第七节副溶血性弧菌

第七节副溶血性弧菌第1页，课件共18页，创作于2023年2月第七节、副溶血性弧菌检验一、生物学特性1、形态与染色

革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌或稍弯曲弧菌

，有时呈棒状、甚至球状、丝状等。一般两极浓染。单端鞭毛，长度约为菌体的2倍，运动活泼。无芽胞、无荚膜。第2页，课件共18页，创作于2023年2月2、培养特性本菌对营养要求不高，在普通的琼脂或蛋白胨水中均可生长需氧特别强，在厌氧条件下生长非常缓慢嗜盐，在2~３%NaCL培养基中生长最好，无盐或食盐>10%不能生长。最适温度36℃，pH7.5~7.8在肉汤、蛋白胨水等培养基中呈现浑浊，表面形成菌膜在固体培养基上菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光滑，较湿润，边缘不整齐。在血平板上可见溶血环。

第3页，课件共18页，创作于2023年2月3、生化特性分解葡萄糖产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖。H2S（－）、V-P（－）、靛基质（吲哚试验）（+）、精氨酸（－）甲基红（+）、赖氨酸（＋）、溶血＋/-第4页，课件共18页，创作于2023年2月V.P反应检测某种细菌分解碳水化合物产生乙酰甲基甲醇[CH3CH（OH）COCH3]的反应。通常把细菌培养在葡萄糖蛋白胨液体培养基中，加入强碱可见显有红色。此反应用于细菌的鉴别第5页，课件共18页，创作于2023年2月1、吲哚试验(indoltest)细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。色氨酸→吲哚（无色）＋对二甲基氨基苯甲醛→玫瑰吲哚（红色，+大肠杆菌）不产吲哚（无色，-产气杆菌）试验方法：取培养24h培养液，先加入少量乙醚，摇动试管以提取和浓缩吲哚，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入吲哚试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。应用：用于肠道杆菌的鉴定6第6页，课件共18页，创作于2023年2月2、尿素酶（Urease，脲酶）试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。酚红：黄色→红色（+普通变形杆菌）黄色（-大肠杆菌）试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇匀，于36±1℃培养，观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。培养24h左右，观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。7第7页，课件共18页，创作于2023年2月3、氨基酸脱羧酶的测定

有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出，生成胺类和二氧化碳。此反应在偏酸的条件下进行，当培养基含胺类时呈碱性反应，使指示剂变色。

接种与观察结果：用幼龄培养液作为菌种，直接接种。接种后封油，对照管与测定管同时接种封油。肠肝菌科的细菌于37℃培养4天观察。当指示剂（溴甲酚紫）呈紫色或带红色调的紫色者为阳性，呈黄色者为阴性。对照管应呈黄色反应。8第8页，课件共18页，创作于2023年2月4、三糖铁（TSI）琼脂试验试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。培养基：乳糖：蔗糖：葡萄糖=10：10：1；加有酚红本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。9第9页，课件共18页，创作于2023年2月O抗原（菌体抗原）：O1~O1313种。H抗原（鞭毛抗原）：K抗原（荚膜抗原）：K1~K7165种。（缺编：K2、K14、K17、K35、K62）血清分型：所有副溶血性弧菌的H抗原均相同，但是O抗原和K抗原存在差异，以13种O抗原及65种K抗原将其分为13个群和845个型。4、抗原结构结构第10页，课件共18页，创作于2023年2月二、致病性1、致病因素★侵袭力：活菌(105~107/g)，可使人致病.★产生溶血毒素：内毒素，成分是脂多糖，100℃30min不被破坏。2、媒介食品

主要是海产品（鱼、虾、蟹、蛤等），含盐量较高的食物亦可带菌。3、所致疾病

食物中毒、急性胃肠炎、败血症等。

第11页，课件共18页，创作于2023年2月二、致病性4、预防措施（1）海产品加工前用消毒水冲洗干净，接触过海产品的厨具、容器和手及水池等均要洗刷干净，以免污染食品（2）若要吃凉拌菜应充分洗净，现在沸水中烫后，加醋，放置10min后，再放其他调味剂（3）严格执行生熟食品分开制度（4）剩饭菜，在食用前要回锅热透

第12页，课件共18页，创作于2023年2月1、检验标准：GB/T4789.7-2008副溶血性弧菌检验2、培养基和试剂培养基：

3％氯化钠碱性蛋白陈水〔APW)、硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂

3％氯化钠胰蛋白胨大豆〔TSA）琼脂3％氯化钠三糖铁（TSI

）琼脂嗜盐性试验培养基

3％氯化钠甘露醇试验培养基3％氯化钠赖氨酸脱狡酶试验培养基3％氯化钠MR-VP

培养基

氯化钠结晶紫增菌液试剂：氧化酶试剂、革兰氏染色液、革兰氏染色液、3%氯化钠溶液、V-P试剂、甲基红试剂、靛基质试剂等。三、检验方法第13页，课件共18页，创作于2023年2月3、检验程序（1）样品处理及培养定量测定：样品用3%氯化钠蛋白胨水10倍连续稀释后取三个稀释度各接3支含有该培养基的平皿，培养计数。定性试验（2）分离培养：首先将样品接种到氯化钠琼脂平板和ss琼脂平板各一个，培养18-24h观察。也可增菌液直接分离。（3）可以菌落培养：挑取上述可疑菌落，转种3.5%氯化钠三糖铁斜面，观察结果（下部变黄，有动力，不产H2S）（4）涂片镜检：挑取可疑培养物镜检。（5）嗜盐性试验：将上述培养物接种无盐胨水、7%、11%氯化钠胨水。（6）生化试验：V-P、靛基质、甲基红试验等（7）动物实验：（选做）第14页，课件共18页，创作于2023年2月初步鉴定：

挑取纯培养的单个可疑菌落，进行副溶血性弧菌的初步鉴定：副溶血性弧菌：氧化酶试验：阳性。涂片镜检：G-，棒状、弧状、卵圆状等多形态，无芽胞，有鞭毛。3％氯化钠三糖铁斜面：底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深，有动力。嗜盐性试验：分别接种于不同氯化钠浓度的胰胨水中培养，在无氯化钠和10％氯化钠的胰胨水中不生长或微弱生长，在7％氯化钠的胰胨水中生长旺盛。第15页，课件共18页，创作于2023年2月生化试验：分别接种各类生化培养基，培养后观察结果。或API

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生化鉴定试剂盒或VITEK全自动微生物检测系统鉴定。生化性状符合下表要求时，为副溶血性弧菌。确定鉴定:项目结果项目结果革兰氏染色镜检阴性，无芽孢乳糖－氧化酶＋硫化氢－动力＋赖氨酸脱梭酶＋蔗糖－V-P－葡萄糖＋ONPG－甘露醇＋分解葡萄糖产气－

表副溶血性弧菌