使用离子色谱法测定电镀液中的邻磺酰苯甲酰亚胺

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使用离子色谱法测定电镀液中的邻磺酰苯甲酰亚胺使用离子色谱法测定电镀液中的邻磺酰苯甲酰亚胺（完整版）实用资料(可以直接使用，可编辑完整版实用资料，欢迎下载）摘要：本文提供一种使用离子色谱法，OmniPacPAX-500排斥离子色谱柱，抑制型电导法检测电镀液中邻磺酰苯甲酰亚胺方法。采用紫外检测器检测。关键词：离子色谱；电镀液；邻磺酰苯甲酰亚胺；邻磺酰苯甲酰亚胺能够降低电解沉积镍的抗张强度，而且随邻磺酰苯甲酰亚胺浓度的升高，系统压力升高。电解槽中不加入II级镍抛光剂，硫元素就会通过邻磺酰苯甲酰亚胺引入到电解槽中，产生抗张强度高、硬度高且延展性相对低的镍沉积。在没有其他镍抛光剂存在时，邻磺酰苯甲酰亚胺会导致电解液光泽度低。离子色谱测定邻磺酰苯甲酰亚胺的方法与经典滴定法相比：快速、干扰少、操作费用低。戴安离子色谱系统的流路均是由惰性材料组成的，所以能够使用用30mM硫酸作淋洗液。而且，高腐蚀性的镍电解液样品可以直接进样而不会导致系统组件腐蚀。1实验部分DionexDX500离子色谱仪，包括GP40四元梯度泵（带脱气装置）、AD20紫外检测器、自动进样器和PeakNet色谱工作站。分析柱：OmniPac.PAX-500淋洗液：A：30mM硫酸/5%乙腈；B：30mM硫酸/25%乙腈流速：1mL/min进样体积：25mL检测：UV，225nm梯度条件：0min，100%A；20min，100%B；30min，10%B2结果与讨论作为添加到镍电镀槽中的I级镍抛光剂，硫酸镍中的邻磺酰苯甲酰亚胺经常用离子色谱法检测。线性范围在0.25-250mg/L。在紫外检测器上邻磺酰苯甲酰亚胺能够与电解槽中其他化合物进行明显的分离检测。推荐每次进样后使用淋洗液A平衡柱子10min后再进行下一次分析。图1邻磺酰苯甲酰亚胺在新的硫酸镍电镀槽液中的色谱分离图图2硫酸镍电解槽中的邻磺酰苯甲酰亚胺分离色谱图3参考文献使用离子色谱法直接检测尿素溶液及尿素蛋白缓冲液中的氰酸根摘要：本文提供一种使用离子色谱抑制型电导法直接检测尿素溶液及尿素蛋白缓冲液中氰酸根的方法。采用IonPacAS15分析柱，使用电解淋洗液发生器在线产生高纯氢氧化钾淋洗液。利用高容量和特殊选择性分析柱，可有效兼容高浓度氯离子和磷酸根基体。我们针对方法检测线性、系统噪音、量化限和检出限进行了整体评估，证明该法稳定可靠，抗干扰能力强。关键词：离子色谱；尿素；氰酸根；尿素作为一种化工原料被广泛应用于蛋白质提纯，包括商业用途的重组细胞蛋白分离提纯、重组蛋白制造业中蛋白质的变性及溶液化。一些蛋白质在中等浓度（4-6M）的尿素中很容易溶液化和变性，而大多数则在较高浓度（8-10M）下溶液化和变性。尿素在水溶液中降解为氰酸盐和铵盐。在接近中性pH，即典型的生物缓冲pH范围时，氰酸盐转化率最高。氰酸根可通过与自由氨基、羧基、巯基、咪唑、酚、羟基、磷酸盐基团反应使蛋白质氨基甲酰化。从而改变蛋白质的稳定性、功能、有效性。因此，需要对其含量进行有效控制。尿素溶液通常需要消电离以去除氰酸盐。但尿素缓冲体系中氰酸根含量依旧较高，一些尿素缓冲体系显示氰酸盐浓度高达20mM。为在高离子强度基体中测定氰酸盐，建立一种准确、灵敏的方法十分必要。离子色谱法（IC）检测氰酸盐效果很好，2004年已有使用了戴安公司的IonPacAS14型阴离子分析柱抑制型电导检测法检测氰酸盐的文章发表。但存在诸如方法灵敏度和基体局限性等问题。本文中，选用氢氧根体系色谱柱进行分离，电解淋洗液发生器产生25mMKOH作为淋洗液，抑制型电导检测。可以改善灵敏度，减少淋洗液消耗，允许更高的样品吞吐量。实验过程中对氰酸盐的线性范围、方法检出限、精密度、回收率及稳定性进行了测试，取得了满意的结果。1实验部分采用ICS-3000型离子色谱仪（美国Dionex公司）。色谱柱为IonPacAS15，使用RFIC免化学试剂离子色谱系统，在线产生所需浓度淋洗液，抑制型电导检测。尿素溶液需在-20°C或-40°C下冷冻保存，使用前解冻。或者根据氰酸盐浓度随时间和温度的变化每日配制。为了优化条件、减少选择色谱柱所需时间。我们使用变色龙虚拟柱模拟分离条件。（由于软件虚拟组分不包括氰酸盐，我们使用在氢氧根体系中具有相似保留行为的亚硝酸盐代替）。模拟在30°C以等度氢氧化物为淋洗液的条件下，氯化物、亚硝酸盐、碳酸盐、磷酸盐的分离情况。结果表明，IonPacAS15阴离子色谱柱使用20mMKOH，可提供最佳的氯化物/亚硝酸盐及亚硝酸盐/碳酸盐分离度。图1为根据虚拟柱结果选择条件后的实际氰酸根样品分离谱图，与模拟条件相吻合。2结果与讨论该方法适用于检测稀释50倍后的8M尿素溶液；8M尿素与1M氯化物；8M尿素与1M氯化物及50mM磷酸盐缓冲溶液（pH8.4）体系。氰酸根峰可与氯离子及碳酸根峰很好的分离，并且具有良好的峰型（图2）。可以观察到尿素溶液中一个可接受的基线漂移(<0.15μS)。该漂移在2.4min开始，大约15min结束。在含有摩尔浓度含量水平氯离子的尿素溶液中，氰酸根在较大氯离子峰的背景下淋洗，没有与氯离子完全分离（图3）。其色谱图与含有氯离子及磷酸根的尿素溶液色谱图相似（图4）。实验表明，在-40°C的贮存条件下，8M尿素中氰酸根总浓度是稳定的。然而，在4°C的储存条件下，四天后氰酸根浓度增长了10倍以上（从6到75μM），在25°C下储存增长的更多（从24到886μM）（图5）。在8M尿素与1M氯离子混合液、8M尿素与1M氯离子及50mM磷酸根缓冲溶液中，氰酸根与在8M尿素溶液中具有相似的稳定性。磷酸盐缓冲溶液不会抑制尿素中氰酸根的聚集。3结论尿素分解所产生的氰酸根，对于用于蛋白质纯化的尿素缓冲溶液是一种不必要的污染物。本文使用高容量离子交换色谱柱及抑制型电导检测器，准确测定出了稀释50倍后的8M尿素及含有高浓度氯离子和毫摩尔浓度磷酸根的尿素溶液中低浓度(μM)的氰酸根。这种方法可以快速、准确的测定含有尿素的溶液中氰酸根的含量。采用免化学试剂电解淋洗液发生器在线产生高纯淋洗液，保证了方法精密度，避免了手工配制淋洗液过程中可能产生的误差。离子色谱法-抑制型电导检测药物中的伊班膦酸钠及杂质的含量曾雪灵，廉玫戴安中国杭州实验室，浙江杭州310028摘要：本文采用离子色谱抑制型电导快速测定药物中的伊班膦酸钠及其杂质的含量。采用IonpacAG11-HC+AS11-HC阴离子分析柱分离，以电导为检测器。用去离子水提取药物中的伊班磷酸钠及杂质离子，过0.45μm的过滤膜后直接进样。实验结果表明，在一定的色谱条件下，伊班膦酸钠及其杂质离子具体很好的线性，和重现性，及较低的检出限。最低检出量0.2mg/l。样品的平均加标回收率为98-105%。关键词：离子色谱；药物；伊班磷酸钠引言磷是生物体内非常重要的元素，参与多种重要的生物和环境的转换过程。20世纪80年代以来，人们研究开发了有机膦骨吸收抑制剂双膦酸盐（Bisphosphonates,BPs）类药物，并成功地用于骨钙代谢疾病和一些骨相关疾病的治疗[1]。伊班膦酸钠（ibandronatemonosodium，IB）属于第三代双膦酸类药物，具有高效、低毒和使用方便等优点，是不可多得的双膦酸盐药物。2003年1O月和2004年2月，欧盟分别批准了伊班膦酸钠预防和治疗骨转移的适应证[2]。动物实验表明，IB抗骨质吸收的强度分别是依替膦酸钠(etidronate)、氯屈膦酸钠(clodronate)和帕米膦酸钠(pamidronate)的50000、5000和500倍[3]。伊班膦酸钠及杂质的结构既缺少发色基团，又不具备电化学特性，故不能用常规的紫外、荧光或者电化学分析方法检测。较早的文献报道[4]某些类似的二膦酸盐采用流动进样技术，钼试剂柱后衍生，但是需要特殊的反应器，并且要加热到140℃，反应较为复杂。近年来国内也展开相关研究的研究，赫立恩等用荧光淬灭法测定伊班膦酸钠注射液的含量。以桑色素一钍为荧光剂，伊班膦酸钠为荧光淬灭剂，在408nm激发波长，504nm发射波长下测定荧光强度[5]。周杏琴等运行缓冲液为NaH2PO4，CTAB，加入对氨基苯磺酸作间接试剂。采用毛细管区带电泳，在缓冲液中加入淌度与其相接近的检测试剂，利用间接紫外检测法，测定伊班膦酸钠的含量[6]。在本文中采用离子色谱法-抑制型电导检测可快速，灵敏地检测药物中的伊班膦酸根及其合成过程中所引入的杂质离子。1．实验部分1.1仪器DionexICS2000离子色谱仪（美国Dionex公司）；EG50淋洗液发生器；DS6电导检测器；DionexASRS300自再生抑制器；Chromeleon6.8色谱工作站。1.2试剂所有试剂均为分析纯。伊班磷酸钠（ibandronatesodium,IB）均由杭州普惠科技提供。标准溶液均由1000mg/L的贮备液（置于4℃冰箱中）稀释配制，溶液均用18.2MΩ的二次去离子水配制。1.3色谱条件IonPacAG11-HC保护柱（250mm×4mm）；IonPacAS11-HC分离柱（250mm×4mm）；25μL进样量；柱温30℃；流速：0.8ml/min。1.4样品前处理0.05g样品定容至100mL，再取0.20mL定容到25mL后进样。2．结果与讨论2.1方法的线性范围、精密度和最低检测限在所选的色谱条件下，各种待测离子分离度远大于1.50，能够很好地保证定量和定性。考察方法的稳定性是通过测定连续10针同一样品的各指数的相对标准偏差RSD。F，Cl,PO32,PO43,IB的峰保留时间的RSD分别为1.26％、0.98%,1.01%，1.32%，1.23%；峰面积的RSD值分别为2.33％，2.56％，2.24%,1.98%，3.21%；峰高的RSD分别为2.82％，3.21％，2.96％,2.45%,3.87%。2.2样品测定和回收率测定使用前面所说的色谱条件对真实样品中的F-，Cl-，PO32，PO43-和IB进行测定。通过对比样品色谱图与标准溶液的保留时间进行定性。在样品的处理方面，0.05g样品定容至100mL，再取0.20mL定容到25mL后进样。得到的样品色谱如图2所示。加标回收率也是这个实验考察的对象之一，5种离子的加标回收率在98％到105％之间（表3），符合分析测试的要求。3结论本文提出的方法以离子色谱抑制电导法测定药物中的伊班膦酸离子及其杂质离子，灵敏度高，方法简便，分离时间短，可广泛应用于生产过程中的产品质量控制及市场商品检验。参考文献[2]刘东刚，王杰军.双膦酸盐类药物的发展.中国肿瘤临床，2003，30（9）：678.[3]张石革双膦酸盐类药物的研究进展与合理应用.ChinaContemporaryMedicine,2002,8(1):[4]H.Kataoka,N.SakiyamaandM.Makita,J.Chromatogr.,1988，436：67.[5]赫立恩，张娣群，房桂珍，王云志.荧光淬灭法测定伊班膦酸钠注射液含量.ChinJPharmAnal(药物分析杂志).2005,25(2):220-222离子色谱法应用于油田采出水中有机酸和无机阴离子的分析郭新美1，王宗花1*，张菲菲1，侯倩慧21青岛大学纤维新材料与现代纺织实验室，国家重点实验室培育基地，青岛，266071，wangzonghua@2青岛普仁仪器，青岛，266071摘要：运用离子色谱分析技术对油田采出水中的有机酸和无机阴离子进行了分离和检测。采用C18柱对油田采出水进行前处理，色谱柱为ShodexICSI-524E阴离子色谱柱，流动相为2.0mmol/LNa2CO3溶液，流速为0.8mL/min。该分析方法重复测定相对偏差小于l％，线性范围大于102,相关系数大于0.999，加标回收率在98.4％～101.5％。该方法具有简便、准确、灵敏度高等优点，用于油田采出水中F-、Cl-、SO42-、CH3COO-、HCOO-、C2O42-离子的同时分离检测，可得到令人满意的效果。:///Shop/Product/Product_195551.shtml关键词：离子色谱,油田采出水,有机酸和无机阴离子，C18柱石油又称原油，是从地下深处开采的棕黑色、可燃、粘稠液体。油田含油污水主要是来源于油田勘探开发过程的油田采出水、洗井污水、钻井污水等，其中主要为油田采出水。油田采出水是与地下的石油、天然气伴生在一起的水体[1]，具有高矿化度、化学成分含量相差悬殊并含有大量不溶性颗粒物、有机物等特点。了解和研究油田采出水，对于揭示地下水或储油介质和油气之间的物质、能量交换特征，以及油气起源和演化均有重要意义[2]。常用的油田水分析方法是经典的化学分析方法[3,4]，操作比较繁杂，分析时间较长，难以满足现代化分析检测的要求。离子色谱法因其高灵敏度、分析快速、能够测定某组分含量很大的试样中的微量组分和能够同时分析多种低浓度离子等优点，而成为我们工作的首选。用离子色谱法测定油、气田水中的无机阴离子已有报道[5]，但是尚无用离子色谱同时分析测定油田采出水中有机酸和无机阴离子的实例。本文采用C18柱对油田采出水进行前处理，研究了离子色谱法应用于油田采出水中有机酸和无机阴离子的分析，得到了满意的效果。1．实验部分1.1实验仪器与试剂普仁PIC-10离子色谱仪（青岛普仁仪器），ShodexICSI-524E250mm×4.0mm阴离子柱，0.45μm水性微孔滤膜（上海兴亚净化材料厂），C18柱。所用试剂均为优级纯，实验用电阻率为18.0MΩ.cm的去离子水。:///Product.asp?action=search&dq=1860&proClass=0&textitle=微孔滤膜1.2色谱条件淋洗液为2.0mmol/LNa2CO3溶液；流速为0.8mL/min；ShodexICSI-524E（250mm×4.0mmi.d.）阴离子色谱柱；电导检测；抑制电流为60mA；柱温45℃；进样量200μL。1.3实验步骤（1）C18柱的活化：用甲醇充满C18小柱，放置10min后，用去离子水冲洗至无甲醇。（2）油田采出水的预处理：将待测油田采出水静置1h以上，使油水两相静置分层后，取容器中部的油田采出水通过中速滤纸过滤，然后用C18柱除去水样中的有机物，使样品澄清透明。将预处理后的水样稀释100倍后备用。用针筒式水相滤膜过滤器（膜孔径0.45μm）进样，滤去水中残余的微生物和杂质，确保进入离子色谱仪的水样澄清透明。:///Shop/Product/Product_621085.shtml2．结果与讨论2.1色谱条件优化选择合适的流动相是改善待测离子分离度的有效方法，Na2CO3溶液是ShodexICSI-524E最常用的淋洗液，通过改变淋洗液中Na2CO3溶液的浓度，即可获得不同强度的淋洗液。本文比较了淋洗液不同浓度（1.8，2.0，2.2，2.4，3.0和3.6mmol/L的Na2CO3溶液）条件下ShodexICSI-524E的分离效果。淋洗液的浓度过高，各种阴离子之间的分离度不好，浓度过低，分离时间太长，当淋洗液浓度为2.0mmol/L时各种离子能达到很好的分离（图1）。对淋洗液的流速进行了选择。流速过大，虽然能缩短分离时间，但是会增加柱压，流速过小，分离时间会加长。实验表明最佳流速为0.8mL/min。在本实验中，改变柱温对离子的分离度没有明显的影响，实验采用ShodexICSI-524E色谱柱的常用温度45℃。最佳的色谱条件为Na2CO3淋洗液浓度为2.0mmol/L，流速为0.8mL/min，柱温45℃。图1为在最佳色谱条件下的油田采出水样品的离子色谱图。2.2方法的线性范围及相关性考虑到油田采出水中各离子实际质量浓度范围，配制系列浓度的6种阴离子的标准溶液，在最优的色谱分析条件下进样分析，以质量浓度C为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线。以3倍信噪比（S/N=3）计算各离子的检测限。线性方程、线性范围、相关系数及检出限见表1。2.3精密度实验将配制好的系列标准溶液，连续进样7次，考察精密度。结果表明，6种离子的保留时间（t）和峰面积(A)的相对标准偏差(RSD)均较小，分别在0.04%～0.08%，0.19%～0.29%。2.4实际样品分析及回收率实验在最佳的色谱条件下对样品进行分析，测得油田采出水中F-、Cl-、SO42-、CH3COO-、HCOO-、C2O42-离子的含量，见表2。为了正确评估方法的准确度和客观反映实际样品中复杂的基体效应和化学干扰对测试方法的影响，我们进行了加标回收率实验。加标回收率实验应注意控制加标物体积与待加物体积误差不超过1%；加标量应为待加样品含量的0.5～2.0倍为宜；加标后的总含量不应超过所选方法测定上限。由表2可见，回收率在98.4-101.5%之间。3．结论本文采用等度洗脱的离子色谱法，用C18柱对油田采出水样品进行前处理，在最佳的色谱条件下，对样品中的F-、Cl-、SO42-、CH3COO-、HCOO-、C2O42-进行同时分离和检测。该方法重复测定相对偏差小于l％，线性范围大于102，相关系数大于0.999，标样回收率在98.4％～101.5％。该方法具有简便、准确、检测灵敏度高、分离效果好等特点，随着离子色谱技术的发展，离子色谱将势必在油田开发中得到广泛的应用。2005年7月July2005色谱Vol.23No.4358～361液2液2液微萃取/高效液相色谱法测定人血浆中的西地那非和伐地那非张朝辉,康绍英,许敏洁,马铭,陈波,姚守拙(湖南师范大学化学化工学院,湖南长沙410081摘要:建立了液2液2液微萃取与高效液相色谱联用同时测定血浆中西地那非和伐地那非的方法。考察了萃取溶剂、溶剂体积、接受相液滴大小、搅拌速度和萃取时间等因素对富集因子的影响,得到了萃取溶剂为300μL甲苯、接受相为2μL012mol/LHCl、搅拌速度为600r/min和萃取时间为40min的最佳实验条件。在该条件下,获得了较高的富集因子。两种组分的线性范围均为5μg/L～110mg/L,加标回收率高于87%,其相对标准偏差小于5%。以信噪比为3计,西地那非的检测限为1μg/L,伐地那非为015μg/L。,有机溶剂消耗少,萃取效率高,是一种有效的、灵敏的样品前处理方法,。关键词:液2液2液微萃取;高效液相色谱;西地那非;伐地那非;中图分类号:O658文献标识码:A文章编号:10002204DeterminationofSililrHumanPlasmabyHighqatographyCoupledwithdid2LiquidMicroextraction,KANGShaoying,XUMinjie,MAMing,CHENBo,YAOShouzhuo(CollegeofChemistryandChemicalEngineering,HunanNormalUniversity,Changsha410081,ChinaAbstract:Highperformanceliquidchromatographycoupledwithliquid2liquid2liquidmicroextrac2tionwasdevelopedforthesimultaneousdeterminationofsildenafilandvardenafilinhumanplasma.Theeffectsofextractionsolvent,thevolumeoforganicsolvent,dropsizeofacceptorphase,stir2ringrateandextractiontimeontheenrichmentfactorsofanalyteswereinvestigated.Theopti2mizedexperimentalconditions,300μLtolueneastheorganicphase,2μL012mol/LHClastheacceptorphase,600r/minofthestirringrate,and40minoftheextractiontime,weregotten.Undertheseconditions,highenrichmentfactorswereobtained.Thelinearrangeofstudiedana2lyteswasfrom5μg/Lto110mg/L.Therelativestandarddeviationwaslowerthan5%.Thelim2itsofdetectionwere1μg/Lforsildenafiland015μg/Lforvardenafilatsignal2to2noiseratioof3.Themethodwithlittlesolventconsumptionmayprovidehighanalytepre2concentrationandexcel2lentsampleclean2up,anditisasensitiveandsuitablemethodforsimultaneousdeterminationoftheabovetwosubstancesinhumanplasma.Keywords:liquid2liquid2liquidmicroextraction;sildenafil;vardenafil;plasmahighperformanceliquidchromatography;西地那非和伐地那非是两种用于治疗勃起功能障碍的药物。但不正确服用这两种药物会引起一系列的副作用[1～3]。分析人血浆中的西地那非和伐地那非,有助于指导临床上合理用药,在法庭医学上也具有重要意义。Tracqui等[4]采用高效液相色谱和质谱联用技术(HPLC2MS测定了生物流体中的柠檬酸西地那非,李润锴等[5]采用毛细管电泳对西地那非进行了分析,Cooper等[6～9]采用HPLC测定了西地那非。但伐地那非的测定方法报道很少,同时测定这两种物质的方法更是少见。本文建立了同时分析人血浆中西地那非和伐地那非的方法。由于生物流体的组成复杂,检测前往往需要对生物流体进行预处理,以消除干扰和富集分析物。液2液萃取(LLE和固相萃取(SPE[10,11]作为两种经收稿日期:2005202222作者简介:张朝辉,女,硕士研究生.通讯联系人:马铭,女,教授,Tel:(07318872530,E2mail:mingma@hunnu.edu.cn.基金项目:科技部“十五”国家重大科技专项(No.2003AA2Z3515、湖南省自然科学基金资助项目(No.03JJY4009.第4期张朝辉等:液2液2液微萃取/高效液相色谱法测定人血浆中的西地那非和伐地那非・359・典的样品前处理过程,通常用于样品的分离和富集。但是,这两种方法都具有费时和有机溶剂消耗量大等缺点。近年来,液相微萃取(LPME技术作为一种新的样品前处理方法得到了蓬勃发展。1996年,Jeannot和Cantwell用25μL微量进样器抽取2μL012mol/L的盐酸溶液(作为接受相,将微量进样器固定在铁夹上,将其不锈钢针针尖浸入到有机溶剂中,小心按下微量进样器的活塞,使接受相在有机相中形成一个小液滴悬挂在针尖上,开启搅拌器。搅拌速度为600r/min,萃取40min后,小心拉回活塞,将接受相抽回微量进样器中,直接进样分析。首先提出了两相液相微萃取与气相色谱联用技术,用微量有机萃取剂直接进行气相色谱分析,获得了高灵敏度,但由于大多数有机溶剂与HPLC和CE的流动相不能很好地兼容[14],从而限制了LPME与HPLC和CE的联用。在此基础上提出了液2液2液三相微萃取技术,由于接受相是水溶液,解决了进样样品与HPLC和CE流动相的兼容问题,近几年在国外得到了蓬勃发展,但国内用该技术进行样品前处理的报道很少。与LLE和SPE相比,该技术消耗有Ma和Cantwell[15,16][12,13]机溶剂少,具有很高的料液、接受液体积比,富集效率高、简便、。本文利用液2液,考察了液2液2,并用高效液相色谱同时测定了人血浆中的西地那非和伐地那非,建立了一种准确、灵敏的测定人血浆中西地那非和伐地那非的方法。图1液2液2液微萃取装置图Fig.1Schematicillustrationoftheliquid2liquid2liquidmicroextraction(LLLMEsystem1.3色谱条件色谱柱采用HypersilC18柱(5μm,250mm×416mmi1d1(ThermoHypersil2Keystone,检测波1实验部分1.1仪器与试剂长292nm,进样量2μL。流动相采用350mL01025mol/L三乙胺,以磷酸调pH=3,用0145μm水膜过滤,与150mL乙腈混匀,脱气10min备用。Agilent1100液相色谱系统,由G1312A液相泵,G1316A柱温箱,G1315B二极管阵列检测器,7725手动进样阀和25μL微量进样器组成;HJ22磁力加热搅拌器;PHS23C型酸度计。枸橼酸西地那非购自湖南化学试剂公司(长沙,盐酸伐地那非购自当地药店。乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。实验用水为二次蒸馏水。流动相用0145μm的滤膜过滤并进行超声脱气。西地那非和伐地那非的标准储备液(10mg/L用去离子水配制而得。不同浓度的系列工作溶液由标准储备液稀释而得。健康人血浆从湖南中心血站购得,置于冰箱中于-40℃下冷冻保存(不超过三周。加样血浆溶液:取510mL血浆,加入计算量的西地那非和伐地那非,再以血浆稀释至10mL,于4℃冰箱中保存,保存时间不超过24h。以2mol/LNaOH溶液调节西地那非和伐地那非的工作溶液、2结果和讨论2.1实验原理在液2液2液微萃取体系中含有3个液相(如图1:料液相、有机相和接受相。萃取前,通过用氢氧化钠溶液调节料液相的pH值至12,使目标物去离子化,使西地那非和伐地那非在料液相中的溶解度降低,在有机溶剂中的溶解度增大,在搅拌的作用下,目标物被萃取进入有机相中。由于接受相的强酸性(012mol/L盐酸溶液,去离子化的西地那非和伐地那非的中性分子在有机相与接受相的界面上再次被离子化,进而被反萃取进入接受相。又因为液2液2液微萃取一般具有较高的料液相与接受相间的体积比,因此,有望获得较高的富集因子(富集因子(enrichmentfactor,EF是萃取结束后被分析物在接受相中的浓度和萃取开始前分析物在料液相的初始浓度之比。2.2萃取条件对萃取富集因子的影响2.2.1萃取溶剂加样血浆溶液的pH值至12,作为实验用的料液。1.2实验装置和方法液2液2液微萃取装置图见图1。在自制的萃取瓶中加入一个自制微型搅拌磁子和611mL、pH为12的料液,缓慢加入300μL甲苯(作为有机相,再萃取溶剂的选择必须符合3个条件。首先,中・360・色谱第23卷性的目标物分子在萃取溶剂中的溶解度要比在料液相中的溶解度大,但当目标物以离子形式存在时,它在有机溶剂中的溶解度又要比它在接受相中的溶解度小;其次,为了防止萃取过程中溶剂蒸发,要求溶剂有较低的挥发性;第三,为了保证在快速搅拌和较长的萃取时间内有机溶剂能稳定地平铺在料液相的上面,还要求有机溶剂的密度比水小。本文考察了苯、甲苯、邻二甲苯和对二甲苯4种萃取溶剂对萃取富集因子的影响,其结果见表1。表1有机溶剂对富集因子的影响Table1EffectoforganicsolventsontheenrichmentfactorOrganicsolvento2Xylenep2XyleneBenzeneTolueneEnrichmentfactors(foldsildenafilvardenafil当使用小体积的甲苯时可以获得较高的富集因子。这可能是由于甲苯的体积小,料液相和接受相之间的有机层薄,有利于目标分析物的传质。然而,当有机溶剂的体积小于300μL时,有机溶剂层太薄而加大了接受相微滴引入有机相的操作困难。因此实验中选择有机溶剂的体积为300μL。2.2.3接受相液滴大小考察了110,115,210,215μL4个不同接受相液滴大小对萃取富集因子的影响。结果(见图22b表明,随着接受相液滴体积的增大,萃取富集因子先增大后减小。当接受相为210μL012mol/LHCl时,为20μL。2.2.,增,所以搅拌可以促进传质过程,提高萃取效率,缩短平衡时间。图3表明了搅拌速度对所研究的分析物的富集因子的影响。可以看出,富集因子随搅拌速度的增加而增加。然而,当搅拌速度超过600r/min时,接受相微滴变得很不稳定。因此,在保证液滴稳定的前提下,搅拌速度选择为600r/min。18.833.470.582.854.996.4150.81911Stirringrate:500r/min;ext20伐地那非,富集因子,,由于伐地那非的极性较小,与有机溶剂的亲和性较强,因此更容易被萃取;以甲苯作萃取溶剂,能得到较高的富集因子。本研究选择甲苯作为萃取溶剂。2.2.2溶剂体积考察了溶剂体积分别为300,400,500和600μL时对萃取富集因子的影响。结果(见图22a表明图3搅拌速度对富集因子的影响Fig.3EffectofthestirringrateontheenrichmentfactorExtractiontime:20min.1.sildenafil;2.vardenafil.2.2.5萃取时间在其他萃取条件保持不变的情况下,考察了萃取时间(10～60min对西地那非和伐地那非富集因子的影响,结果见图4。可以看出,在40min的萃取时间内,富集因子随萃取时间的增长而增大。进一步延长萃取时间,西地那非的富集因子略有下降,这可能是因为少量的接受相溶解所致。为了保证最大的富集因子,折中处理将萃取时间定为40min。2.3加样血浆中西地那非和伐地那非的萃取血浆是一个复杂的生物流体,将血浆样品直接进样,一方面血浆中的共存组分可能干扰目标分析物的测定,另一方面方法的检测限高。图5是西地图2有机溶剂体积(a和接受相液滴大小(b对富集因子的影响Fig.2Effectsoftheorganicsolventvolume(aandthedropsizeofacceptorphase(bontheenrichmentfactorStirringrate:500r/min;extractiontime:20min.第4期张朝辉等:液2液2液微萃取/高效液相色谱法测定人血浆中的西地那非和伐地那非・361・表2。以加样血浆浓度为10和100μg/L的两个样品考察方法的精密度和回收率,结果见表3。由表2和表3可知,色谱峰面积在所考察的浓度范围内与浓度呈良好的线性关系,方法的精密度高,回收率介于8717%与9718%之间。说明该方法用于血浆中西地那非和伐地那非的测定,能获得较准确的结果。表2西地那非和伐地那非的线性回归方程、相关系数、线性范围和最低检测限Table2SummarizationofresultsofthecalibrationcurvesfordeterminingsildenafilandvardenafilAnalyteSildenafilRegressionequationy=142.42x+64.83y=344.+.r2LOD/(μg/L图4萃取时间对富集因子的影响Fig.4Effectoftheextractiontimeontheenrichmentfactor1.sildenafil;2.vardenafil..994310.5那非和伐地那非的标准溶液的色谱图(图52a和含有西地那非和伐地那非血浆的液2液2液微萃取样品的色谱图(图52b。对比图52a和b可知,样品经液2液2液微萃取后,谱图,而且经过液2液2,Vardenafil:peakx:,LOD:limitof:.-.0L.和相对标准偏差(n=5Table3Recoveriesandrelativestandarddeviationsofsildenafilandvardenafilinplasma(n=5AnalyteSildenafilVardenafilRelativestandarddeviationsRecoveries%10μg/L4.43.9100μg/L4.13.210μg/L100μg/L97.894.187.788.2参考文献:[1]McCulleyTJ,LuuJK,MarmorMF,FeuerWJ.Ophthalmo2logica,2002,216(6:455[2]HicklinLA,RyanC,WongDKK,HintonAE.JRSocMed,2002,95(8:402[3]ZhangJie,YangJiwei,ZhangWei.WorldClinicalDrug