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有机溶剂沉淀法制作人：蒋益德学号：1109080014日期：2013.12.25教学目标1.说出有机溶剂沉淀法的原理2.说出有机溶剂沉淀时需具备哪些条件

定义向水溶液里加入一定量亲水性有机溶剂，降低溶剂的溶解度，使其沉淀析出的分离纯化方法谓之“有机溶剂沉淀法”。一·原理其机理有二。（一）亲水性有机溶剂加入溶液后降低了介质的介电常数，溶质分子之间的静电引力增加，聚集形成沉淀。根据库伦公式：带电质点间的静电作用力在质点电量不变，质点间距离不变的情况下与介质的介电常数成反比。一.原理（2）水溶性有机溶剂本身的水合作用降低了自由水的浓度，压缩了亲水溶质分子表面原有水化层的厚度，降低了他的亲水性，导致脱水凝集。以上两个因素相比较，脱水作用可能较静电作用占更主要的地位。常用的沉淀用溶剂乙醇、丙酮的介电常数都较低，是最常用的沉淀用溶剂。2.5mol/L甘氨酸的介电常数很大，可以做蛋白质等生物高分子溶液的稳定剂。有机溶剂沉淀生物高分子的特点是：分辨率高于盐析；因溶剂沸点较低，除去及回收方便。但有机溶剂沉淀法比盐析法易使蛋白质变性失活。二.操作条件的控制

（一）溶剂选择沉淀用有机溶剂的选择主要考虑以下几个方面的因素：（1）介电常数小，沉淀作用强。（2）对生物分子的变性作用小。（3）毒性小，挥发性适中。（4）沉淀用溶剂一般需能与水无限混溶，一些与水部分混溶或微溶的溶剂如氯仿、乙醚等也有使用。乙醇，由于沉淀作用强，沸点适中，无毒等优点，广泛用于沉淀蛋白质、核酸、多糖等生物高分子及氨基酸等。丙酮，沉淀作用大于乙醇。用丙酮代替乙醇作沉淀剂一般可以减少用量1/4到1/3。但沸点较低，挥发损失大，对肝脏有一定毒性，着火点低等缺点应用不如乙醇广泛。甲醇，沉淀作用与乙醇相当，但对蛋白质的变性作用比乙醇，丙酮都小，由于口服强毒，限制了他的使用。其他溶剂，如二甲基甲酰胺、二甲基亚枫，也可以作沉淀剂用。(二)沉淀时温度控制有机溶剂沉淀时，温度是重要的因素，有机溶剂存在下，大多数蛋白质的溶解度随温度降低而显著的减少，因此低温下（最好低于0）沉淀的完全。有机溶剂会引起蛋白质分子空间结构变形，如果这种变形超过一定程度，就会导致蛋白质变性，变性的危险随温度升高而增大，为了防止蛋白质变性，应在低温下沉淀。实际操作中，还要考虑有机溶剂与水混合时热量的驱散。因此，整个操作过程需要高度冷却。一般先将蛋白质溶液冷

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