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文档简介

组织培养常见问题

—褐变目录01褐变的概念02褐变产生的原因03褐变的影响因素04褐变的预防措施一、褐变的概念外植体在培养过程中自身组织从表面向培养基释放出褐色物质，外植体随之进一步变褐而死亡的现象。二、褐变的原因外植体在培养中体内的多酚氧化酶会被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散致使培养基变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后导致外植体变褐而死亡。酚类物质醌类物质组织代谢紊乱，死亡三、褐变的影响因素1、植物材料2、培养基成分3、培养条件三、褐变的影响因素1、植物材料（1）植物种类与基因型

木本>草本三、褐变的影响因素1、植物材料（2）外植体的生理状态、取材季节和部位成年期>幼龄期夏季>冬季老熟组织>幼龄幼嫩组织三、褐变的影响因素1、植物材料（3）外植体大小、受伤程度小>大切口大>切口小三、褐变的影响因素2、培养基成分无机盐浓度高>无机盐浓度低细胞分裂素水平高>细胞分裂素水平低三、褐变的影响因素3、培养条件光照强度强>光照强度弱培养温度高>培养温度低培养时间长>培养时间短如何防止褐变？四、褐变的预防措施1、选择合适的外植体分生能力强四、褐变的预防措施2、采用合适的培养基和培养条件无机盐成分、蔗糖浓度、植物生长物质水平适宜的温度、适当的黑暗处理四、褐变的预防措施3、使用抗氧化剂抗坏血酸、半胱氨酸、硫代硫酸钠、柠檬酸0.1%-0.5%的活性炭5~20mg/L的聚乙烯吡咯烷酮（PVP）四、褐变的预防措施4、及时连续转接在外植体接种后1~2天即转移到新鲜的培养基中，可以防止酚类物质在伤口积累过多，连续转接几次即可防止褐变.抑制褐变发生的措施也多种多样，但每种方法都有一定的适用范围

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