北方经济树种枝药用菌蜜环菌菌材培养的初步研究

北方经济树种枝药用菌蜜环菌菌材培养的初步研究

蜂蜜环菌是一种重要的经济因素。它尝起来很甜，含有大量的丝状细菌，用于子实体、细菌和蘑菇。它具有很高的药用价值。一些中药产品，如脑心舒、银蜜片等，已经被广泛应用于临床治疗中。蜂蜜环菌是中医学天麻和猪苓栽培中不可或缺的共生菌。当植物的索状体进入天麻或猪苓菌的体内，后者被消化，成为其独特的营养源。换句话说，蜂蜜环菌会分解木质素，并向天麻或猪苓提供营养营养。近年来天麻栽培生产发展迅速,培养蜜环菌菌材一般常用的树种为柞树。北方经济树种丰富,是苹果、山楂、枣、榛子的主要产区,每年修剪及轮伐的枝丫材数量惊人,为了更好的利用这些枝丫材,实现高效益林业循环经济,本试验选用这四种经济树种的枝丫材为蜜环菌菌材的培养材料,以常用的柞树枝条为对照,探讨不同枝丫材对蜜环菌菌索生长的影响,为实现北方经济树种枝丫材循环利用,扩大蜜环菌菌材种类提供参考。1材料和方法1.1林木生长分布山楂树枝苹和果树枝采自沈阳山楂国家野外观测研究站、枣树枝采自己辽宁朝阳、榛子树枝采自北京海淀区上庄镇、柞树枝(CK)采自辽宁抚顺。1.2蜂蜜环菌的菌株吉林农业大学食药用菌工程中心提供。1.3蜜环菌的制备分别取各树种的枝条(直径1.0cm左右),截成5cm长,分装于750ml罐头瓶内,加水刚好到瓶口,121℃高压灭菌2h,冷却后接入蜜环菌菌种,25℃避光培养,每处理10瓶。1.4环境细菌生长量测量每隔3d用直尺在瓶壁上划线,标记蜜环菌菌索生长最前端,取平均值。1.5酶活力测定及计算每隔8d取菌液,10000r/min,4℃离心10min,取上清液置冰箱中为待测粗酶液。以ABTS为底物3ml反应总体积中含有0.15mmol/L底物ABTS、0.09mol/LNaAc-HAc缓冲液、pH4.5的适量酶液,于30℃水浴中准确反应3min,测定420nm处的吸光值。酶活力计算以光密度增加0.01为一个酶活力单位(u/ml)。每处理取3个样本,每样本重复测定3次。2结果与分析2.1培养基菌索生长情况从表1可以看出,蜜环菌在枣树枝培养基中生长最慢,发满菌时间最长达到58d,菌索稀疏、纤细,且分枝少;而苹果树枝和榛子树枝树培养基菌索生长速度最快,菌发满瓶时间最短,分别为35d、34d,菌索浓密、纤细,且分枝多,发菌时间及菌索生长状态与柞树对照相当;山楂树枝、柞树枝培养基菌索生长速度中等,但山楂树枝发满菌时间分别为45d,而柞树枝培养基发满菌的时间36d,二者差异极显著,且在菌索表观上也有较大差异,山楂树枝培养基上蜜环菌稀疏、粗壮,且分枝少,而柞树枝培养基上蜜环菌菌索浓密、纤细,且分枝多。从蜜环菌菌索的生长速度和菌索形态上看,苹果树枝、榛子树枝可替代柞树枝作为培养蜜环菌的菌材。2.2培养基内漆酶活力变化蜜环菌胞外漆酶是蜜环菌次级生长代谢阶段产生的主要酶类,不同菌材不同培养时期蜜环菌胞外漆酶活力比较如图1所示。从图1可以看出,在培养8d时,枣树枝培养基内漆酶活性最低,随着培养时间延长,胞外漆酶活性逐渐升高,培养32d时枣树枝培养基内漆酶活性最高,达到209u/ml;山楂树枝及苹果树枝培养蜜环菌16d时漆酶活力下降,在培养24d时漆酶活力提高,而且苹果树枝培养基提高更快,此时已高于对照的柞树枝培养基,在培养32d时,二者漆酶活力与对照基本相当;而榛子树枝培养基的蜜环菌漆酶活力在培养16d时活力升高,但略低于对照,随着培养时间的延长漆酶活力提高不显著,在培养24d和32d时测得的漆酶活力与柞树枝的对照基本一致。从试验结果可看出,榛子树枝与柞树枝可能在硬度、养分组份含量上最为相似,其次为苹果树枝,这与蜜环菌菌索在不同菌材上的生长表现相一致。3结论和讨论3.1利用两种经济树种培养从蜜环菌菌索长势、性状表现上看,苹果树、榛子树与传统培养蜜环菌的柞树相近,蜜环菌菌索生长速度快、分枝多、生长浓密,可以利用这两种经济树种修剪下的枝丫作为培养蜜环菌菌材。蜜环菌生长良好,在伴栽天麻时可以节省菌种、提高产量,因而苹果树、榛子树修剪的枝丫替代柞树有望扩大天麻栽培材料来源,同时也可实现经济树种修剪枝条的循环利用。3.2增长两组经济树种的外漆酶活性蜜环菌是一种木腐菌,有较强的木质素分解能力,与其代谢过程中合成的木质素分解酶(如漆酶)有关。在蜜环菌发菌过程中,当菌丝体处于快速生长末期,培养基中可利用碳源含量较低时才有漆酶产生,用来分解木质素进行碳代谢。本试验中培养24d后,苹果树、榛子树枝培养基中蜜环菌胞外漆酶的变化与对照的柞树枝培养基相相类似,表明这两种经济树种枝条养分组份含量可能与柞树相近。试验中没有添加任何其他营养成分,蜜环菌一