不同炮制方法对泡囊草中托烷类生物碱含量的影响

不同炮制方法对泡囊草中托烷类生物碱含量的影响

1泡囊草的功能特性泡袋草系植物的泡袋草physochalenaphysaloid（l）g.don干燥的根是一种具有悠久历史的传统蒙药。主产于内蒙古自治区锡林郭勒阿巴嘎旗、呼伦贝尔鄂温克旗和乌兰察布市,为中华人民共和国卫生部药品标准(蒙药分册)收载的品种。蒙医一般在初夏植物生长繁茂期采全草,阴干,秋季地上部枯萎期挖根,去净泥土、晒干后采用奶制法或制膏法炮制后使用。1984年,中国医学科学院药物研究所陈鹭生、司德昭报道:在内蒙古自治区乌兰察布市调查采集泡囊草,经化学分析结果证明这种植物可以作为提取山莨菪碱的原料。其有效成分为山莨菪碱、莨菪碱、东莨菪碱及红古豆碱。由于泡囊草有大毒,蒙医常将泡囊草采用奶制法或制膏法炮制后使用,但缺乏规范的炮制工艺,为使泡囊草炮制工艺规范化,我们以泡囊草中托烷类生物碱的含量为指标,对泡囊草生品、奶制品和制膏制品中托烷类生物碱的含量变化进行了研究。为蒙药泡囊草炮制工艺的规范化和质量的可控性提供了科学的依据。2实验材料和设备2.1药品制品a/a泡囊草(蒙药混—好日苏,采于锡林郭勒阿巴嘎旗),枸橼酸、磷酸氢二钠、溴甲酚绿、三氯甲烷(天津市化学试剂三厂),硫酸阿托品标准品(批号:0041/9109中国药品生物制品检定所)。2.2仪器电子分析天平:ESJ200-4型(沈阳龙腾电子有限公司),紫外-可见分光光度计:岛津UV-2401PC型(日本)。3实验方法和结果3.1最佳工艺确定用泡囊草生药饮片制备①生品:净选泡囊草生品100g,备用。②奶制品:根据参考文献,从牛奶炮制泡囊草的正交实验设计中最佳优化工艺制得:取泡囊草生药饮片100g,加入牛奶200ml,浸泡闷透,60℃干燥。③煎膏制品:根据参考文献,从泡囊草煎膏炮制的正交实验设计中最佳优化工艺制得:取100g泡囊草生药材加水浸泡30min,每次加水600ml,煎煮3次,每次2h,合并提取液浓缩至膏状。3.2振摇加摇时间精密称取泡囊草生品、奶制品各5份,每份约1.0g,置具塞锥形瓶内,精密加入枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)25ml,振摇5分钟;另精密称取泡囊草煎膏制品适量,加水稀释至50ml(每毫升相当于原药材0.5g),精密吸取5份,每份2ml,置具塞锥形瓶内,水浴蒸干,精密加入枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)25ml,振摇5分钟,分别放置过夜,用干燥滤纸滤过,取续滤液,即得样品液。3.3测量中的成本效益3.3.1酸性染料染色泡囊草所含主要成分为托烷类生物碱,经酸水解后生成莨菪酸,故采用酸性染料溴甲酚绿染色后,在414nm波长处有特征吸收。据此特点,选择硫酸阿托品为对照品,采用分光光度法进行含量测定。3.3.2光谱扫描结果分别取硫酸阿托品对照溶液、泡囊草药材溶液经酸性染料染色后在200～800nm波长范围进行光谱扫描,结果见图1。从光谱图中可见,上述二溶液在波长414nm附近均有明显吸收,故选择414nm波长为测定波长。3.3.3枸杞酸盐的制备枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)的配制:按《中国药典》2005年版一部附录(XVD)甲液:取枸橼酸21g加水使溶解成1000ml,置冰箱中保存。乙液:取磷酸氢二钠71.63g加水使溶解成1000ml。取上述甲液61.45ml与乙液38.55ml混合,摇匀,即得。溴甲酚绿溶液(0.04%)的配制:称取溴甲酚绿0.02g,加上述枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)使溶解成50ml,摇匀,即得。3.3.4线性关系的考察精密称取120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品0.0266g,置250ml量瓶中,加蒸馏水使溶解至刻度,摇匀;精密量取1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml分别置分液漏斗中,各精密加枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)10ml,再精密加入0.04%溴甲酚绿溶液2ml,摇匀,用10ml三氯甲烷提取5分钟,待溶液完全分层后,分取三氯甲烷液,用三氯甲烷湿润的滤纸滤入25ml容量瓶中,再用三氯甲烷提取3次,每次5ml,依次滤入容量瓶中,并用三氯甲烷洗涤滤纸,滤入容量瓶中,加三氯甲烷至刻度。用分光光度计测定(《中国药典》2005年版一部附录VA)于414nm波长处测定吸收度。以吸收度对溶液浓度进行回归分析,结果浓度在4.256ml～12.768ml范围内呈良好的线性关系。回归方程Y=0.0528X-0.002r=0.99905。3.3.5枸杞酸钠缓冲液提取精密称取泡囊草样品中粉1.0g,置具塞锥形瓶内,精密加入枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)25ml,振摇5分钟,放置过夜,用干燥滤纸滤过,精密量取其续滤液1ml,分别置于分液漏斗中,各精密加枸橼酸—磷酸氢二钠缓冲液(PH4.0)1ml,再精密加入0.04%溴甲酚绿溶液2ml,摇匀,用10ml三氯甲烷振摇提取5分钟,待溶液完全分层后,分取三氯甲烷液,用三氯甲烷湿润的滤纸滤入25ml容量瓶中,再用三氯甲烷提取3次,每次5ml,依次滤入容量瓶中,并用三氯甲烷洗涤滤纸,滤入容量瓶中,加三氯甲烷至刻度。按上法测定吸光度,见表2。由结果可知,此方法精密度良好。3.3.6验项下的方法处理精密称取泡囊草样品中粉1.0g,按精密度试验项下的方法处理,按表3,分别于0、15、30、60min、120min、240min测定,结果表明:在0～4h样品溶液稳定性较好。3.3.7重复试验精密称取泡囊草样品中粉5份,每份1.0g,分别按精密度试验项下方法操作测定吸收度后,由结果可知,此方法重复性较好。见表4。3.3.8加标回收率试验取供试品试液(含量3.1854μg/ml)5份,每份精密量取1ml,精密加入硫酸阿托品对照品溶液(浓度为2.4844μg/ml)1ml(约相当于样品液含有量的80%)分别按精密度试验项下方法操作,测定每份含量,计算回收率,表5。结果表明:此方法回收率好。3.4紫外-可见分光光度法精密量取上述各样品液1ml,分别置于分液漏斗中,各精密加枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)10ml,再精密加入0.04%溴甲酚绿溶液2ml,摇匀,用10ml三氯甲烷振摇提取5分钟,待溶液完全分层后,分取三氯甲烷液,用三氯甲烷湿润的滤纸滤入25ml容量瓶中,再用三氯甲烷提取3次,每次5ml,依次滤入容量瓶中,并用三氯甲烷洗涤滤纸,滤入容量瓶中,加三氯甲烷至刻度。照紫外-可见分光光度法分别在414nm的波长处测定吸光度,计算含量,并将其与生品中含量进行比较。见表6。由表6数据可知,泡囊草经牛奶炮制和煎膏炮制后,其托烷类生物碱的含量较生品所降低。泡囊草经不同方法炮制后,托烷类生物碱含量变化规律为:生品>奶制品>煎膏制品。4含量测定方法的讨论4.1泡囊草经牛奶炮制和煎膏炮制,其托烷类生物碱的含量较生品均有所降低,其托烷类生物碱含量变化规律为:生品>奶制品>煎膏制品。4.2本文通过对泡囊草含量测定方法学的研究,为蒙药泡囊草中托烷类生物碱的含量测定提供了灵敏、准确、可行