨10gB5gC5gD10gE15〜20gF3.5gG5g左右H碱性品红乙醇溶液(50g/L)20mLI10mL2.2.3.1. 贮存培育基的制备5mL5mL蒸馏水中参与磷酸氢二钾、蛋白胨、酵母浸10mLpH7.2〜7.4,再参与乳糖，分装，68.95Kpa(115C10lb20min，储存于冷暗处备用。2.2.3.1. 平皿培育基的配制将上法制备的贮存培育基加热溶化，用灭菌吸管按比例吸取确定量的50g/L的碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中，再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一灭菌试管中，加灭菌水少许，使10min以灭菌。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉色为止，将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已溶化的贮存培育基内，并充分混匀防止产生气泡)，15mL倾入已灭菌的空平皿内。待冷却凝固后置冰箱内备用。此种已制成的培育基于冰箱内保存不宜超过两周。如培育基已由淡粉色变成深红色，则不能再用。乳糖蛋白胨培育液，同多管发酵法2.1.3.。1仪器.滤器。0.45叩。抽滤设备。无齿镊子。其他仪器同多管发酵法检验步骤预备工作2.2.5.1. 3次，每次15min2〜3次，以除去残留溶剂。2.2.5.1. 103.43Kpa(121C15lb)高20min。过滤水样用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘局部，将粗糙面对上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤1mL水样如水样含菌数较多，可削减过滤水样量，或将水样稀释)注入滤器中，翻开滤器阀门，在负0.5大气压下抽滤。培育水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘局部，移放在品红亚硫酸钠培育基上，滤膜截留细菌面对上，滤膜应与培育基完全贴紧