梅毒的实验诊断

梅毒的实验诊断

及其方法学评价

梅毒的诊断必须依据病史，临床体征，实验室的检查综合分析。近年来随着性病病例的上升，以及梅毒皮疹的多样性和潜伏梅毒的存在，实验室诊断已显示其重要作用。

梅毒的实验室诊断一般包括三个方面：1、从病灶取材检查梅毒螺旋体。2、从血清中检查侵入机体后所产生的相应抗体。3、从病理组织切片上观察其病理特征的改变和（或）查见梅毒螺旋旋体。一、检查梅毒螺旋体抗原：

1、方法：检查梅毒螺旋体抗原是对于早期疑似梅毒感染者，在体内还没有出现相应抗体前，取病灶分泌物进行涂片检查。常见的方法有显微镜暗视野检查法；Fontana-Tribondean镀银染色法；姬姆萨Giemsa染色法；浓盐酸蒸汽显示法；单克隆免疫荧光法（DFI）；聚合酶链检测法（PCR）。2、方法及其评价：上述方法各有其特点，若镜检到梅毒螺旋体，在临床上可诊断为梅毒。具有快速，方便，易操作等特点。显微暗视野检查法本法已被世界卫生组织（WHO）指定为性病实验室必备项目之一。它是利用暗视野显微镜或荧光显微镜的暗视野装置进行检查；亦可用普通显微镜加装暗视野聚光器，若没有专门的聚光器，也可加装黑色的X光片包装纸，用剪刀剪成直径小于普通显微镜聚光镜直径，大约（0.8~1）CM，用少许镜油轻轻粘附于聚光镜头上，使光源之光线能从其周围透过即可进行应用。

取材的方法为用无菌棉签蘸取少量生理盐水轻轻洗去病灶表面污物，用盖玻片紧贴患处约30秒至1分钟，马上置于载玻片上滴加1至2滴生理盐水制片，放于暗视野显微镜下观察；若有一期硬下疳采样时，用生理盐水洗去表面污物后用钝刀或小号注射器刮取或抽取脓液涂片，加已预热盐水在玻片上制片置镜下检查。螺旋体在暗视野下呈白色，折光性较强，反差明显，形态如多个“S”字母相连，清晰可辩，在用温盐水制片时还可观察其运动。低倍镜下看到螺旋体运动活泼，呈现不停翻动的闪光白点，高倍镜下见到其似多个连接的S状形态及运动形式多呈蛇行运动。本法的缺点是与雅司螺旋体在形态上和运动方式上较难区别；与口腔及生殖器内的一些条件致病性螺旋体也难区分。若患者取材前1~2天已用抗菌素治疗，在病损处外用一些药物，如碘酊，乙醇，其他化学药物，可使其消失或形态发生改变，很可能见不到螺旋体。同时还应注意从口腔，咽喉及外阴部取材时有非致病性螺旋体的存在。

镀银染色法对于组织来讲有LEVOADITIS法和WARTHIN-STARRY法，在镜下螺旋体呈棕黑色而背景呈淡棕色，在组织切片中可见梅毒螺旋体的数量。本法试剂须现配现用，且配制较繁琐和一定的污染性，敏感性也较差。浓盐酸蒸汽显示法是用1%刚果红和37%浓盐酸，梅毒螺旋体被染成蓝色，好处是操作简单，试剂用量少，成本低，易于观察；缺点是显色时程度不易掌握，浓盐酸易烧伤皮肤。

免疫荧光染色法（DFI-TP）

原理是使用荧光标记的抗梅毒螺旋体单克隆抗体或多克隆抗体，检测患者组织液中梅毒螺旋体。其方法有直接法和间接法；直接法是将患者组织液标本涂片，片膜直径小于1cm，使其自然干燥，丙酮固10分钟，用已知抗梅毒螺旋体血清（一般用人或兔）经非致病螺旋体培养物吸收后再用异硫氰酸盐荧光素（FITC）标记，直接覆盖于标本上，经37摄氏度孵育30分钟彻底清洗，缓冲甘油封片镜检。间接法是把已经吸收处理好的已知抗梅毒螺旋体血清加在固定好的标本上，37摄氏度孵育30分钟彻底清洗，再加FITC标记的抗体（人或兔），孵育，彻底清洗，用缓冲甘油封片固定镜检；结果在荧光显微镜下可见呈现亮绿色螺旋体，以见到完整的螺旋体为阳性。最大优点是敏感性高，特异性强。因必须用荧光显微镜，加之荧光强度的观察以及某些有荧光淬灭作用物质如苯胺，酚，间苯二酚，硝基苯，卤化物的干扰，须避免此类物质污染，有鉴于此，难于在基层实验室推广。

PCR法

PCR法:在性病学研究领域中应用得较多，在临床上现国内暂停应用。PCR法是聚合酶链式反应的简称，其基本方法主要是两大步，一是引物的设计，二是循环扩增。PCR法的最大特点是特异性和敏感性都非常高，有作者提出特异性和敏感性均优于血清学方法，且PCR法对实验室内的环境如防尘，无菌，无化学药物污染，以及实验操作人员的技术和责任心要求相当高。

二、检查其侵入机体后产生的相应抗体梅毒螺旋体侵入机体后，全身各组织器官均可侵犯。病程具有长期性和潜伏性。机体对梅毒螺旋体感染可产生体液免疫和细胞免疫，机体持续梅毒螺旋体感染时才有免疫力。患者血清中有两种抗体，一种是特异性梅毒螺旋体抗体；一种是非特异性抗类脂质抗体，它可能是感染组织破坏而裂解出的一种类脂质，作为半抗原与螺旋体的蛋白质结合形成完全抗原后刺激机体产生的一种抗体。（一）非特异性抗类脂质抗体的检测1、方法：性病研究室试验（VDRL）；不加热血清反应素试验（USB）；快速血浆反应素试验（RPR）或TRUST；自动反应素试验（ART）；以及VDRL-CSF试验。

2、方法及其评价：上述方法都是检测血清中的抗类脂质抗体。主要变化在于针对抗原在不断改良，以及被测血清的灭活上；其原理大同小异，都只能用于梅毒的初筛和从滴度上反映患者感染梅毒螺旋体的程度和疗效观察；在实验中也可防止“前带现象”的产生。现就常用的几种方法进行评价。

性病研究室试验（VDRL）是华斯曼（WASSERMANN1906）和MICHELIS最早建立的原型补体固定试验和絮状反应的基础上逐步改良而来。VDRL所用抗原：从牛心中提取的有效成分：心磷脂，卵磷脂，胆固醇。本方法作为梅毒的初筛试验，即定性又定量；亦可用于检测脑脊液，即VDRL-CSF，对神经性梅毒有诊断价值。

不加热血清反应素试验（USR）；所用抗原为改良的VDRL抗原，经稀释离心后于沉淀中加入EDTA-Na2，氯化胆碱，防腐剂。其中EDTA-Na2可使抗原半年有效，氯化胆碱起化学灭活作用，使待测血清不必加热灭活，抗原不必每天现配。4-8摄氏度冰箱可保存6个月。主要用于梅毒感染的初筛试验。快速血浆（清）反应素试验（RPR或TRUST）：特点是所用抗原与USR相同，与抗原中加入活性胶体碳微粒或甲基胺红标记抗原，在特制的圆凹形纸卡上进行抗原抗体反应。RPR阳性可见黑色的絮状凝集颗粒；TRUST阳性可见红色的絮状凝集颗粒。

上述方法的优点是不须显微镜，肉眼就能观察，直观性强；操作简单，出结果快，特别适合普查和婚检。其敏感性在梅毒病程的早期阶段，各种血清反应中以RPR或TRUST最为敏感。有文献称：RPR对初期梅毒病灶出现1-2周的阳性率为53~83%；二期梅毒的阳性率可达100%；晚期梅毒为58~85%，经药物治疗后血清学试验可转阴；胎传梅毒阳性率为80~100%。其特异性为RPR或TRUST的滴度大于1:8时，要考虑有生物学真阳性和生物学假阳性的存在；前者主要见于与梅毒螺旋体同属的一些螺旋体感染，如品他，雅司螺旋体等；后者主要见于一些急性发热性疾病和自身免疫性疾病，如风疹，麻疹，传染性单核细胞增多症，上呼吸道感染，活动性肺结核，亚急性细菌性心内膜炎，红斑狼疮，麻醉及海洛因成瘾者。另外妊娠及0.4%的孕妇也可造成。凡是RPR或TRUST滴度小于1：8者，且是第一次查血RPR或TRUST，建议都须作确证试验以明确诊断，减少误诊的发生。另外也要防止“前带现象”造成假阴性的发生。近些年有一种较新的商品试剂胶体金试条示也可作为梅毒的初筛试验，有作者报道[7]其特